基于规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白技术检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA方法的建立

目的建立一种基于规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas13a)的乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)检测方法。方法提取2017年6月至2020年10月于首都医科大学附属北京佑安医院就诊的4例乙型肝炎患者肝脏总DNA后,使用HindⅢ内切酶和质粒安全性ATP依赖DNA酶(PSAD)分别进行酶切;根据松弛环状DNA(rcDNA)和cccDNA的结构差异,设计特异性扩增HBV cccDNA的引物,对酶切后的产物进行滚环扩增(RCA)和PCR扩增;并筛选crRNA,建立基于CRISPR/Cas13a技术的HBV cccDNA检测新方法。结果利用α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)和HBV表面抗原(HBsAg)引物对双重酶切后的产物进行扩增,验证产物中HBV基因组的存在;利用HBV cccDNA和HBV rcDNA引物对PSDA酶切后的产物扩增,验证了产物中只存在HBV cccDNA;利用RCA后的阳性样本作为模板梯度稀释,然后进行PCR扩增转录后使用CRISPR/Cas13a检测,计算出检测下限为10拷贝/μl。结论本研究建立了RCA-PCR-CRISPR-Cas13a的新型检测方法,可对HBV cccDNA进行高灵敏度和高特异性检测,为乙型肝炎患者抗病毒治疗评估、治疗终点的确定以及调整治疗方案提供了有效的监测手段。     

生物可降解食管支架的研究进展

食管狭窄直接影响患者生存质量,严重威胁患者生命安全。食管支架,尤其是生物可降解食管支架的应用为食管狭窄患者带来了福音。生物可降解食管支架包括SX Ella-BD支架、聚乳酸支架及聚乳酸己内酯共聚物支架。本文对生物可降解食管支架的重要性和必要性及其研究进展进行综述。     

生物可降解性食管内支架

食管狭窄是消化系统较为常见的疾病.自膨式金属内支架自1983年Frimberger[1]首次用于治疗食管狭窄以来,因其操作简单、安全,短期疗效显著,可延长患者生存期,目前已被临床广泛应用.     

生物可降解性食管内支架

食管狭窄是消化系统较为常见的疾病。自膨式金属内支架自1983年Frimberger首次用于治疗食管狭窄以来，因其操作简单、安全，短期疗效显著，可延长患者生存期，目前已被临床广泛应用。传统的不可降解食管内支架主要适用于恶性狭窄的姑息治疗以及食管气管瘘患者，主要并发症为疼痛、支架移位、上消化道大出血、再狭窄、气管狭窄等，而良性狭窄放置该类支架后并发症发生率极高，     

聚乳酸己内酯共聚物食管支架的动物实验初探

目的 探索生物可降解食管支架置入动物食管的可行性及安全性。方法 选取8只中华田园犬,在全麻条件下,实施开胸手术,置入自主研发并取得专利的聚乳酸己内酯共聚物〔poly (ε-caprolactone-co-DL-lactide) copolymer, PCLA〕生物可降解性食管支架,制作食管狭窄模型,术后1、3、6月分别行麻醉胃镜检查观察支架吸收情况。手术后第6月处死实验犬,取其内脏组织行组织病理学分析,观察PCLA 生物可降解食管支架是否对其造成病理学影响。手术前及手术后6月分别抽取实验犬静脉血进行血常规、生化检测,了解PCLA食管支架代谢物是否对上述指标有不良影响。 结果 通过麻醉胃镜观察,术后1月7只实验犬食管支架支撑塑形效果尚存,术后3月可见支架降解、失去支撑塑形作用,术后6月支架降解、变形明显、局部缺损,取出支架轻捻即成粉末。食管、心、肝、脾、肺、肾等内脏病理学改变轻微。实验犬手术前后血常规、血生化指标差异无统计学意义（\P>0.05）。1只实验犬术后2周并发血气胸、死亡、实验中止。 结论 PCLA生物可降解食管支架的生物相容性良好,降解时间适宜,支撑作用好,无明显毒副作用,其外形设计、置入方法、固定方式等有待进一步研究和改进。     

hTERT启动子特异驱动IL-24重组腺病毒的包装及鉴定

目的 包装并鉴定人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子特异驱动白介素-24（IL-24）的重组复制缺陷型腺病毒.方法 全基因合成优化后的hTERT启动子,插入质粒pGL3-basic的多克隆位点（pGL3-phTERT）;从人外周血单核细胞扩增IL-24,插入pGL3-phTERT质粒的hTERT启动子下游获得pGL3-phTERT-IL24;随后将phTERT-IL24插入pShuttle中间质粒,使用AdEasy^TM Adenoviral Vector System包装Ad-phTERT-IL24重组腺病毒;同时包装CMV启动子驱动IL-24的腺病毒载体为阴性对照（Ad-CMV-IL24）,以空载腺病毒Ad作为空白对照.用20 MOI重组腺病毒感染SGC-7901、MKN-45、HF细胞,采用PCR及Western blot检测IL-24在RNA及蛋白水平的表达.结果 成功包装Ad-hTERT-IL24重组腺病毒.感染Ad-hTERT-IL24后,hTERT阳性肿瘤细胞内IL-24表达显著上调,但hTERT阴性的HF细胞则无IL-24表达;感染阴性对照Ad-CMV-IL24后,hTERT阳性或阴性细胞内均有IL-24表达,感染空白对照Ad后,hTERT阳性或阴性细胞内均无IL-24表达.结论 Ad-hTERT-IL24腺病毒载体可有效介导IL-24特异表达于hTERT阳性肿瘤细胞内.     

基于微滴式数字PCR技术对乙型肝炎低病毒血症患者血浆HBV DNA精准检测

目的 建立基于微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)技术检测HBV DNA的方法,并实现对乙型肝炎低病毒血症患者HBV DNA的精准检测.方法 构建pUC57-HBV质粒作为阳性对照质粒,设计合成HBV DNA ddPCR引物及探针,以梯度稀释的阳性对照质粒为模板进行ddPCR检测,完成...     

生物可降解性食管内支架

食管狭窄是消化系统较为常见的疾病.自膨式金属内支架自1983年Frimberger[1]首次用于治疗食管狭窄以来,因其操作简单、安全,短期疗效显著,可延长患者生存期,目前已被临床广泛应用.     

生物可降解性食管内支架

食管狭窄是消化系统较为常见的疾病.自膨式金属内支架自1983年Frimberger[1]首次用于治疗食管狭窄以来,因其操作简单、安全,短期疗效显著,可延长患者生存期,目前已被临床广泛应用.     

2例舌癌皮瓣移植修复术后谵妄的分析和护理

<正>舌癌切除皮瓣移植修复术,利用皮瓣修复舌缺损,尽可能恢复舌的外形,最大程度保留舌的生理功能,目前已成为临床舌癌病人主要的手术方式之一。术后谵妄是指以手术为主要原因,在病人手术麻醉清醒后数日内表现出的认知能力下降以及精神注意障碍等症状的精神紊乱状态,常伴有认知障碍或精神障碍,又称术后认知功能障碍[1]。谵妄主要表现为意识紊乱如兴奋、躁动、胡言乱语、认知和定向障碍以及睡眠障碍(睡眠-觉醒周期紊乱)等[2]。术后谵妄通常发生在术后的1～7 d内