负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒对人肝癌细胞株增殖的影响

目的 包装负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒(Ad-miR149),并检测其对人肝癌细胞株增殖的影响.方法 全基因合成microRNA-149前体核苷酸序列,插入腺病毒穿梭质粒的多克隆位点,随后与包装质粒共转染人胚肾293细胞,包装负载microRNA-149的复制缺陷型腺病毒;采用MMT方法检测Ad-miR149对人肝癌细胞株增殖的影响.结果 成功包装负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒,采用倍比稀释法检测病毒滴度为5× 109 pfu/ml.采用电子显微镜技术,观察到HEK293细胞中大量包装病毒颗粒.采用PCR扩增,Ad-miR149可获得腺病毒及microRNA-149特异片段,而对照Ad-LacZ只能扩增出腺病毒特异片段;采用MTT方法发现,Ad-miR149可显著抑制肝癌细胞株增殖.结论 成功包装负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒并初步证实其对肝癌细胞增殖的抑制作用.     

负载hTERT调控相关miR-138慢病毒的包装及鉴定

目的:构建hTERT(人端粒酶逆转录酶)调控相关miR-138慢病毒表达载体.方法:化学合成miR-138前体序列,连接到包含U6启动子及GFP(绿色荧光蛋白)报告基因的慢病毒载体pGCL-GFP中,获得重组质粒,经双酶切和测序鉴定后,与慢病毒包装质粒pHelper 1.0及pHelper 2.0共转染至HEK 293T细胞包装病毒,并对病毒进行鉴定.结果:双酶切和测序结果证实miR-138前体核苷酸链序列捕入正确,包装的慢病毒滴度达7×107TU/ml;包装成功的慢病毒可有效增加感染细胞内miR-138的表达丰度,并可下调hTERT表达水平.结论:成功包装并鉴定人miR-138慢病毒表达载体.     

树状串联hTERT表位肽负载mDC疫苗体外激发抗瘤免疫应答的效应研究

目的通过树状串联hTERT表位肽的髓样树突状细胞(mDC)递呈,刺激同源淋巴细胞,探索一种更优的肿瘤免疫治疗方法。方法人工固相合成4分支的树状串联hTERT表位肽(MAP)及其各分支单肽,免疫荧光检测hTERT的表达情况,免疫磁珠分选mDC,尼龙毛柱纯化T细胞,ELISA检测mDC的IL-12p70和淋巴细胞的(LC)TNF-α、IFN-γ分泌量,流式细胞技术检测mDC、LC的相关表面分子以及效应性T细胞对HLA-A2型肿瘤A549、MDA-MB-231和SW480的杀伤率,并作统计学分析。结果所有肿瘤细胞都表达hTERT,且胞核大于胞浆;MAP和混合单肽对3种肿瘤细胞都有杀伤效应,且MAP的杀伤效应大于混合单肽,有统计学差异。结论人工合成hTERT的MAP肽通过mDC能足够强的激活同源淋巴细胞,在肿瘤疫苗的研发中有重要意义。     

miR-29在胃癌患者血清中的表达及其对预后的影响

目的 观察胃癌患者术前、术后血清标本中miR-29的表达情况及其与预后的关系,探讨胃癌患者血清中miR-29的检测在胃癌早期诊断及预后判断中的价值.方法 采用实时荧光定量PCR技术检测46例胃癌患者手术前后及30例健康成年人血清中miR-29的表达水平.结果 胃癌患者血清中miR-29表达水平显著低于健康成年人;胃癌患者术后血清中miR-29表达水平较术前上调,且上凋水平越高预后则越佳.结论 miR-29在血清中的表达水平可作为胃癌早期诊断及预后判断的miRNA指标.     

参芪扶正注射液联合化疗治疗恶性肿瘤的临床研究

目的比较参芪扶正注射液联合化疗与单纯化疗治疗恶性肿瘤的临床疗效及不良反应。方法入选的62例患者随机分为两组,观察组32例,采用参芪扶正联合化疗,平均化疗5.7周期。对照组30例,单纯化疗,平均化疗5.6周期。结果观察组完全缓解（CR）3例,部分缓解（PR）12例,稳定（NC）11例,进展（PD）6例,总有效率46.9%。对照组CR 1例,PR 9例,NC 11例,PD 9例,总有效率33.3%。治疗组与对照组比较,治疗组T细胞亚群CD3、CD4和CD4/CD8比值明显升高,差异有显著性（P〈0.01）。治疗组生活质量较对照组明显改善。结论参芪扶正注射液联合化疗治疗恶性肿瘤可以减轻化疗的不良反应,使患者化疗依从性更好,增强机体的免疫功能,改善患者生活质量。     

hTERT启动子特异驱动IL-24重组腺病毒的包装及鉴定

目的 包装并鉴定人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子特异驱动白介素-24（IL-24）的重组复制缺陷型腺病毒.方法 全基因合成优化后的hTERT启动子,插入质粒pGL3-basic的多克隆位点（pGL3-phTERT）;从人外周血单核细胞扩增IL-24,插入pGL3-phTERT质粒的hTERT启动子下游获得pGL3-phTERT-IL24;随后将phTERT-IL24插入pShuttle中间质粒,使用AdEasy^TM Adenoviral Vector System包装Ad-phTERT-IL24重组腺病毒;同时包装CMV启动子驱动IL-24的腺病毒载体为阴性对照（Ad-CMV-IL24）,以空载腺病毒Ad作为空白对照.用20 MOI重组腺病毒感染SGC-7901、MKN-45、HF细胞,采用PCR及Western blot检测IL-24在RNA及蛋白水平的表达.结果 成功包装Ad-hTERT-IL24重组腺病毒.感染Ad-hTERT-IL24后,hTERT阳性肿瘤细胞内IL-24表达显著上调,但hTERT阴性的HF细胞则无IL-24表达;感染阴性对照Ad-CMV-IL24后,hTERT阳性或阴性细胞内均有IL-24表达,感染空白对照Ad后,hTERT阳性或阴性细胞内均无IL-24表达.结论 Ad-hTERT-IL24腺病毒载体可有效介导IL-24特异表达于hTERT阳性肿瘤细胞内.     

胃癌组织中miR-29的表达及其临床意义

目的:研究胃癌组织中miR-29的表达情况及其与临床病理特征和预后的关系。方法:收集2005年至2010年中国人民解放军第324医院收治的进展期胃癌113例患者的手术标本,定量PCR检测胃癌组织及癌旁组织内miR-29的表达,并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果:胃癌组织内miR-29的表达显著低于对应的癌旁组织(2.62±1.17vs3.14±1.70,P=0.006),伴淋巴结转移的胃癌患者低表达miR-29百分率显著高于无淋巴结转移组(58.9%vs32.5%,P=0.007),miR-29低表达胃癌患者中位生存率显著低于miR-29高表达者(33.0vs44.0个月,P=0.013)。结论:胃癌组织低表达miR-29,miR-29有可能成为胃癌的预后判断指标及治疗靶标。     

miR-29在胃癌中的表达及其与微血管密度的相关性

[目的]观察miR-29在胃癌中的表达及其与微血管密度（MVD）的关系。[方法]采用实时荧光定量PCR技术检测113例胃癌组织及30例正常胃黏膜组织中miR-29的表达,利用CD34指标检测胃癌组织内MVD。[结果] miR-29在胃癌组织内的相对表达量显著低于正常胃黏膜组织（2.62±1.17vs3.31±1.18,t=2.897,P=0.004）。胃癌组织内miR-29表达水平与MVD值呈负相关（r=-0.587,P〈0.05）。[结论] miR-29低表达可促进胃癌内微血管形成,是一个潜在的抑癌miRNA。     

ｍｉＲ-２９在胃癌中的表达及其临床意义

目的　观察胃癌组织中ｍｉＲ-２９的表达情况及其与年龄、性别、分化程度、淋巴结转移、ＴＮＭ分期和预后的关系,探讨ｍｉＲ-２９在胃癌中表达的临床意义及其价值。方法　收集胃癌手术标本,采用Ｔｒｉｚｏｌ试剂抽提总ＲＮＡ,采用实时荧光定量ＰＣＲ技术检测８６例胃癌组织中ｍｉＲ-２９的表达水平,并对所有病例进行随访。结果　有淋巴结转移的胃癌患者ｍｉＲ-２９低表达的比例显著高于无淋巴结转移组（５９.６％ ｖｓ．２５.０％,Ｐ＝０.００４）,Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者ｍｉＲ-２９低表达的比例显著高于Ⅲ、Ⅳ期患者（６３.８％ ｖｓ．４０.０％,Ｐ＝０.０２９）,ｍｉＲ-２９与年龄、性别、分化程度无关。４３例ｍｉＲ-２９低表达胃癌患者的中位生存期为３５.０月,３年生存率为３９.６％;４３例高表达者的中位生存期为４４.０月,３年生存率为６６.１％,两组差异显著（Ｐ＝０.００７）。结论　ｍｉＲ-２９在胃癌组织中高表达能抑制肿瘤淋巴结转移进而改善预后,可作为胃癌的预后判断指标及治疗靶标。