类风湿关节炎血清学标志物的筛选：基于细胞因子蛋白芯片

目的 探讨多项血清中细胞因子及可溶性细胞因子受体蛋白在类风湿关节炎临床诊断中的应用价值。方法 选择2015年~2019年在本院确诊为类风湿关节炎（RA）的患者59例作为RA组,并以在我院接受定期体检的年龄和性别匹配的健康受试者46例作为健康对照组。通过人细胞因子蛋白芯片检测其中5例RA组及5例健康对照组血清样本,选取4种差异表达细胞因子LIMPII、ROBO3、Periostin、IGFBP-4及可溶性受体蛋白2B4、Tie-2,于另外54例RA组及41例健康对照组血清样本中,对其六者血清水平进行 ELISA验证。Spearman 相关分析检测细胞因子及可溶性细胞因子受体蛋白与临床指标（包括：类风湿因子（RF）、红细胞沉降率（ESR）、C反应蛋白（CRP）、疾病活动评分（DAS28）及健康评估问卷（HAQ））的关系;受试者工作特征曲线（ROC）分析评估其诊断价值。结果 与健康对照相比,2B4、LIMPII、Tie-2、ROBO3、Periostin和IGFBP-4在RA血清中的表达显著升高（P<0.01）。同时,RA血清中LIMPII、ROBO3和Periostin血清水平与类风湿因子、C反应蛋白、疾病活动评分及健康评估问卷等反映疾病活动程度评价指标正相关（P<0.01）。血清2B4、LIMPⅡ、Periostin、ROBO3、IGFBP-4和Tie-2表达水平均对RA的诊断有显著意义（P<0.05）,其中2B4曲线下面积为最大（AUC：0.861,P<0.001）,其次依顺序LIMPII、ROBO3、Periostin、Tie-2、 和IGFBP-4。结论 血清LIMPII、ROBO3和Periostin的表达水平可反映RA的疾病活动度,此外血清2B4、LIMPⅡ、Periostin、ROBO3、IGFBP-4和Tie-2可能作为RA的诊断的生物标记物。     

朊蛋白(PrP~C)在胰腺癌中的表达及临床意义

目的探讨朊蛋白(PrPC)在胰腺癌组织中表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测PrPC在胰腺癌及其对应正常胰腺组织的表达,分析其表达强度与性别、分化、临床分期及转移等临床病理资料之间的关系。结果PrPC在胰腺癌组织中和正常胰腺组织中的表达有显著差异;在高分化胰腺癌组织中表达明显低于中、低分化肿瘤组织,在转移组阳性表达高于非转移组(P0.05),但在性别间差异没有统计学意义。结论PrPC在胰腺癌中表达与其发生、临床分期及转移密切相关,在其发生发展中可能起着重要作用,有望作为早期诊断及靶向治疗的分子标记。     

类风湿关节炎患者外周血TCRαβ~+CD4~-CD8~-T细胞与FAS介导的凋亡关系研究

目的:检测类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)患者外周血中TCRαβ+细胞、CD4-CD8-细胞、TCRαβ+CD4-CD8-T细胞(Double negative T cells,DNT细胞)及各细胞亚群表面凋亡相关蛋白FAS的表达情况,探讨RA患者TCRαβ+CD4-CD8-T细胞与FAS介导的凋亡之间的关系。方法:选取24例RA患者以及24例同期健康查体者作为研究对象,检测所有研究对象外周血TCRαβ+细胞、CD4-CD8-细胞、TCRαβ+CD4-CD8-T细胞的数量及表面凋亡相关蛋白FAS的表达情况,并分析以上指标与类风湿因子(Rheumatoid factors,RF)、白细胞数(White blood cell,WBC)、急性时相反应蛋白(C-reactive pro-tein,CRP)以及血沉(Erythrocyte sedimentation rate,ESR)之间的相关性。结果:RA患者外周血TCRαβ+细胞、CD4-CD8-细胞与健康对照相似,TCRαβ+CD4-CD8-T细胞数量显著高于健康对照(0.82±0.38 vs.0.57±0.26,P=0.013),TCRαβ+CD4-CD8-T细胞表面的FAS的表达增高(1.23±0.69 vs.0.80±0.45,P=0.016),并与TCRαβ+CD4-CD8-T细胞数量呈显著正相关关系(r=0.809,P=0.000);TCRαβ+细胞及其表面表达的FAS受体、CD4-CD8-细胞及其表面表达的FAS受体、TCRαβ+CD4-CD8-T细胞及其表面表达的FAS受体与RF、WBC、CRP以及ESR之间均无相性(P>0.05)。结论:RA患者外周血中TCRαβ+CD4-CD8-T细胞及其表面表达的FAS受体显著增加,表明TCRαβ+CD4-CD8-T细胞对FAS介导的凋亡敏感性增加,可能会导致免疫反应性T细胞的比例失调。RA患者中TCRαβ+CD4-CD8-T细胞及其表面表达的FAS受体与疾病活动性指标之间无相关关系,TCRαβ+CD4-CD8-T细胞及其表面表达的FAS受体在RA患者的发病机制中的作用还有待于进一步探讨。     

强直性脊柱炎竖脊肌免疫组化分析

目的观察CD4、CD8、CD20、CD68及MHC-Ⅰ在强直性脊柱炎（AS）竖脊肌中的表达,了解AS竖脊肌中是否存在炎性改变。方法收集AS（AS组）、多发性肌炎（PM,PM组）和腰椎间盘突出症（LIDP,LIDP组）患者的肌肉标本各10例。冰冻切片后,对各组切片用ABC法进行CD4、CD8、CD20、CD68及MHC-Ⅰ等抗体的免疫组织化学染色,以PM组作为阳性对照,LIDP组作为阴性对照。并对各组中CD4、CD8、CD68和MHC-Ⅰ的IOD值进行比较。结果 3组中CD20均为阴性。AS组CD4、CD8、MHC-Ⅰ的IOD值均高于LIDP组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;AS组CD8、MHC-Ⅰ的IOD与PM组比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）,PM组CD4、CD68的IOD明显高于AS组（均P〈0.05）。结论 AS患者竖脊肌中存在与单核细胞相关的炎性细胞浸润,且在炎性细胞周围伴随局灶性肌纤维坏死,其坏死与炎性浸润有密切关系。     

结直肠癌中miR-200家族启动子甲基化状态分析

目的 检测HCT116、HT29、LS174t、SW480、SW620和LoVo细胞中miR-200家族启动子甲基化状态,分析其与结直肠癌临床分期、分化程度及预后的相关性;同时进行miR-200家族甲基化程度与患者生存相关性分析.方法 重亚硫酸盐测序法(bisulfite genomic sequence PCR,BSP)检测6株不同恶性程度的结直肠癌细胞株中miR-200家族启动子甲基化程度;分析其甲基化程度与细胞恶性程度、miR-200a表达量的相关性.甲基化特异性(methylationspecific PCR,MSP)技术检测138例结直肠癌组织中miR-200家族启动子甲基化程度.结果 6株不同恶性程度的结直肠癌细胞株中miR-200家族启动子甲基化程度不同,且其甲基化程度与细胞恶性程度成反比,与细胞株中miR-200a表达量的检测结果一致.结直肠癌组织中miR-200家族启动子甲基化程度与患者年龄无关,与患者性别、肿瘤最大径、淋巴结转移及远处转移、患者术后生存时间相关.结论 miR-200家族的表达受甲基化修饰的调控,且该调控成为影响表达量的主要原因.miR-200家族甲基化程度与结直肠癌患者生存期密切相关,可作为预后指标.     

系统性红斑狼疮合并间质性肺炎的临床特征及相关危险因素分析

目的 探讨系统性红斑狼疮合并间质性肺炎(SLE-IP)的临床特征并分析其相关危险因素.方法 回顾性分析2013年1月至2016年1月于该院风湿免疫科住院且明确诊断的SLE-IP病例40例,并选择年龄、性别等相匹配的40例系统性红斑狼疮(SLE)未合并间质性肺炎的患者作为对照组.比较两组患者的临床表现、常规检查、生化检查和免疫学检查结果,分析SLE-IP发生的危险因素.结果 该研究SLE-IP的高分辨CT分型以非特异性间质性肺炎(NSIP)多见,寻常型间质性肺炎(UIP)次之.NSIP以两肺磨玻璃样阴影多见,UIP以网格状影、蜂窝影多见.两组间干咳、胸闷/气短、雷诺现象、湿啰音、三酰甘油升高、Sm抗体阳性率、U1-nRNP抗体阳性率差异均有统计学意义(P＜0.05).Logistic回归分析显示干咳、胸闷/气短、雷诺现象、湿啰音、三酰甘油升高、Sm抗体阳性、U1-nRNP抗体阳性是发生SLE-IP的危险因素.结论 干咳、胸闷/气短、雷诺现象、湿啰音、三酰甘油升高、Sm抗体阳性、U1-nRNP抗体阳性是发生SLE-IP的危险因素,及时完善HRCT检查有助于早期诊疗,改善患者预后.     

白塞病合并淋巴瘤1例报告并文献复习

白塞病合并淋巴瘤病例罕见,目前国内外文献报道仅23例。本文报道国内第1例（世界上第2例）白塞病合并结外NK/T
细胞淋巴瘤（鼻型）的病例,患者为26岁青年男性,确诊白塞病后予泼尼松龙、环磷酰胺、沙利度胺、生物制剂等药物治疗,自然病
程2年后因急腹症手术,术后病理诊断“（回肠末端）结外NK/T细胞淋巴瘤,鼻型”。白塞病合并淋巴瘤的机制尚不清楚,本文通
过文献复习,总结国内外报道的病例特点,在免疫机制、EB病毒感染、药物应用等方面对相关机制进行探讨。
     

来氟米特通过调节miR-449a在肺纤维化中的机制研究

目的 探究来氟米特（leflunomide,LEF）通过调节微小RNA（microRNA,miR）-449a在肺纤维化中的机制研究。方法 将人肺成纤维细胞MRC-5分为6组,即对照组、LEF组、LEF+mimic组、mimic组、LEF+inhibitor组和inhibitor组。通过质粒转染miR-449a mimic或inhibitor来过表达或沉默miR-449a,在5 mg/L LEF的条件下培养48 h。分别通过CCK-8法、克隆形成实验和流式细胞术检测各组细胞活力、细胞增殖能力和凋亡率。使用免疫荧光染色检测α平滑肌肌动蛋白（α smooth muscle actin,α-SMA）胶质蛋白I（collagen I,col I）。分别使用qPCR和Western blot检测miRNA和蛋白的水平。结果 mimic组miR-449a水平显著高于对照组（P<0.05）。LEF组和inhibitor组的miR-449a水平显著低于对照组（P<0.05）。LEF+mimic组的miR-449a的表达水平显著高于LEF组,LEF+inhibitor组的miR-449a水平显著低于LEF组（P<0.05）。LEF组和inhibitor组的细胞活力和细胞增殖能力显著高于对照组（P<0.05）。mimic组的细胞活力和细胞增殖能力显著低于对照组（P<0.05）。LEF+mimic组的细胞活力和细胞增殖能力显著低于LEF组而LEF+inhibitor组的细胞活力显著高于LEF组（P<0.05）。LEF组和inhibitor组的细胞凋亡率低于对照组（P<0.05）,mimic组的细胞凋亡率显著高于对照组（P<0.05）。LEF+mimic组的细胞凋亡率显著高于LEF组而LEF+inhibitor组的凋亡率显著低于LEF组（P<0.05）。LEF组和inhibitor组的α-SMA和Col I蛋白的荧光强度显著高于对照组（P<0.05）,mimic组的相对荧光强度低于对照组（P<0.05）。LEF+mimic组的α-SMA和Col I蛋白相对荧光强度显著低于LEF组,LEF+inhibitor组的α-SMA和Col I蛋白相对荧光强度显著高于LEF组（P<0.05）。LEF组和inhibitor组的p-JNK/JNK水平高于对照组（P<0.05）,mimic组的p-JNK/JNK水平显著低于对照组（P<0.05）,LEF+mimic组中p-JNK/JNK水平显著低于LEF组而LEF+inhibitor组的p-JNK/JNK水平显著高于LEF组（P<0.05）。结论 LEF可能通过抑制肺成纤维细胞中miR-449a的表达激活JNK途径,从而诱导成纤维细胞的活化和增殖,抑制其凋亡,从而引起肺纤维化。     

类风湿关节炎患者外周血TCRαβ+CD4-CD8-T细胞与FAS介导的凋亡关系研究

目的：检测类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）患者外周血中TCRαβ+细胞、CD4-CD8- 细胞、TCRαβ+CD4-CD8-T细胞(Double negative T cells,DNT细胞)及各细胞亚群表面凋亡相关蛋白FAS的表达情况,探讨RA患者TCRαβ+CD4-CD8-T细胞与FAS介导的凋亡之间的关系。方法:选取24例RA患者以及24例同期健康查体者作为研究对象,检测所有研究对象外周血TCRαβ+细胞、CD4-CD8- 细胞、TCRαβ+CD4-CD8-细胞、TCRαβ+细胞、CD4-CD8-细胞、TCRαβ+CD4-CD8-T细胞的数量及表面凋亡相关蛋白FAS的表达情况,并分析以上指标与类风湿因子（Rheumatoid factors,RF）、白细胞数（White blood cell,WBC）、急性时相反应蛋白（C-reactive protein,CRP）以及血沉(Erythrocyte sedimentation rate,ESR)之间的相关性。结果：RA患者外周血TCRαβ+细胞、CD4-CD8-细胞与健康对照相似,TCRαβ+CD4-CD8-T细胞数量显著高于健康对照(0.82±0.38 vs.0.57±0.26,P=0.013),TCRαβ+CD4-CD8-T细胞表面的FAS的表达增高(1.23±0.69 vs.0.80±0.45,P=0.016),并与TCRαβ+CD4-CD8-T细胞数量呈显著正相关关系（r=0.809,P=0.000）;TCRαβ+细胞及其表面表达的FAS受体、CD4-CD8-细胞及其表面表达的FAS受体、TCRαβ+CD4-CD8-T细胞及其表面表达的FAS受体与RF、WBC、CRP以及ESR之间均无相性(P>0.05)。结论：RA患者外周血中TCRαβ+CD4-CD8-T细胞及其表面表达的FAS受体显著增加,表明TCRαβ+CD4-CD8-T细胞对FAS介导的凋亡敏感性增加,可能会导致免疫反应性T细胞的比例失调。RA患者中TCRαβ+CD4-CD8-T细胞及其表面表达的FAS受体与疾病活动性指标之间无相关关系,TCRαβ+CD4-CD8-T细胞及其表面表达的FAS受体在RA患者的发病机制中的作用还有待于进一步探讨。