复方卡托普利片中未知杂质的来源与结构分析

目的 对复方卡托普利片中新发现的未知杂质进行来源分析和结构的初步确认,以期为该制剂改进工艺和提高标准提供依据。方法 采用Kromasil苯基色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以水-磷酸（550︰0.5）和甲醇为流动相进行梯度洗脱,检测波长为210 nm。对市售的复方卡托普利片中的该未知杂质的含量进行系统的评价;同时采用液质联用的方法对该未知杂质的结构进行确认。结果 该未知杂质为复方制剂的2种原料卡托普利和氢氯噻嗪在受热过程中产生的二聚物,分子式为C₁₆H₂₃N₄O₇S₃Cl;市售产品多数含有该杂质。结论 本研究为复方卡托普利片的质量控制和工艺优化提供了参考依据。     

多能干细胞核心调控基因Nanog介导生殖母细胞减数分裂的作用研究

目的 探讨多能干细胞核心调控基因Nanog在原始生殖纽胞(PGCs)向生殖母细胞方向分化过程中的作用.方法 取11.0d胎鼠PGCs,按胚胎干细胞(ES)培养标准进行体外胚胎生殖细胞(EG细胞)培养.采用脂质体方法将Nanog靶向特异性小干扰RNA(siRNA)转染人EG细胞.RT-PCR、免疫荧光法检测siRNA的沉默效率;在倒置相差显微镜下进行体外克隆计数,检测EG细胞增殖未分化状态;TUNEL法和透射电镜检测EG细胞凋亡情况;半定量RT-PCR检测与生殖母细胞减数分裂相关的标志基因(Mvh、Stra8、Sycp3)的mRNA表达.结果 转染siRNA后48h EG细胞Nanog mRNA和蛋白表达明显受抑,典型未分化EG细胞克隆数量显著下降,呈现分化现象,悬浮细胞增多.TUNEL法、透射电镜检测悬浮EG细胞呈现凋亡征象.伴随Nanog表达下调,Mvh、Stra8、Sycp基因mRNA表达上调.结论 到达生殖腺后,多能性PGCs发生生殖母细胞化,开始减数分裂,该过程可能与多能干细胞核心调控基因Nanog的表达下调有关.     

小剂量FP腔静脉持续滴注治疗恶性肿瘤疗效观察

为探讨小剂量FP方案经腔静脉持续滴注疗法在肿瘤化疗中的应用价值，我们将1998年12月至2001年12月收治的60例Ⅲ～Ⅳ期肿瘤患者随机分为治疗组与对照组进行对比研究，现报告如下。     

高效液相色谱法测定人血浆盐酸特比萘芬浓度

［摘要］目的建立测定人血浆盐酸特比萘芬浓度的高效液相色谱法。方法以利洛司酮作内标,三氯甲烷为提取溶剂,色谱柱Acclaim C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为甲醇 乙腈 0.01 mol•L 1磷酸二氢钾缓冲液（pH值3.9）（5：45：50）,流速1.0 mL •min 1。检测波长224 nm。结果血浆盐酸特比萘芬浓度在0.04～2.40 mg•L 1范围内线性关系良好,加权最小二乘法进行回归运算得回归方程为C＝0.003 2Y+0.051 3,相关系数r＝0.998 6 （n＝7）,最低检测浓度为0.04 mg•L 1。方法回收率为99.2%～102.5%,日内RSD＜12%,日间RSD＜8%。结论该方法操作简便,灵敏度高,重复性好,能快速准确测定人血浆盐酸特比萘芬浓度。     

奥硝唑对雄性大鼠附睾中肉毒碱含量的影响

目的 建立高效液相色谱法(HPLC)测定大鼠附睾组织中肉毒碱的含量.了解奥硝唑引起弱精子症模型动物附睾中影响精子成熟的标志性物质--肉毒碱含量的动态变化,探讨引发动物弱精子症的可能原因.方法 用奥硝唑构建弱精子症模型,给药组分别给予200 mg/kg奥硝唑灌胃,空白对照组给予1%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)灌胃.末次给药24 h后的不同时间用25%的乌拉坦溶液麻醉后取附睾.附睾组织匀浆用蛋白沉淀法进行样品处理,用HPLC法检测在用奥硝唑连续造模20 d期间大鼠附睾中肉毒碱的动态变化.结果 奥硝唑可以使附睾中肉毒碱的含量在造模第2天迅速降低,在造模第5天达最低,并最终维持在4 300μg/ml水平,此水平与空白对照组相比约降低了24%.结论 奥硝唑致动物弱精子症的原因可能是其细胞毒性影响了附睾的吸收功能,干扰附睾对肉毒碱的主动摄取,破坏精子成熟的环境,从而降低了精子的质量.     

构建糖氧剥夺模型大鼠少突胶质细胞体外培养与分离纯化

目的:对原有少突胶质细胞祖细胞培养与分离纯化方法进行改进,以简单、高效获得少突胶质细胞并建立少突胶质细胞糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)模型。方法:取SD乳鼠脑皮质,采用两种不同的细胞增殖法和两种不同的分离纯化法分四组培养,分别为细胞因子增殖联合摇床震荡分离纯化法组,B104CM增殖联合摇床震荡分离纯化法组,细胞因子增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化法组,B104CM增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化法组。倒置显微镜下观察神经细胞形态学变化并进行细胞计数。A2B5和髓鞘碱性蛋白鉴定少突胶质细胞并分析其纯度。纯化后的少突胶质细胞祖细胞分化培养3 d后分四组培养,正常组正常培养,低氧组分三组,换无糖DMEM培养基,OGD 1、2、3 h。然后采用MTT比色法检测细胞活力;流式细胞术分析细胞的凋亡率。结果:(1)B104CM增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化法较其他3种培养方法收获的少突胶质细胞祖细胞数量多(P0.05)。(2)A2B5和MBP特异性标记,细胞纯度可达到95%。(3)MTT结果显示:OGD 1 h少突胶质细胞的细胞活力即降低(P0.05),随着缺氧时间延长细胞活力呈降低的趋势更加明显(P0.05)。(4)流式细胞测细胞凋亡的结果显示:OGD 1 h、2 h、3 h,细胞的凋亡率分别为14.43%±0.20%,21.99%±0.42%和44.71%±0.20%,均高于正常对照组(6.86%±0.05%,P0.05)。结论:(1)B104CM增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化培养法与其他三种方法比较实验操作简单,收获的少突胶质细胞祖细胞数量最多,可用于少突胶质细胞的培养。(2)OGD可致少突胶质细胞损伤,且与OGD持续时间密切相关,实验成功的建立OGD损伤模型。     

携带Lipocalin2基因的腺病毒对结肠癌细胞SW620的体外抑制作用

目的探讨携带Lipocalin2基因的腺病毒对结肠癌SW620细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡的作用。方法以不同浓度梯度的腺病毒作用于体外培养的结肠癌SW620细胞,通过MTT法检测腺病毒对细胞生长的抑制作用,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,透射电镜观察细胞凋亡时的超微形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 MTT实验显示携带Lipocalin2基因的腺病毒可抑制SW620细胞的生长,显微镜下可观察到细胞肿胀、破裂、呈坏死状,透射电镜下观察发现细胞体积缩小,细胞核固缩,核内染色质凝集,并附于一侧核膜的边缘,内质网扩张,空泡形成增多,出现明显的凋亡现象。流式细胞仪可检测到SW620细胞凋亡率明显增加,呈时间及浓度依赖性。结论携带Lipocalin2基因的腺病毒能通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制SW620细胞的生长。     

姜黄素对结肠癌细胞SW620的体外抑制作用及作用靶点的虚拟筛选

目的:探讨姜黄素对结肠癌SW620细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡的作用及虚拟筛选相关作用靶点。方法:以不同浓度的姜黄素作用于体外培养的结肠癌SW620细胞,通过MTT法检测姜黄素对细胞生长的抑制作用,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,透射电镜观察细胞凋亡时的超微形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;计算机辅助设计对作用靶点进行虚拟筛选。结果:MTT实验显示姜黄素可抑制SW620细胞的生长,显微镜下可观察到细胞肿胀、破裂、呈坏死状,透射电镜下观察发现细胞体积缩小,细胞核固缩,核内染色质凝集,内质网扩张,空泡形成增多,出现明显的凋亡现象。流式细胞仪可检测到细胞凋亡率增加,呈时间及浓度依赖性;虚拟筛选出19个可能的作用靶点。结论:姜黄素通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制SW620细胞的生长。     

经食管床与经胸腔行胃食管吻合术后并发症的对比分析

目的:评价经食管床与经胸腔行胃食管吻合术后并发症的发生率。以探讨理想的手术方式。方法:选取1998年至2004年间行手术治疗的286例食管癌患者,148例患者经食管床行胃食管弓上吻合术,138例患者经胸腔(弓前)行胃食管吻合术。对两组患者术后并发症进行归纳、对比。结果:两组病例术后并发症的发生率具有差异性。特别是心肺并发症,差异有显著性(P<0.01)。结论:两种术式相比,经食管床行胃食管吻合术术后并发症显著减少。     

IL-18在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化

目的：研究人IL-18成熟蛋白（mhIL-18）在大肠杆菌中的高效的非包涵体表达以及纯化方案。方法：利用PCR方法扩增出mhIL-18基因，构建融合型表达载体pPTYB1-IL18，转化入大肠杆菌ER2566中，IPTG诱导表达，优化表达条件，超声裂解细胞，采用SDS-PMGE和Weslern blot分析重组蛋白的表达，亲和层析后用MTT法检测表达mhIL-18的活性。结果：成功构建载体并转化入ER2566后，经IPTG诱导，表达量可占菌体总蛋白的26％以上，其中80％以上的mhIL-18融合蛋白以可溶、有活性的形式存在。亲和层析后的mhIL-18纯度可达95％，具有显著的IL-18的生物学活性。结论：成功的在大肠杆菌中的高效以非包涵体表达mhIL-18，并具有显著的IL-18的生物学活性。