竞争性逆转录-聚合酶链反应和毛细管电泳定量检测慢性髓系白血病患者bcr/abl mRNA

ｂｃｒ ａｂｌ融合基因绝大部分融合方式为ｂ3ａ2或ｂ2ａ2型。我们根据竞争性逆转录 酶合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)的原理 ,设计和构建了该基因的竞争性参照物 ,并利用毛细管电泳技术对竞争性ＲＴ ＰＣＲ的产物进行分离分析 ,建立了对该基因精确的定量分析方法。材料和方法1　细胞标本　Ｋ5 6 2细胞系 (含ｂ3ａ2型融合基因 )和ＨＬ 6 0细胞系为本室冻存。含ｂ2ａ2型融合基因的白血病细胞采自1例住院慢性髓系白血病 (ＣＭＬ)患者。ＲｉｂｏＭＡＸＴＭ 体外转录试剂盒购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司。毛细管电泳无胶筛分ＤＮＡ专用试剂盒购自中国科学…     

高分辨率熔解曲线分析技术检测苯丙酮尿症患者的苯丙氨酸羟化酶基因突变

目的 应用高分辨率熔解曲线（HRM）分析技术检测苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变.方法 利用PCR扩增13例苯丙酮尿症（PKU）患者的苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因第6、7、11及12外显子,然后对PCR产物进行HRM分析,通过DNA测序对HRM结果进行验证.结果 在13例PKU患者的26个PAH等位基因中共检测出5种不同突变基因,总检出率为38.5％.常见的突变类型是R243Q和A434D.检测出两种多态性位点为Q232Q和V245V.HRM分析结果与测序结果完全一致.结论 HRM技术具有简单、快速、易操作、准确等优点,可用于PKU患者PAH基因突变筛查.     

自制肿瘤标志物复合质控血清稳定性的研究

目的研制一种临床检测中可用于化学发光法检测质量控制的肿瘤标志物复合质控血清。方法从2007～2009年,对液性质控物血清原料的准备、制备、一般性状、和稳定性进行探讨和研究,并与美国伯-乐质控品进行比较。结果经3年验证,用日常检测血清作原料、乙烯乙二醇(EG)作稳定剂制备高低两水平的液性质控物,性质较稳定,重复性好。结论自制肿瘤标志物质控血清的时间稳定性良好,且取材于日常检测标本,成本低,稳定剂价格低廉,适合广大的基层医院使用。     

微流控芯片精子分选法对精子常规参数及DNA完整性的影响

目的:研究微流控芯片精子优选技术对精子常规参数及DNA完整性的影响。方法:自行设计制作微流控芯片,利用芯片处理技术和上游法对40例精液标本进行精子优选,通过计算机辅助精液分析系统及染色质扩散试验从精子常规参数及DNA完整性两个方面评价精液体外处理对精子的影响。结果:精液经微流控芯片法和上游法处理后,精子活力、精子正常形态率以及精子尾部肿胀率均有显著提高(P<0.01),精子的DNA损伤率明显降低(P<0.01)。微流控芯片法与上游法相比,优选后前者精子DNA损伤率明显低于后者[(8.4±5.8)%vs(16.4±9.2)%,P<0.01],而其他参数差异无显著性。结论:微流控芯片技术在精子优选中能获得精子DNA损伤程度小的高质量精子。     

芯片电泳快速检测高危型人类乳头状瘤病毒

目的建立人类乳头状瘤病毒（humanpa pillomavims,HPV）52和58基因型高危型的芯片电泳检测方法。方法选取114例宫颈细胞检测患者,提取宫颈脱落细胞DNA。PCR扩增HPV高危型52和58基因型特异性DNA序列,应用优化的芯片电泳分析方法对扩增产物进行分离检测。根据细胞学诊断结果将研究对象分为4组：正常组、不典型鳞状细胞组、低度鳞状上皮内病变组和高度鳞状上皮内病变组,比较各组的HPV52、58基因型感染情况。结果114份标本中,HPV52基因型检出率为8.8%（10/114）,HPV58基因型检出率为33.3%（38/114）。与正常对照组相比较,各病变组HPV52基因型检出率差异有统计学意义（P〈0.05）;而HPV58基因型检出率在病变组和正常对照组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论芯片电泳法检测快速、成本低,可用于HPV52、58基因型感染的筛查。     

毛细管直接PCR方法快速鉴定NDM-1阳性细菌

目的建立一种无需核酸提取预处理的毛细管PCR方法,用于新德里金属酰胺酶(NDM-1)阳性细菌的快速鉴定。方法考察在直接加入细菌培养液条件下,两种改良型DNA聚合酶Terra和MightyAmp DNA聚合酶对NDM-1编码基因的扩增效果。选用其中一种DNA聚合酶进行毛细管PCR,确定其对于NDM-1阳性细菌的检测限。结果当分别向25 μLPCR反应体系加入1、3、5、7μL细菌培养液条件下,两种DNA聚合酶均能有效扩增NDM-1编码基因序列,Terra DNA聚合酶效果较好。采用两步法毛细管PCR扩增NDM-1编码基因,3 μL反应体积条件下,40个循环反应在20 min内完成。结论应用改良型DNA聚合酶可以免去细菌核酸纯化步骤直接进行PCR。免核酸提取扩增结合毛细管PCR方法可以显著缩短核酸分析时间,适合于NDM-1阳性细菌的快速鉴定。     

毛细管液滴中的乙型肝炎病毒DNA提取与扩增

目的 利用毛细管液滴技术,发展一种集成DNA提取与扩增的乙型肝炎病毒分析方法.方法 利用聚四氟乙烯毛细管的疏水特性,向毛细管中先后引入油相和水相溶液,在表面张力作用下形成油包水液滴.顺序向毛细管中引入含有不同试样的液滴,完成进样、DNA结合、洗涤、洗脱,扩增等过程.微液滴不仅有效解决了样品蒸发和扩散问题,同时在操作中起...     

全自动血细胞分析仪中白细胞假性计数研究进展

全自动血细胞分析仪在许多情况下提供了准确可靠的结果，特别是在检测白细胞时不仅对白细胞及各分类细胞以绝对值和相对值报告，而且还会以散点图形式表示白细胞的分类。但是，多种原因所致白细胞假性减少或假性增高如果不及时识别则会造成临床的误诊或误治。因此，对此类问题的认识和及时地识别有其重要的临床指导意义，同时亦可避免由此引起的医疗纠纷。     

丁胺卡那霉素抑制和解离抗凝剂依赖的假性血小板聚集作用研究

目的研究抑制和解离因抗凝剂所致的假性血小板聚集，建立假性血小板减少症患者血小板准确计数方法。方法对1例罕见的多种抗凝剂依赖假性血小板减少症患者进行追踪试验，观察不同抗凝剂对血小板计数的影响；在EDTA—K2抗凝血内分别加入不同浓度的维生素B6、庆大霉素、氨茶碱、丁胺卡那霉素等抗血小板凝聚剂，在不同的时间段作血小板计数，同时观察血涂片中血小板形态与分布。优选出能确保血小板稳定的抗凝聚剂；并对被优选的抗凝聚剂浓度进行考察。观察取血前和取血后加入抗血小板凝聚剂对血小板聚集的影响。结果EDTA—K2、肝素、柠檬酸钠、氟化钠等抗凝血在室温4h内的观察中，血小板数均有不同程度的下降；在各种抗凝血中分别加入4种抗凝集剂后，除丁胺卡那霉素抗凝聚剂能保持血小板数稳定外，其他抗凝聚剂使血小板数随放置时间延长而下降；将丁胺卡那霉素加在各种抗凝血中无论在抽血前还是抽血后15min内加入，其血小板数在室温4h内保持相对稳定，而且与丁胺卡那霉素浓度呈正相关并趋于稳定，最佳的丁胺卡那霉素浓度为5mg／ml血。结论丁胺卡那霉素可以抑制和解离因多种抗凝剂所致的假性血小板聚集，既可保持血细胞形态稳定利于血细胞分析又可以进行血小板准确计数。     

微流控芯片电泳技术检测肿瘤患者血浆中p16基因甲基化的应用

p16基因甲基化是癌症诊断的标志物之一。目前检测p16基因甲基化的甲基化特异性聚合酶链反应法（MSP）灵敏度有限，对血浆中脱落肿瘤细胞少的标本易报告为假阴性。而微流控芯片电泳技术具有高灵敏度、成本低、分析速度快等特点。本研究用微流控芯片电泳技术检测肿瘤患者血浆中p16基因异常甲基化，并探讨其临床应用价值。