肝脾T细胞淋巴瘤转变为淋巴瘤白血病1例临床观察及文献复习

目的:提高对肝脾T细胞淋巴瘤诊断和治疗的认识.方法:报道1例罕见肝脾T细胞淋巴瘤并胸膜浸润及转变为淋巴瘤白血病的全过程,并进行文献复习.结果:肝脾T细胞淋巴瘤属外周T细胞淋巴瘤的一种亚型,临床以发热、脾脏显著肿大、肝大为主要表现,淋巴结一般不受累.其病理特征是淋巴瘤细胞的增殖高度局限在肝脾和骨髓的窦内.PCR检测TCRγ或δ基因重排阳性.结论:本病进展快、疗效差,生存期短,可转变为白血病.PCR检测骨髓标本TCRγ基因重排对该病诊断有帮助.对于合并骨髓浸润的肝脾T细胞淋巴瘤应考虑应用白血病的化疗方案,可能会获得较好疗效.     

竞争性逆转录-聚合酶链反应和毛细管电泳定量检测慢性髓系白血病患者bcr/abl mRNA

ｂｃｒ ａｂｌ融合基因绝大部分融合方式为ｂ3ａ2或ｂ2ａ2型。我们根据竞争性逆转录 酶合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)的原理 ,设计和构建了该基因的竞争性参照物 ,并利用毛细管电泳技术对竞争性ＲＴ ＰＣＲ的产物进行分离分析 ,建立了对该基因精确的定量分析方法。材料和方法1　细胞标本　Ｋ5 6 2细胞系 (含ｂ3ａ2型融合基因 )和ＨＬ 6 0细胞系为本室冻存。含ｂ2ａ2型融合基因的白血病细胞采自1例住院慢性髓系白血病 (ＣＭＬ)患者。ＲｉｂｏＭＡＸＴＭ 体外转录试剂盒购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司。毛细管电泳无胶筛分ＤＮＡ专用试剂盒购自中国科学…     

BioArchive自动液氮储存系统保存的胎盘脐血的冷冻生物学特征

为了解在特定降温和复温过程中于BioArchive自动液氮储存系统保存的胎盘脐血 (PCB)的冷冻生物学特征 ,采用Procount方法流式细胞术测定CD34+ 细胞含量 ,细胞集落形成单位 (CFU)检测CD34+ 细胞的增殖能力 ,台盼蓝拒染法和白细胞分类测定有核细胞活存率和白细胞分类变化。结果显示 ,冻存复温后PCB有核细胞平均活存率为 (73.3± 12 .5 ) % ;PCBCD34+ 细胞的含量在冻存前为 (0 .3± 0 .2 1) % ,冻存复温后为 (0 .4 5± 0 .36 ) %。冻存复温后PCBCFU GM / G/ GEMM形成能力为冻存前的 (97.9± 39.9) %。比较大、小冷冻袋冻存复温后PCB细胞活存率和CFU GM/ G/ GEMM的形成能力无显著差异。另外 ,冻存复温后PCB的白细胞分类明显改变 ,粒细胞百分比明显降低 ,淋巴细胞和单核细胞百分比明显升高。结论 :在本研究中所采用的降温与复温程序不适于保存粒细胞 ,但是能够很好地保存淋巴细胞和单核细胞 ,尤其是CD34+ 的幼稚造血细胞。     

长春新碱、阿霉素、地塞米松联合应用治疗老年人难治性多发性骨髓瘤九例

长春新碱、阿霉素、地塞米松联合应用治疗老年人难治性多发性骨髓瘤九例徐兵，周淑芸，刘启发，宣文兰一、临床资料１９９０年５月至１９９４年８月我院收治了９例难治性多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者，男性６例，女性３例；年龄６０～７４岁，平均６５．７岁。其中ＩｇＧ型７...     

多重实时荧光定量PCR同时检测急性白血病患者WT1和MDR1基因表达水平方法的建立

目的 构建可同时检测AL患者WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR方法.方法 提取K562细胞的总RNA,并逆转录扩增WT1和MDR1的cDNA,通过Bam H Ⅰ及BglⅡ酶切后连接成WT1和MDR1重组片段,对WT1和MDR1重组片段进行PCR扩增,PCR产物纯化后与pMD18载体进行连接,转化宿主菌DH-5α,构建载有WT1和MDR1基因的标准品重组质粒,用限制性核酸内切酶法和PCR法鉴定质粒.用FAM荧光标记MDR1探针、VIC荧光标记WT1探针,建立能在1个试管中同时检测WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR反应体系.应用该体系检测47例AL患者及32例对照者WT1和MDR1基因表达水平,比较两组之间WT1和MDR1基因表达水平的差异,并随访7例AL患者不同病程中WT1和MDR1基因表达水平的变化与临床预后的关系.结果 经EcoR1酶切及PCR法证实WT1和MDR1基因重组质粒已成功构建.所建立多重实时荧光定量PCR方法的灵敏度为102拷贝/μl;所建立标准曲线的R2分别为0.999和0.998.AL患者WT1和MDR1基因的表达水平中位数分别为37 000(163～6 370 000)拷贝/μg RNA和76 200(179～18 000 000)拷贝/μg RNA,显著高于对照组的258(0～643)拷贝/μg RNA和333(0～779)拷贝/μg RNA,差异有统计学意义(Z=6.755、6.736,P＜0.01).对应用相同的诱导和巩固化疗方案治疗的7例AL患者进行随访,3例持续缓解患者中,WT1和MDR1的表达水平在初治时分别为2 170和86 900、1 130和5 860、1 170和586拷贝/μg RNA,治疗后WT1和MDR1的表达水平明显下降,分别为370和560、138和980、150和690拷贝/μg RNA,此3例患者获长期完全缓解.在3例完全缓解后复发患者中,WT1和MDR1表达水平在初治时分别为1 600和11800、24 800和968、48 200和1 100 000拷贝/μg RNA,在化疗获得完全缓解后均降低,但在随后治疗过程中,WT1、MDR1表达量又逐渐升高,分别为20 314和25 660、184 364和31 530、15 680和878 000拷贝/μg RNA,此3例患者最终均出现临床复发.另外1例未缓解患者初治时WT1和MDR1表达水平分别为81 600和1 200 000拷贝/μg RNA,化疗后WT1、MDR1表达水平不仅未下降,反而有所上升,分别为124 100和7 632 400拷贝/μg RNA,此例患者始终未获缓解.结论 本研究成功构建了可同时检测WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR方法.同时检测AL患者WT1和MDR1基因表达水平的变化可能有助于判断预后.

Abstract：

Objective To set up a multiplex real time quantitative PCR method to detect the expression of WT1 and MDR1 gene simultaneously in acute leukemia patient. Methods Total RNA was extracted from k562 cell line and was reverse transcribed to cDNA by the outer primers of WT1 and MDR1 respectively. The cDNA of WT1 and MDR1 were purified and digested by Bam H Ⅰ and Bgl Ⅱ , and then the two fragments were ligated to form the recombinant fragment WT1 + MDR1. The outer forward primer of WT1 and outer reverse primer of MDR1 were used to amplify the recombinant fragment WT1 + MDR1. The PCR product was purified and cloned into pMD18-T vector, and then transferred into E. coli DH-5α. A new kind of WT1-MDRl-contained standard plasmid was obtained from the positive colony. The recombinant plasmid was verified by digestion with restriction enzyme and PCR amplification. A multiplex real time quantitative PCR method was set up with FAM-labeled MDR1 probe and VIC-labeled WT1 probe in one reaction tube. The WT1 and MDR1 gene expression was detected in forty-seven AL patients and thirty-two controls by this method. Seven patients were followed-up to elucidate the relationship between the gene expression levels and clinical prognosis. Results The recombinant plasmid was confirmed by EcoR1 digestion and PCR amplification. The multiplex real time quantitative PCR technique could reach the sensitivity of WT1 and MDR1 gene up to 102 copy/μl. The standard curve slopes were 0. 999 and 0. 998. The WT1 [ 37 000( 163-6 370 000 )copies/μg RNA ] and MDR1 [ 76 200( 179-18 000 000 )copies/μg RNA ]expression levels of AL patients were significantly higher as compared to the controls [ 258( 0-643 ) copies/μg RNA and 333( 0-779 )copies/μg RNA ]( Z= 6. 755,6. 736, P ＜ 0. 01 ). Following up seven patients with similar regimen of chemotherapy, the WT1 and MDR1 expression correlated to the clinical course. Three AL patients with WT1 and MDR1 expression levels (2 170 and 86 900, 1 130 and 5 860, 1 170 and 586 copies/μg RNA )significantly decreased after chemotherapy and kept in the low range ( 370 and 560,138 and 980, 150 and 690 copies/μg RNA ), and had a favorable outcome. Three AL patients with WT1 and MDR1 expression levels ( 1 600 and 11 800, 24 800 and 968, 48 200 and 1 100 000 copies/μg RNA )decreased after initial chemotherapy, but increased significantly afterwards (20 314 and 25 660,184 364 and 31 530, 15 680 and 878 000 copies/μg RNA ),and suffered clinical relapse. One patient with high WT1 and MDR1 expression levels ( from 81 600 and 1 200 000 copies/μg RNA to 124 100 and 7 632 400 copies/μg RNA )showed the persistence of disease. Conclusions A multiplex real time quantitative PCR method to detect WT1 and MDR1 gene simultaneously is constructed successfully. The expression of WT1 and MDR1 may provide useful information for AL patients prognosis.     

急性髓细胞白血病M2型并发硬膜外占位性病变2例

急性髓细胞白血病 (ＡＭＬ)Ｍ2 型 ,最常见ｔ( 8;2 1)染色体异常。我们遇到ＡＭＬＭ2 型并发中枢神经系统硬膜外浸润 2例 ,现报道如下。1　临床资料病例 1.男 ,41岁 ,因咽痛发热 1个月 ,发现全血细胞减少 2 0ｄ ,于 1999- 10 - 11入我院。查体 :轻度贫血貌。血常规 :白细胞 5 1× 10 9/Ｌ ,血红蛋白 98 5ｇ/Ｌ ,血小板 41 6× 10 9/Ｌ。骨髓象示 :有核细胞增生极度活跃 ,原始粒细胞0 2 1,早幼粒细胞 0 15 ,中性中幼粒细胞 0 2 8。细胞化学染色 :过氧化物酶强阳性 ,非特异性脂酶强阳性且不能被ＮａＦ抑制 ,碱性磷酸酶阴性 ,ＦＡＢ分型诊…     

半巢式PCR检测淋巴细胞白血病微小残留病

半巢式ＰＣＲ检测淋巴细胞白血病微小残留病徐兵，周淑芸，孙竞免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排可作为Ｂ－淋巴细胞白血病的克隆标志，一次ＰＣＲ方法检测ＩｇＨ重排敏感性可达１０￣（－４）～１０￣（－５）水平，我们采用更灵敏的半巢式多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测了...     

白血病人骨髓间充质干细胞是否是恶性细胞?

本研究探索白血病人的骨髓间充质干细胞是否也具有白血病恶变特征。分别分离培养急性早幼粒细胞白血病(APL)及慢性髓系白血病(CML)患者的骨髓间充质干细胞并与正常对照比较其形态、生长曲线、细胞表面标志及是否带有白血病细胞的恶性克隆性的基因异常标志。结果表明:白血病患者的骨髓间充质干细胞在细胞生物学特征方面与正常健康人无任何明显差异,未发现白血病患者的骨髓间充质干细胞带有白血病细胞的恶性克隆性基因改变。结论:来源于白血病患者的骨髓间充质干细胞并无相应白血病细胞的克隆性异常,提示可能作为自体移植的辅助治疗和细胞治疗或基因治疗的可供选择的细胞载体。     

Fas死亡信号激发域cDNA的克隆、表达及体外生物学效应

目的：克隆及表达Fas死亡信号激发域(Fas Activation Domain，FasAD)片段，获得具有生物学活性的FasAD多肽。方法：应用半巢式逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增Fas死亡信号激发域cDNA片段，构建Intein表达型原核表达载体FasAD-pTYB12，应用IMPACT^TM-CN系统表达及进行一步法亲合层析分离、纯化FasAD多肽。结果：DNA序列测定显示克隆的FasAD cDNA碱基排列顺序与Genebank(M67454)所示完全一致。重组表达载体FasAD-pTYB12经IPTG诱导，成功表达可溶性融合蛋白，进一步分离、纯化获得分子量约5000的FasAD多肽，Westem blot显示FasAD多肽能被兔抗人Fas多抗识别。初步的生物学活性鉴定显示，该FasAD多肽抑制rhFasL诱导的细胞凋亡的生物学活性最高可达70％。结论：可利用IMPACT^TM-CN系统制备Fas死亡信号激发域的小分子量多肽，为深入研究Fas结构与功能的关系及与配体的相互作用提供了相关的实验基础，为进一步开发相关的生物免疫调节剂提供了实验依据。     

供者淋巴细胞输注对异基因造血干细胞移植后白血病复发的防治作用

自从 1989年报道第 1例急性淋巴细胞白血病 (ＡＬＬ)异基因造血干细胞移植 (ａｌｌｏ ＨＳＣＴ)后白血病复发患者采用供者淋巴细胞输注 (ＤＬＩ)治疗获得成功[1 ] 以来 ,许多研究报告已肯定ＤＬＩ对治疗各种类型白血病ａｌｌｏ ＨＳＣＴ后白血病复发有较好的疗效。目前ＤＬＩ除用于恶性血液病和实体瘤ａｌｌｏ ＨＳＣＴ后肿瘤复发的患者外 ,发展到预防ａｌｌｏ ＨＳＣＴ后白血病的复发 ,甚至有人提出用ＤＬＩ作为白血病化疗获完全缓解(ＣＲ)后的强化治疗[2 ,3 ] 。现就有关ＤＬＩ治疗各类白血病的疗效、治疗方案、应用时机选择、并发症的防…