IL-18在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化

目的：研究人IL-18成熟蛋白（mhIL-18）在大肠杆菌中的高效的非包涵体表达以及纯化方案。方法：利用PCR方法扩增出mhIL-18基因，构建融合型表达载体pPTYB1-IL18，转化入大肠杆菌ER2566中，IPTG诱导表达，优化表达条件，超声裂解细胞，采用SDS-PMGE和Weslern blot分析重组蛋白的表达，亲和层析后用MTT法检测表达mhIL-18的活性。结果：成功构建载体并转化入ER2566后，经IPTG诱导，表达量可占菌体总蛋白的26％以上，其中80％以上的mhIL-18融合蛋白以可溶、有活性的形式存在。亲和层析后的mhIL-18纯度可达95％，具有显著的IL-18的生物学活性。结论：成功的在大肠杆菌中的高效以非包涵体表达mhIL-18，并具有显著的IL-18的生物学活性。     

复方卡托普利片中未知杂质的来源与结构分析

目的 对复方卡托普利片中新发现的未知杂质进行来源分析和结构的初步确认,以期为该制剂改进工艺和提高标准提供依据。方法 采用Kromasil苯基色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以水-磷酸（550︰0.5）和甲醇为流动相进行梯度洗脱,检测波长为210 nm。对市售的复方卡托普利片中的该未知杂质的含量进行系统的评价;同时采用液质联用的方法对该未知杂质的结构进行确认。结果 该未知杂质为复方制剂的2种原料卡托普利和氢氯噻嗪在受热过程中产生的二聚物,分子式为C₁₆H₂₃N₄O₇S₃Cl;市售产品多数含有该杂质。结论 本研究为复方卡托普利片的质量控制和工艺优化提供了参考依据。     

奥硝唑阴道凝胶剂的制备及质量考察

目的:制备奥硝唑阴道凝胶剂并考察其稳定性。方法:以卡波姆为基质制备奥硝唑凝胶剂,采用HPLC法测定含量。结果:奥硝唑含量测定方法稳定,重复性好,奥硝唑凝胶剂对热和光较稳定。结论:奥硝唑凝胶的制备及质量控制方法可行。     

编码大鼠Nogo受体mRNA的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定

目的:构建Nogo受体(NgR)特异性shRNA重组腺病毒载体,为应用基因沉默技术从转录后水平进行缺血性脑损伤的基因治疗研究奠定基础.方法:将前期构建的大鼠Nogo受体mRNA的shRNA特异性真核表达载体pGenesil-1-shRNA的表达启动子U6连同shRNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack,酶切及DNA测序鉴定后,将含NgR基因的重组穿梭质粒pAdTrack-U6-shRNA经PmeI线性化后转化入pAdEasy-1感受态细菌.将pAd-U6-shRNA质粒经PacI线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒Adeno-U6-shRNA,并进行PCR鉴定、PCR产物测序及病毒滴度测定.结果:结果证实pAdTrack-U6-shRNA及pAd-U6-shRNA质粒构建正确,收获病毒后的PCR及DNA测序结果证明Adeno-U6-shRNA包被成功.结论:成功构建了大鼠Nogo受体mRNA的shRNA重组腺病毒载体Adeno-U6-shRNA,将为应用基因沉默技术研究NgR在缺血性脑损伤后神经再生中的作用奠定基础.     

经食管床与经胸腔行胃食管吻合术后并发症的对比分析

目的:评价经食管床与经胸腔行胃食管吻合术后并发症的发生率。以探讨理想的手术方式。方法:选取1998年至2004年间行手术治疗的286例食管癌患者,148例患者经食管床行胃食管弓上吻合术,138例患者经胸腔(弓前)行胃食管吻合术。对两组患者术后并发症进行归纳、对比。结果:两组病例术后并发症的发生率具有差异性。特别是心肺并发症,差异有显著性(P<0.01)。结论:两种术式相比,经食管床行胃食管吻合术术后并发症显著减少。     

小剂量FP腔静脉持续滴注治疗恶性肿瘤疗效观察

为探讨小剂量FP方案经腔静脉持续滴注疗法在肿瘤化疗中的应用价值，我们将1998年12月至2001年12月收治的60例Ⅲ～Ⅳ期肿瘤患者随机分为治疗组与对照组进行对比研究，现报告如下。     

低分子肝素钙治疗恶性肿瘤合并血栓栓塞症60例疗效分析

目的:探讨低分子肝素钙(速碧林)治疗恶性肿瘤合并静脉血栓栓塞症(venous thromboembo-lism,VTE)的疗效及安全性。方法:回顾性分析2007年8月-2011年7月发生静脉血栓栓塞症的60例恶性肿瘤患者应用速碧林治疗后的转归情况。采用χ2检验分析疗效与各临床因素的相关性及二次血栓发生与各临床因素的相关性;Kaplan-Meier及COX回归分析临床因素与预后的关系。结果:经过皮下注射速碧林治疗,36例(60%)患者的血栓完全缓解(CR);21例(35%)部分缓解(PR);3例(5%)病情稳定(SD)。治疗过程中无严重并发症出现,速碧林的疗效与患者性别、年龄、肿瘤类型、分期、是否吸烟、是否静脉置管、风险评分、治疗时间的长短、血栓时症状的多少、化疗药物的种类、是否合并使用抗血管生成药物、血小板和D-二聚体计数等因素无明显相关性。血小板异常患者二次血栓的发生率明显高于血小板计数正常患者(33.3%vs 2.0%,P=0.009)。单因素分析提示分期早(I,II期)、治疗时间大于30 d和风险评分高(5分以上)的患者预后较好,但多因素分析表明只有分期和风险评分是独立的预后因素。结论:速碧林治疗恶性肿瘤合并血栓栓塞症安全有效,分期早和高风险的患者更能从抗凝治疗中受益。     

高效液相色谱法测定人血浆盐酸特比萘芬浓度

［摘要］目的建立测定人血浆盐酸特比萘芬浓度的高效液相色谱法。方法以利洛司酮作内标,三氯甲烷为提取溶剂,色谱柱Acclaim C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为甲醇 乙腈 0.01 mol&#8226;L 1磷酸二氢钾缓冲液（pH值3.9）（5：45：50）,流速1.0 mL &#8226;min 1。检测波长224 nm。结果血浆盐酸特比萘芬浓度在0.04～2.40 mg&#8226;L 1范围内线性关系良好,加权最小二乘法进行回归运算得回归方程为C＝0.003 2Y+0.051 3,相关系数r＝0.998 6 （n＝7）,最低检测浓度为0.04 mg&#8226;L 1。方法回收率为99.2%～102.5%,日内RSD＜12%,日间RSD＜8%。结论该方法操作简便,灵敏度高,重复性好,能快速准确测定人血浆盐酸特比萘芬浓度。     

奥硝唑对雄性大鼠附睾中肉毒碱含量的影响

目的 建立高效液相色谱法(HPLC)测定大鼠附睾组织中肉毒碱的含量.了解奥硝唑引起弱精子症模型动物附睾中影响精子成熟的标志性物质--肉毒碱含量的动态变化,探讨引发动物弱精子症的可能原因.方法 用奥硝唑构建弱精子症模型,给药组分别给予200 mg/kg奥硝唑灌胃,空白对照组给予1%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)灌胃.末次给药24 h后的不同时间用25%的乌拉坦溶液麻醉后取附睾.附睾组织匀浆用蛋白沉淀法进行样品处理,用HPLC法检测在用奥硝唑连续造模20 d期间大鼠附睾中肉毒碱的动态变化.结果 奥硝唑可以使附睾中肉毒碱的含量在造模第2天迅速降低,在造模第5天达最低,并最终维持在4 300μg/ml水平,此水平与空白对照组相比约降低了24%.结论 奥硝唑致动物弱精子症的原因可能是其细胞毒性影响了附睾的吸收功能,干扰附睾对肉毒碱的主动摄取,破坏精子成熟的环境,从而降低了精子的质量.     

多能干细胞核心调控基因Nanog介导生殖母细胞减数分裂的作用研究

目的 探讨多能干细胞核心调控基因Nanog在原始生殖纽胞(PGCs)向生殖母细胞方向分化过程中的作用.方法 取11.0d胎鼠PGCs,按胚胎干细胞(ES)培养标准进行体外胚胎生殖细胞(EG细胞)培养.采用脂质体方法将Nanog靶向特异性小干扰RNA(siRNA)转染人EG细胞.RT-PCR、免疫荧光法检测siRNA的沉默效率;在倒置相差显微镜下进行体外克隆计数,检测EG细胞增殖未分化状态;TUNEL法和透射电镜检测EG细胞凋亡情况;半定量RT-PCR检测与生殖母细胞减数分裂相关的标志基因(Mvh、Stra8、Sycp3)的mRNA表达.结果 转染siRNA后48h EG细胞Nanog mRNA和蛋白表达明显受抑,典型未分化EG细胞克隆数量显著下降,呈现分化现象,悬浮细胞增多.TUNEL法、透射电镜检测悬浮EG细胞呈现凋亡征象.伴随Nanog表达下调,Mvh、Stra8、Sycp基因mRNA表达上调.结论 到达生殖腺后,多能性PGCs发生生殖母细胞化,开始减数分裂,该过程可能与多能干细胞核心调控基因Nanog的表达下调有关.