福氏2a志贺菌MarA蛋白纯化复性及活性检测

目的 纯化、复性志贺菌MarA蛋白并分析其生物学活性.方法 将构建好的BL21大肠埃希菌工程菌经异丙基-β-D-硫代-乳糖苷(IPTG)诱导,His-tag形式表达MarA融合蛋白(约21ku),采用超声波破碎细菌,提取包涵体用高浓度尿素裂解,经镍柱亲和层析纯化,纯化后的蛋白质在小分子保护剂及还原型谷胱甘肽(GSH)/氧化型谷胱甘肽(GSSG)的存在下对融合蛋白进行复性.用凝胶薄层扫描法测纯度.结果 从融合蛋白包涵体中获得纯度达90%以上的目的 蛋白,免疫蛋白印迹试验结果显示,复性后的MarA融合蛋白能与抗福氏志贺菌抗体发生特异性结合.结论 成功建立有效纯化融合蛋白包涵体His-MarA的方法.     

热处理对体外培养正常人黑素细胞活性的影响

目的 探讨热处理对体外培养的正常人黑素细胞的增殖活性、黑素合成及其酪氨酸酶活性的影响。方法 无菌操作获取正常人包皮环切术后的包皮,按照皮肤表皮细胞培养法获取黑素细胞,利用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）为主要有丝分裂原建立正常人表皮黑素细胞培养系,采用Masson-Fontana染色法对培养细胞进行鉴定,确定细胞种系,噻唑蓝（MTT）比色法测定不同温度条件（39、41、42、43、45 ℃）处理对黑素细胞活力的影响并选择最佳的温度条件,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性,比色法测定黑素含量,并将实验组与对照组结果进行比较。结果 体外培养的正常人黑素细胞在5个不同的温度条件作用后,以42 ℃作用后的细胞增殖活性最佳。酪氨酸酶活性和黑素含量测定结果显示,42 ℃每天1 h连续干预3 d后,体外培养的正常人黑素细胞的酪氨酸酶活性增长率为36.4%,黑素合成增长率为78%,均明显高于对照组（P值均 < 0.01）。结论 热处理可以增强体外培养的人黑素细胞的增殖活性,促进其黑素合成,并且可提高其酪氨酸酶的活性。     

艾灸治疗稳定期局限性白癜风临床研究

目的:探究艾灸对稳定期局限性白癜风的治疗作用。方法:60例白癜风、稳定期患者,随机分为治疗组(A组)、对照组(B组)。治疗组、对照组均口服维生素B_2,螺旋藻胶囊、甘草锌颗粒。在口服上述药物的同时,治疗组每日用艾条灸阿是穴(白斑处)及"灸癜风"穴各30 min,采用温和灸补法,悬灸,1次/d;对照组靶皮损外用凡士林软膏,2次/d。3月为1个疗程,共2个疗程,以靶皮损面积作为观察指标。结果:艾灸对稳定期局限性患者具有较好的治疗效果,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),且无明显副作用。结论:艾灸对白癜风具有一定的治疗作用,且安全无明显不良反应。     

阿司匹林丁香酚酯的高效解热作用及作用机制

目的探讨阿司匹林丁香酚酯(AEE)解热作用及其作用机制。方法采用sc给予Wistar大鼠15%酵母混悬液10 ml.kg-1制备发热模型。体温升高>0.8℃的大鼠按分组分别ig给予阿司匹林0.27g.kg-1、丁香酚0.24 g.kg-1、AEE 0.32,0.48,0.65 g.kg-1观察给药后2 h4,h和6 h后大鼠体温,6 h后采血取脑,应用酶联免疫法(ELISA)测定致热大鼠腹中隔区及血浆中精氨加压素(AVP)的含量和下丘脑中及血浆中环磷酸腺苷(cAMP)的含量。结果与发热模型组2 h和6 h自然降温相比较,ig给予AEE 0.32,0.48和0.65 g.kg-1、阿司匹林0.27 g.kg-1、丁香酚0.24 g.kg-1后2 h,大鼠体温分别降温-1.2±0.28,-1.14±0.35,-2.09±0.45,-2.19±0.32(,-0.94±0.42)℃;6 h后分别降温-1.32±0.34,-1.45±0.41,-2.49±0.49,-1.78±0.51(,-1.21±0.29)℃,差异显著(P<0.05)。比较同组药后6 h与2 h的降温作用发现,阿司匹林解热药效作用下降较快,差异显著(P<0.05);丁香酚药效作用时间较为持久,但无增加或下降差异;AEE0.65 g.kg-1药效快速持久,降温作用增加,差异显著(P<0.05)。药后6 h,AEE0.65g.kg-1解热降温作用明显强于阿司匹林和丁香酚,差异极显著(P<0.01)。发热模型组中下丘脑及血浆中cAMP的含量与腹中隔区、血浆中AVP含量较正常对照组高。与发热模型组相比,AEE 0.32,0.48和0.65g.kg-1组、阿司匹林0.27 g.kg-1组、丁香酚0.24 g.kg-1组中腹中隔区中AVP含量明显下降,而血浆中AVP含量明显升高,下丘脑中cAMP的含量明显降低,血浆中cAMP的含量变化不明。结论 AEE的解热作用药效快速持久,明显优于阿司匹林与丁香酚,其解热机制可能通过改变下丘脑中cAMP的含量和腹中隔区、血浆中AVP含量而发挥作用。     

阿司匹林丁香酚酯的抗炎作用及其可能的作用机制

目的研究阿司匹林丁香酚酯(AEE)的抗炎作用及其可能的作用机制。方法阿司匹林0.2g.kg-1组、丁香酚0.18 g.kg-1组、AEE 0.18和0.36 g.kg-1组小鼠按体重ig给予相应药物,每天1次,连续3 d。用二甲苯致小鼠耳肿胀模型、小鼠腹腔毛细血管通透性增高模型、角叉菜胶致小鼠足跖肿胀模型及小鼠棉球肉芽肿模型观察AEE的抗炎作用,并测定血清中一氧化氮(NO)和足爪组织中前列腺素E2(PGE2)、丙二醛(MDA)和5-羟色胺(5-HT)的含量。结果二甲苯致小鼠耳肿胀实验,模型组肿胀度为(7.0±1.2)mg,阿司匹林、丁香酚、AEE 0.18和0.36 g.kg-1明显抑制耳肿胀度,肿胀度分别为3.9±1.2,4.7±1.9,3.9±1.9和(3.8±1.1)mg(P<0.05,P<0.01)。小鼠腹腔毛细血管通透性实验结果表明,模型组伊文思蓝的渗出(A590 nm)为0.56±0.11,阿司匹林、丁香酚、AEE 0.18和0.36 g.kg-1组腹腔毛细血管通透性均降低,伊文思蓝的渗出(A590 nm)分别为0.29±0.15,0.34±0.12和0.35±0.18(P<0.05,P<0.01)。小鼠棉球肉芽肿实验结果表明,模型组肉芽肿增生(12.5±2.4)mg,阿司匹林、丁香酚、AEE 0.18和0.36 g.kg-1组明显降低,分别为7.0±2.1,9.0±1.7,9.9±1.4和(8.8±1.8)mg(P<0.01);角叉菜胶致小鼠足跖肿胀实验结果表明,AEE 0.18 g.kg-1显著抑制角叉菜胶致炎小鼠足跖肿胀(P<0.05),降低致炎足组织中PGE2,5-HT和血清NO含量,作用与阿司匹林和丁香酚较强或相当。结论 AEE具有明显的抗炎作用,与阿司匹林和丁香酚作用相当;其抗炎机制可能与抑制炎性介质释放有关。     

隐匿性自发性颅内出血误诊因素分析

目的:为提高临床医师对隐匿性自发性颅内出血病症的认识,做到早诊断早治疗,减少误诊误治.方法:总结327例隐匿性自发性颅内出血病例的临床资料,并将初诊时误诊病例与明确诊断病例的资料进行比较,分析导致隐匿性自发性颅内出血初诊时误诊的可能因素.结果:①隐匿性自发性颅内出血仅表现为可忍受的持续性头痛,很少有特异性的临床症状;②硬膜下出血最容易被误诊,其误诊病例占总误诊病例的60.7%;③出血量少,发病至就诊时间长,容易导致误诊;④硬膜下出血组的误诊率最高(85.37%),然后依次为外囊出血组(71.70%)、蛛网膜下腔出血组(21.43%)及脑叶出血组(19.26%);⑤高级职称医师初诊时对该病的误诊率明显低于非高级职称医师(X2=43.27,P<0.01).结论:隐匿性自发性颅内出血出血量相对较少、症状轻微,患者及家属延误就医,加之医师对其认识不足、忽视头颅CT检查可能是其主要误诊因素.     

红外线照射对人表皮黑素细胞影响的研究

目的 探讨红外线(infrared,JR)照射促进体外培养的正常人表皮黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素含量的作用,寻找IR照射的最佳剂量.方法 将体外培养的正常人表皮黑素细胞分别给予不同的红外线剂量:0 J/cm2(对照组)、20 J/cm2、60 J/cm2、80 J/cm2、100 J/cm2、140 J/cm2、240 J/cm2、320 J/cm2,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法选择最佳剂量并以此作为照射条件,连续3d,检测黑素细胞的酪氨酸酶活性、酪氨酸酶活性增长率、黑素含量、红外线照射对黑素细胞影响率以及细胞周期.结果 红外线照射的最佳剂量为80 J/cm2,此照射下的酪氨酸酶活性0.3601±0.0301,高于对照组0.3114±0.0341 (P＜ 0.05),酪氨酸酶活性增长率为15.64％.照射组的黑素细胞含量为0.2748±0.0243,高于对照组0.2325±0.0254(P＜0.05),红外线照射对黑素细胞黑素含量影响率18.19％.细胞周期检测结果显示,G1细胞比例明显低于对照组(P＜0.01),G2期和S期细胞比例较对照组增加(P＜0.05).结论 80 J/cm2是IR照射的理想剂量,可以增加黑素细胞的黑素含量,提高酪氨酸酶活性,促进黑素细胞分化增殖.     

热处理对UVB辐射后体外培养人黑素细胞活性的影响

目的 探讨热处理与窄谱中波紫外线（NB-UVB）联合作用对正常人黑素细胞活性的影响。 方法 分别以20、30、50、70、90、120、180 mJ/cm2 NB-UVB辐射体外培养的正常人黑素细胞,采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测细胞增殖活性并选择最佳照射剂量;以42 ℃,1 h为热处理干预剂量,将黑素细胞分为4组：正常对照组、UVB组、加热组、UVB + 加热组,连续干预3 d,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素含量,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 NB-UVB照射呈剂量依赖性减少黑素细胞存活率,选择50 mJ/cm2作为最佳照射剂量;黑素细胞经不同干预后,UVB组、UVB+加热组的酪氨酸酶活性分别为0.244 ± 0.018、0.310 ± 0.015,较对照组（0.235 ± 0.018）分别增长3.8%和31.9%（P < 0.05）,两组黑素含量分别为0.201 ± 0.016、0.286 ± 0.019,较对照组（0.171 ± 0.016）分别增长17.5%和67.3%（P < 0.05）;UVB组和UVB+加热组处于G1期的黑素细胞较对照组分别减少23.94%和33.51%（P < 0.05）,S期细胞分别增加15.35%（P < 0.05）和17.76%（P > 0.05）,G2期分别增加11.93%（P < 0.05）和16.08%（P > 0.05）。 结论 热处理与NB-UVB可以协同增加黑素细胞的酪氨酸酶活性,促进黑素合成及细胞的增殖分化。     

热处理对体外人黑素细胞及HaCaT细胞分泌α黑素细胞刺激素的影响

【摘要】 目的 探讨热处理后体外培养的人表皮黑素细胞和人角质形成细胞（HaCaT细胞）分泌α黑素细胞刺激素（α-MSH）的变化。方法 将体外培养的黑素细胞及HaCaT细胞分别给予热处理（42 ℃,每天60 min,连续3 d）,实时荧光定量PCR法（RT-PCR）及酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测两种细胞分泌的α-MSH的变化。结果 黑素细胞热处理组（1.5862 ± 0.3262）与对照组（1.0000 ± 0.2715）相比,α-MSH mRNA表达均明显增加（P < 0.05）;HaCaT细胞热处理组（1.8013 ± 0.1216）与对照组（1.0000 ± 0.2532）相比,mRNA水平也有明显增加（P < 0.05）。ELISA结果：黑素细胞热处理组（0.3142 ± 0.0469）蛋白表达水平明显高于对照组（0.2557 ± 0.0330,P < 0.05）;HaCaT细胞热处理组（0.4632 ± 0.0345）蛋白水平也明显高于对照组（0.4389 ± 0.0399,P < 0.05）。结论 热处理可促进人黑素细胞及HaCaT细胞α-MSH分泌。 【关键词】 热; 黑素细胞; HaCaT细胞; α促黑素     

热处理对体外人黑素细胞及HaCaT细胞分泌a黑素细胞刺激素的影响北大核心CSCD

目的探讨热处理后体外培养的人表皮黑素细胞和人角质形成细胞（HaCaT细胞）分泌d黑素细胞刺激素（a-MSH）的变化。方法将体外培养的黑素细胞及HaCaT细胞分别给予热处理（42℃,每天60min,连续3d）,实时荧光定量PCR法（RT—PCR）及酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测两种细胞分泌的a-MSH的变化。结果黑素细胞热处理组（1．5862±0．3262）与对照组（1．0000±0．2715）相比,Ⅱ-MSHmRNA表达均明显增加（P〈0．05）;HaCaT细胞热处理组（1．8013±0．1216）与对照组（1．0000±0．2532）相比,mRNA水平也有明显增加（P〈0．05）。ELISA结果：黑素细胞热处理组（0．3142±0．0469）蛋白表达水平明显高于对照组（0．2557±0．0330,P〈0．05）;HaCaT细胞热处理组（0．4632±0．0345）蛋白水平也明显高于对照组（0．4389±0．0399,P〈0．05）。结论热处理可促进人黑素细胞及HaCaT细胞d—MSH分泌。