转化生长因子β1在白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化及大黄素干预中的作用

目的:大黄素对白细胞介素1β诱导NRK52E细胞转分化有显著抑制作用。实验拟进一步观察转化生长因子β1在白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化及大黄素抑制作用中的意义。方法:实验于2006-10/2007-05在泸州医学院附属医院免疫实验室完成。⑴实验材料及分组:以培养的大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)为观察对象,按如下分组分别添加不同处理因素:①对照组:仅加入体积分数为0.05小牛血清的高糖DMEM培养基。②白细胞介素1β诱导组:加含白细胞介素1β终浓度为10μg/L的高糖DMEM培养基。③SB431542阻断组:加含白细胞介素1β终浓度为10μg/L及SB431542终浓度为10μmol/L的高糖DMEM培养基。④白细胞介素1β 大黄素组:同时加分别含白细胞介素1β终浓度为10μg/L及大黄素终浓度为25mg/L的高糖DMEM培养基。⑵实验评估:培养48h后用倒置相差显微镜观察细胞形态,细胞免疫化学染色法检测肌酸激酶、α-平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1的表达。结果:①白细胞介素1β可诱导部分细胞由卵圆形转变为梭形,且肌酸激酶表达减弱(P<0.01),α-平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1表达显著增强(P<0.01)。②SB431542特异性抑制转化生长因子β1作用后,白细胞介素1β诱导的细胞形态改变受抑,同时肌酸激酶表达增强(P<0.01),α-平滑肌肌动蛋白表达减弱(P<0.01),但转化生长因子β1的表达却无明显变化。③大黄素对白细胞介素1β诱导的细胞形态改变及肌酸激酶、α-平滑肌肌动蛋白的表达有明显抑制作用,其抑制作用与SB431542的作用相比无显著差异;同时,大黄素对白细胞介素1β诱导的转化生长因子β1的表达也有明显抑制作用(P<0.01)。结论:转化生长因子β1可能介导了白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化,并参与了大黄素抑制白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用。     

丙型肝炎病毒NS4B对LO2肝细胞细胞周期及cyclin D1表达的影响

目的研究丙型肝炎病毒非结构蛋白4B对LO2肝细胞细胞周期和cyclinD1表达的影响，探讨HCVNS4B在HCV致病中的可能机制。方法利用脂质体介导将空白载体PCXN2及重组质粒PCXN2-NS4B转染入LO2肝细胞，G418筛选，RT-PCR法鉴定质粒转染成功。MTT法检测细胞生长并绘制生长曲线，观察NS4B对肝细胞生长的影响；流式细胞仪检测细胞周期；免疫组化法检测细胞cyclinD1的表达。结果NS4B成功转染入LO2细胞；转染的NS4B可促进肝细胞的生长；转染PcxN2-NS4B细胞的S期、G2／M期较转染PCXN2细胞增加，两组比较差异有显著性（P〈0．05）；转染NS4B的细胞cyclinD1表达较转染空白载体组增强，两组比较差异有显著性（P〈0．01）。结论 HCVNS4B可能通过调节某些基因转录与表达，促进DNA合成，干扰肝细胞周期，促进肝细胞增殖。     

酶消化法分离老龄SD大鼠血管平滑肌细胞

目的采用酶消化法培养老龄SD大鼠血管平滑肌细胞,为血管疾病的研究提供大量的原代平滑肌细胞。方法无菌取老龄SD大鼠主动脉,采用0.2%Ⅱ型胶原酶消化分离血管平滑肌细胞,自然纯化及差速贴壁纯化血管平滑肌细胞,免疫组化鉴定平滑肌细胞α肌动蛋白。结果免疫组化染色显示细胞纯度在95%以上。结论酶消化法用于血管平滑肌细胞的培养有利于获得大量的高纯度细胞供实验研究。     

结核分枝杆菌Ag85A/HSP70 DNA疫苗的真核表达与免疫效应研究

目前卡介苗（BCG）作为临床上惟一使用的预防结核病的疫苗,效果并不稳定.同时BCG的接种会使结核菌素试验阳性,对结核病的诊断产生干扰,延误治疗时间,因此研制新疫苗成为当前结核病防治的首要任务.我们将结核分枝杆菌Ag85A和HSP70编码基因，以PCI-neo为载体，连接构建了PCI-Ag85A/HSP70 DAN疫苗，观察其免疫效应，以期用于结核病的防治工作。     

血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)表型转化及细胞外基质分泌的影响.方法:体外培养NRK52E细胞,经Ang-(1-7)和AntgⅡ(终浓度均为1×10-6 mol/L)干预24、48、72、96 h后,应用细胞免疫化学法检测E-cadherin,α-SMA的表达;应用ELISA法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原(Col I)和纤维黏连蛋白(FN)的表达;采用实时荧光定量PCR( Real-timePCR)检测细胞中E-cadherin、α-SMA、Col I和FN mRNA表达水平的变化.结果:AngⅡ作用96h后,E-cadherin蛋白及mRNA表达显著减弱(P＜0.05),α-SMA、Col I、FN蛋白及mRNA表达显著增强(P＜0.05);同时加入Ang-(1-7)后,与AngⅡ组比较,E-cadherin蛋白及mRNA的表达增强(P＜0.05),α-SMA、Col I、FN蛋白及mRNA表达减弱(P＜0.05).结论:Ang-(1-7)能够抑制AngⅡ诱导的大鼠肾小管上皮细胞表型转化及细胞外基质的分泌.     

血清TGF-β1、HGF与慢性乙型肝炎早期肾损伤关系的研究

目的探讨血清转化生长因子β1(TGF-β1)、肝细胞生长因子(HGF)与慢性乙型肝炎(CHB)早期肾损伤的关系.方法对44例CHB患者用双抗体夹心ELISA法和放射免疫法测定血清TGF-β1、HGF和尿α1微球蛋白(α1-MG)、尿微量白蛋白(mALB)水平;20例健康人做对照.结果 44例CHB中早期肾损伤24例,无肾损伤20例CHB患者血清TGF-β1、HGF高于对照组(P＜0.01);早期肾损伤者血清TGF-β1、HGF明显高于无肾损伤者(P＜0.01);且血清TGF-β1、HGF与早期肾损伤指标尿α1-MG、mALB水平成正相关(r分别=0.718,0.683,0.664,0.637).结论 CHB早期肾损伤患者血清TGF-β1、HGF均升高,可能是机体损伤与抗损伤反馈调节所致.     

用量子共振法对人群中免疫功能状态的研究

目的了解人群中免疫功能状态及变化。方法使用重庆天基权产TJQQ-C型量子共振检测仪；直接法自动检测健康体检人群共1690人次，按年龄分为成人组1200例，老年组490例；检测指标：免疫功能、免疫球蛋白、补体免疫、细胞免疫、细胞因子免疫。结果正常人群总体免疫功能量化值在12—14，95％可信区间11～15；老年组免疫功能下降显著（P〈0．001）；〉80岁下降约50％。肿瘤患者免疫各项指标下降，过敏性疾病细胞因子免疫增强。糖尿病人补体免疫下降显著。结论量子共振检测为了解机体的免疫状况提供了简便、快捷、有效的方法，具有广泛的应用价值和实用的临床意义。     

一氧化氮在肝硬化病人血、腹水、尿中的检测及意义

我们通过对５６例肝炎后肝硬化腹水病人血、腹水、尿中ＮＯ浓度的检测,了解其与病人并发症之间的关系,旨在阐明ＮＯ在自发性腹膜炎、肾功能损伤中的作用及意义。 一、资料与方法 １．病例：１９９８年７月—２０００年５月我科收治肝炎后肝硬化腹水病人５５例（按１９９１年全国肝硬化专题讨论会制定的标准）,男３９例,女１７例,年龄２２—７８岁,平均４６．１岁;病程２月—２０年,平均５．６年。其中合并ＳＢＰ者２５例,单纯腹水者３０例。自发性腹膜炎（ＳＢＰ）的诊断标准为：（１）有发热、腹痛、腹部压痛、反跳痛等症状体征;…     

血管紧张素-(1-7)抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠系膜细胞基质分泌

目的探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠系膜细胞(GMC)细胞外基质分泌的影响。方法在AngⅡ诱导培养的GMC中,应用Ang-(1-7),通过放射免疫法检测细胞培养上清液中Ⅲ型前胶原(PcⅢ)和透明质酸(HA)的含量,观察GMC细胞外基质分泌情况。分别用非特异性AngⅡ受体拮抗剂[Sar1,Ile8]-AngⅡ和血管紧张素Ⅱ受体2(AT2受体)拮抗剂PD123319与Ang-(1-7)共同培养,了解Ang-(1-7)的受体特点。结果Ang-(1-7)呈剂量依赖性抑制AngⅡ诱导GMC PcⅢ和HA的分泌,其作用可被[Sar1,Ile8]-AngⅡ抑制,PD123319对Ang-(1-7)的上述作用无影响。结论Ang-(1-7)能抑制基础和AngⅡ诱导的GMC细胞外基质分泌,该作用可部分被非特异性AngⅡ受体拮抗剂[Sar1,Ile8]-AngⅡ抑制。