survivin启动子与PSMA启动子/增强子在前列腺癌细胞系中的转录活性比较

目的:通过研究并比较前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因启动子、增强子和survivin基因启动子在不同前列腺癌细胞系(LNCaP和PC-3细胞)中的转录活性,为前列腺癌的靶向性基因治疗提供依据。方法:采用PCR扩增PSMA基因的启动子、增强子和survivin基因启动子,分别克隆入pGL3-Basic,脂质体转染前列腺癌细胞和张氏肝细胞,检测各启动子在细胞中的转录活性。结果:survivin基因启动子在前列腺癌细胞中均具有较强活性,均明显高于PSMA启动子/增强子,其中S2pro启动活性最强,达到CMV启动子活性的1/3,然而,survivin启动子及PSMA启动子/增强子在肝细胞系中几乎不表达。结论:survivin启动子在前列腺癌细胞中具有较强启动活性,可望成为新的前列腺癌靶向性基因治疗工具。     

抗人F蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定

F蛋白是存在于哺乳动物肝细胞浆中的一种水溶性不稳定的单链蛋白质,分子量44000。正常人每克肝组织含有大约274mg F蛋白,而血清中仅含0.2mg。这就使得血清F蛋白可作为判断肝损伤程度的可能。为了提高对F蛋白的研究及检测灵敏度,我们于95年初制备了抗人F蛋白单克隆抗体,现将制备和初步鉴定结果报告如下。     

高压氧联合辛伐他汀治疗脑出血的效果观察CSCD

目的 观察高压氧（hyperbaric oxygen,HBO）联合辛伐他汀治疗对脑出血患者血清白细胞介素-1β（IL-1β）含量的影响及其疗效.方法 将92例患者按患者意愿并在不违背医学伦理学的前提下分成3组,HBO组30例,辛伐他汀组32例,HBO＋辛伐他汀组30例,3组患者在常规治疗的基础上,HBO组再用HBO治疗,辛伐他汀组再用辛伐他汀,HBO＋辛伐他汀组2种方法联合使用,分别于治疗前、治疗15、30 d检测血清IL-1β含量,同时记录各阶段神经功能缺损评分和日常活动Barthel指数（BI）评分.另选31名健康体检者作为正常对照组.结果 脑出血患者血清IL-1β较正常值明显升高（P＜0.05）,HBO组、辛伐他汀组、HBO＋辛伐他汀组治疗后血清IL-1β均下降,HBO＋辛伐他汀组下降更为明显[治疗前（73.56 ±22.40） μg/L,治疗15 d（42.36±16.28） μg/L,治疗30 d（23.25 ±6.62） μg/L];治疗30 d,组间[HBO组（28.32±6.78） μg/L,辛伐他汀组（30.46±5.27） μg/L]比较差异有统计学意义（P＜0.05）;HBO组、辛伐他汀组、HBO＋辛伐他汀组神经功能缺损评分较治疗前均下降,HBO＋辛伐他汀组下降明显,组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）;3组BI评分比较,HBO＋辛伐他汀组上升明显,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 HBO＋辛伐他汀联合治疗脑出血有协同和增强作用,能显著降低脑出血患者血清中IL-1β含量,使神经功能及日常生活活动能力恢复明显.     

甘西鼠尾草总酚酸提取物对电离辐射血管内皮细胞损伤的保护作用及机制研究

目的 研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)对电离辐射血管内皮细胞损伤的保护作用,探讨其抗电离辐射作用机制.方法 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分别给予10000、1000、500、250、125、62.5、30、15、5、1μg/ml SPE溶液处理24 h;HUVEC细胞暴露于10 Gy60Co γ射线照射后培养30 h,分别给予125、250、500 μg/ml SPE溶液处理24 h;HUVEC暴露于10 Gy 60Coγ射线照射后培养1h,加入100 μl组织细胞淋巴瘤细胞(U937细胞)溶液,1h后除去未黏附的细胞,分别给予125、250、500 μg/ml SPE溶液处理3h.采用MTS法检测以上溶液细胞活力变化.HUVEC暴露于10 Gy60Coγ射线照射后培养6h,分别给予125、250、500 μg/ml SPE溶液处理3h后,测定活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)含量,继续培养6h后,采用Western印迹检测Bcl-2、Bax、THBD、γH2AX、ICAM-1、VCAM-1等蛋白表达.结果 HUVEC可耐受1000 μg/ml以下的SPE溶液.对10000 μg/ml SPE溶液,其细胞活力下降极显著(P＜0.0001).与辐射模型组相比,250和500 μg/ml SPE剂量组的辐射HUVEC活力显著升高(P＜0.01)、与U937细胞间黏附比例显著降低(P＜0.01);SPE各组的ROS、MDA水平显著降低(P＜0.01),SOD、GSH水平显著升高(P＜0.01),且效应强度与剂量均呈正相关.SPE各组Bcl-2、THBD蛋白表达显著升高,Bax、γH2AX、ICAM-1及VCAM-1蛋白表达显著降低.结论 SPE可通过调节凋亡及细胞周期相关蛋白,增强血管内皮细胞抗凋亡能力和细胞活力,通过抑制单核细胞黏附、降低脂质过氧化、减轻血管内皮细胞氧化应激及炎症损伤等机制,对电离辐射血管内皮细胞损伤具有保护作用.     

新疆维吾尔族、汉族载脂蛋白E基因及尿激酶型纤溶酶原激活因子基因多态性与Alzhemier病的关系

目的 探讨新疆维吾尔族(维族)、汉族载脂蛋白E( ApoE)基因及尿激酶型纤溶酶原激活因子( PLAU)基因多态性与Alzheimer's病(AD)的关系.方法 应用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)方法,检测209例很可能AD患者(AD组,汉族98例,维族111例)及220名正常对照者(NC组,汉族103人,维族117人)的ApoE基因及PLAU基因第6号外显子r2227564s基因型及等位基因频率.结果 AD组中,维族、汉族ApoE ε3/4基因型及ε4等位基因频率明显高于NC组;其与PLAU基因C/T基因型组合的频率明显高于NC组(均P＜0.05);具有ApoE ε3/3基因型的维族T/T基因型频率明显高于NC组(P＜0.05).结论 ApoE基因多态性可能与AD相关;PLAU C/T基因型可能增加具有ApoE ε3/4基因型及ε4等位基因者AD的发病风险;PLAU T/T基因型可能增加具有ApoE ε3/3基因型、ε3等位基因的维族AD的发病风险.     

非浓缩尿蛋白质全自动SDS-AGE电泳系统的建立及临床应用

目的以国产电泳仪为平台,建立非浓缩尿蛋白质全自动SDS-AGE电泳系统。方法用国产SH-2020电泳仪为平台建立非浓缩尿蛋白质全自动SDS-AGE电泳系统,以Hydrasys(Sebia)全自动电泳系统对照,对120例尿蛋白质阳性标本进行电泳、染色、程序扫描和结果分析。结果非浓缩尿蛋白质SH-2020全自动SDS-AGE电泳系统可有效地将尿蛋白质按分子量大小分离,结果与Hydrasys全自动电泳系统一致。结论建立的非浓缩尿蛋白质SH-2020全自动SDS-AGE电泳系统对尿蛋白质分离效果好,灵敏度高,可自动化操作,可取代进口设备,成本低廉。     

靶向survivin的microRNA和siRNA抑制前列腺癌细胞survivin基因表达和凋亡作用的比较

目的：构建靶向survivin的microRNA表达载体,观察其与siRNA表达载体对survivin基因表达的抑制作用。方法：以survivin为靶基因,根据pPRIME设计针对survivin的microRNA序列,获得目的片段克隆到相应载体中,序列正确的载体脂质体转染前列腺癌PC-3细胞,RT-PCR和Western Blot检测其对survivin基因表达的抑制作用,流式细胞术和电镜观察其对细胞凋亡的影响。结果：双酶切鉴定、DNA测序证实构建的microRNA表达载体序列正确,序列正确的microR-NA和siRNA表达载体在mRNA和蛋白水平上均能明显抑制PC-3细胞中survivin的表达,流式细胞术和电镜结果显示其可促进PC-3细胞的凋亡,且microRNA表达载体的作用效果较siRNA表达载体强。结论：Survivin靶向microRNA和siRNA均能抑制靶基因的表达,诱导前列腺癌细胞凋亡,与siRNA相比,microRNA作用效果更强。     

介绍一种体外培养细胞免疫组化检测方法

随着生物医学及临床医学的发展,免疫组化检查越来越多的被用到体外培养细胞的研究中。本文介绍一种在平底细胞培养板上直接进行的免疫组化SP法,效果满意,现介绍如下。     

聚乙二醇化干扰素治疗慢性丙型肝炎

将聚乙二醇（FEG）化学连接于治疗蛋白质能增加血浆半衰期、减少毒性、增强药物的稳定性和溶解性。PEG结合蛋白质通过减少免疫系统发现和攻击外源物的能力以增加其治疗效果。由活化的PEG单体与蛋白质偶联制备PEG蛋白结合物，这种偶联策略有多种选择。PEG化干扰素-α用于治疗慢性丙型肝炎病毒性感染已进行了大量临床研究工作，并获得肯定的疗效。已有3种PEG蛋白结合物被FDA批准，临床应用于治疗严重的复合性免疫缺陷病和治疗各种白细胞增多症。