基于规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白技术检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA方法的建立

目的建立一种基于规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas13a)的乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)检测方法。方法提取2017年6月至2020年10月于首都医科大学附属北京佑安医院就诊的4例乙型肝炎患者肝脏总DNA后,使用HindⅢ内切酶和质粒安全性ATP依赖DNA酶(PSAD)分别进行酶切;根据松弛环状DNA(rcDNA)和cccDNA的结构差异,设计特异性扩增HBV cccDNA的引物,对酶切后的产物进行滚环扩增(RCA)和PCR扩增;并筛选crRNA,建立基于CRISPR/Cas13a技术的HBV cccDNA检测新方法。结果利用α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)和HBV表面抗原(HBsAg)引物对双重酶切后的产物进行扩增,验证产物中HBV基因组的存在;利用HBV cccDNA和HBV rcDNA引物对PSDA酶切后的产物扩增,验证了产物中只存在HBV cccDNA;利用RCA后的阳性样本作为模板梯度稀释,然后进行PCR扩增转录后使用CRISPR/Cas13a检测,计算出检测下限为10拷贝/μl。结论本研究建立了RCA-PCR-CRISPR-Cas13a的新型检测方法,可对HBV cccDNA进行高灵敏度和高特异性检测,为乙型肝炎患者抗病毒治疗评估、治疗终点的确定以及调整治疗方案提供了有效的监测手段。     

基于微滴式数字PCR技术对乙型肝炎低病毒血症患者血浆HBV DNA精准检测

目的 建立基于微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)技术检测HBV DNA的方法,并实现对乙型肝炎低病毒血症患者HBV DNA的精准检测.方法 构建pUC57-HBV质粒作为阳性对照质粒,设计合成HBV DNA ddPCR引物及探针,以梯度稀释的阳性对照质粒为模板进行ddPCR检测,完成...     

健康丞献美丽燕随——记丞燕大型健康生活展

2007年7月28日,丞燕国际机构(上海)总公司沈阳分公司,在太原金港大酒店举办了一场主题为"健康‘丞’献美丽‘燕’随"的大型健康生活展。此次生活展接待来宾500余人次,其中既有丞燕的老顾客也有刚刚结识不久的新朋友,他们中有的人专程从其它城市赶来,目的是答谢丞燕给自己的生活带来的改变,还有一些人是怀着好奇的心,专门来了解丞燕到底有什么"魔力",让那么多接触过她的人赞不绝口。     

健康丞献美丽燕随——记丞燕大型健康生活展

2007年7月28日,丞燕国际机构(上海)总公司沈阳分公司,在太原金港大酒店举办了一场主题为"健康'丞'献美丽'燕'随"的大型健康生活展.