针刺及光照等不同授时因子对金黄地鼠视交叉上核一氧化氮合酶表达的影响

目的：通过观察针刺及光信息等不同授时因子导引对金黄地鼠视交叉上核一氧化氮合酶表达的影响。方法：实验于2002-08／2004-10在成都中医药大学针灸推拿学院和四川大学华西基础医学与法医学院组织胚胎学和神经生物学教研室完成。实验动物为健康雄性叙利亚金黄地鼠90只，体质量110～140g，随机分为电针组、光脉冲导引组、8-羟基-丙胺-四氢柰组、捆绑对照组、电针+光脉冲导引组、电针+8-羟基-丙胺-四氢柰组。每组15只。金黄地鼠经驯化后进入自由运行状态，在恒定黑暗第3天于近似昼夜时间9：00，15：00，21：00分别给予电针、光脉冲、8-羟基-丙胺-四氢柰、捆绑、电针+光脉冲导引、电针+8-羟基-丙胺-四氢柰刺激，每个时间点5只动物。各方法治疗2h后用免疫组织化学方法和图像分析技术，检测各组金黄地鼠视交叉上核中一氧化氮合酶的吸光度值，并采用q检验方法进行统计学分析结果：90只金黄地鼠全部进入结果分析。各组各时间点视交叉上核一氧化氮合酶表达情况；在近似昼夜时间15：00光脉冲导引组比捆绑对照组视交叉上核内一氧化氮合酶的表达显著增加（116.600&;#177;8.678，109.600&;#177;8.735,q=54.00,P&;lt;0.05),近似昼夜时间21：00光脉冲导引组且捆绑对照组视交叉上核内一氧化氮合酶的表达显著增加（130.800&;#177;5.762,101.000&;#177;9.407,q=35.80，P&;lt;0．05)；而在近似昼夜时间9：00电针组和电针+8-羟基-丙胺-四氢柰组较捆绑对照组视交叉上核内一氧化氮合酶的表达显著增加(115．833&;#177;9．641，110．667&;#177;0．210，79．833&;#177;17．600，q=36．00，30．83，P&;lt;0．05)。结论：光信息在近似昼夜时间15：00和21：00可以增加视交叉上核的一氧化氮合酶活性，说明光照对一氧化氮的影响只在主观晚上。针刺在近似昼夜时间9：00可以增加视交叉上核内一氧化氮合酶的表达，说明针刺对一氧化氮的影响只在主观白天。     

雷公藤多甙对佐剂性关节炎模型大鼠踝关节相关指标的影响

背景:类风湿性关节炎是常见的自身免疫性疾病。近年来雷公藤多甙广泛应用于类风湿性关节炎治疗,其治疗过程中对关节滑膜炎症的影响及对类风湿性关节炎的预防作用有待研究。目的:观察雷公藤多甙对佐剂性关节炎模型大鼠踝关节相关指标的影响。设计:随机对照动物实验。单位:四川大学基础医学与法医学院组织胚胎学与神经生物学教研室。材料:选用20只健康清洁级雌性SD大鼠,体质量(200±15)g,鼠龄二三个月,由四川大学实验动物中心提供。氟氏完全佐剂为Sigma公司产品,雷公藤多甙为湖南株州制药三厂产品(批准文号:湘卫药准字(2005)第055172号。剂量:10mg/片)。方法:实验于2004-05/2006-03在四川大学组织胚胎学和神经生物学教研室完成。抽签法随机将大鼠分为正常组、模型组、预防组及治疗组,每组5只。正常组不造模,不给药物治疗;模型组于实验开始后,分别在各个大鼠左后足垫部皮下注射氟氏完全佐剂0.2mL,不给药物治疗;预防组造模方法同模型组,造模后第7天开始灌胃给予雷公藤多甙,用药剂量以大鼠体表面积换算公式计算,1次/d,每次30mg/kg,共7d;治疗组造模方法同模型组,造模后第19天开始灌胃给予雷公藤多甙,方式和疗程同预防组。①采用足跖容积法于造模前,造模后2,10,15,19,22,26d不同时间点观察记录大鼠原发侧与继发侧关节后肢肿胀程度。②根据其余未注射的3只肢体的病变程度及指间趾间关节是否发炎,评价大鼠关节炎指数(0分:肿胀度≤5%;1分:肿胀≤15%;2分:15%<肿胀≤30%;3分:30%<严重肿胀≤60%;4分:肿胀>60%),把每个关节的得分累计起来,即为每只大鼠的关节炎指数。③造模后28d取材,将大鼠灌注固定后,取完整踝关节切片,苏木精-伊红染色后观察大鼠踝关节滑膜组织的改变。主要观察指标:各组大鼠关节肿胀程度、关节炎指数及踝关节滑膜组织学观察。结果:大鼠20只均进入结果分析。①造模2d后,除正常组外,其他各组大鼠原发侧关节均出现明显肿胀,造模2～26d各时间点大鼠足跖容积均大于正常组(t=2.315～3.041,P<0.05);预防组大鼠造模后10,15,19,22,26d原发侧足跖容积小于模型组(t=2.064～2.683,P<0.05);治疗组大鼠造模后22,26d原发侧足跖容积小于模型组(t=2.112～2.578,P<0.05)。造模15d后,模型组和治疗组大鼠继发侧足跖容积均大于正常组(t=2.201～2.546,P<0.05),预防组大鼠造模15,19,22,26d继发侧足跖容积小于模型组(t=2.373～2.425,P<0.05);治疗组大鼠造模26d继发侧足跖容积小于模型组(P<0.05)。②造模14d,模型组大鼠关节炎指数为(8.3±2.0)分,预防组为(0.4±0.95)分,预防组较模型组明显降低(t=2.64,P<0.05);造模26天,治疗组为(7.3±1.3)分,明显低于模型组(11.2±0.9)分(t=3.26,P<0.05)。③正常组大鼠踝关节腔内干净,关节软骨表面光滑,软骨无退行性变,滑膜组织无增生。模型组大鼠原发侧踝关节滑膜增生,滑膜细胞数量增多,体积增大,排列为多层;滑膜下组织水肿,充血,炎性细胞浸润。模型组继发侧继发性病变表现为滑膜增生,踝关节滑膜下组织水肿。预防组原发侧踝关节滑膜与模型组比较,滑膜炎症反应减弱,增生程度减轻。继发侧踝关节滑膜未见明显增生。治疗组原发侧及继发侧踝关节滑膜与模型组比较,滑膜组织增生减少,炎症反应减轻。结论:雷公藤多甙能显著减轻大鼠足跖关节肿胀度,关节炎症指数,减轻踝关节滑膜病理改变,且能预防继发性病变的出现。     

大鼠下丘脑室旁核对神经免疫调节的基因调控研究

下丘脑室旁核(paraventricular nucleus of hypothalamus,PVN)是神经免疫调节的整合性中枢 ,为了探讨 PVN内肽能神经元对免疫调节的基因调控 ,本研究采用 SD大鼠 10 0只 ,随机分为免疫增强、免疫抑制及其对照组各 2 5只 ,分别用皮下注射牛血清白蛋白 (BSA)或腹腔注射环磷酰胺建立免疫增强和免疫抑制动物模型 ,观察血清 Ig G及 IL - 2动态变化 ,以了解免疫应答过程。在免疫反应开始增强 (E1组 ) /或开始抑制 (I1 组 )及免疫反应达高峰(E2 组 ) /或抑制最低 (I2 组 )时灌注取脑 ,冰冻切片 (30μm ) ,以地高辛标记的 AVPc DNA寡核苷…     

肺教学标本制作的探索

肺是人体的重要器官,是组织学教学中必不可少的主要内容。但要制作理想的肺切片标本供教学使用却很不容易。通常的方法是将动物处死后开胸取肺直接入固定液固定,然后切片染色。这种方法常致肺泡塌陷,结构保存欠佳,难以符合教学的要求。鉴此,我们在制作肺切片标本时,对取材和固定等环节进行了一些改进,得到满意的效果,现将方法介绍如下。1　材料与方法1.1　材料:成年家兔4只,体重2-2.5Kg,随机分为实验组与对照组各2只。1.2　实验组:从耳静脉注射空气致死动物,结扎气管后开胸。将上下腔静脉和主动脉结扎后用注射器从右心室缓慢注入bouin固定…     

大鼠脾脏的神经支配——荧光金及PRV追踪研究

本实验采用荧光金(FG)神经追踪及假狂犬病毒(PRV)跨神经元追踪方法研究了中枢神经系统与免疫器官之间的直接神经通路联系,为调节网络的深入研究提供形态学基础。成年雄性SD大鼠7只(体重250～300g)分为对照组1只,实验组6只,其中2只脾脏内注射FG10μl,另4只脾脏内注射PRV35～60μl。动物分别存活72h、96h后灌注固定,恒冷箱冰冻切片。注射荧光金大鼠的组织切片用Nikon荧光显微镜观察,注射PRV大鼠的切片用抗PRV血清为一抗的ABC法免疫染色,DAB呈色后观察。结果显示:1所有实验组大鼠脾被膜及实质内均见到被FG或PRV标记的呈患珠状的神…     

综合四法治疗腰椎间盘突出症70例临床观察

目的：观察综合四法治疗腰椎间盘突出症的临床疗效。方法：将120例患者随机分为治疗组和对照组，治疗组口服中药加牵引、针灸、推拿手法治疗；对照组只采用牵引、针灸、推拿治疗。结果：治疗组治愈36例，总有效率94．2％；对照组治愈20例，总有效率80．6％。治疗组疗效明显优于对照组（P〈0．05）。结论：综合四法治疗腰间盘突出症方便、安全、无损伤、吸收快、疗效确切，是较理想的治疗方法。     

精氨酸血管加压素 mRNA在不同免疫应答期大鼠下丘脑室旁核的表达变化

目的研究大鼠下丘脑室旁核(PVN)内精氨酸血管加压素(AVP)mRNA的表达与免疫应答反应间的动态关系.方法建立免疫增强及免疫抑制大鼠模型,应用原位杂交组织化学及图像分析技术检测免疫反应不同时期大鼠PVN内AVP mRNA的动态变化.结果①免疫抑制组大鼠PVN单个细胞内AVP mRNA阳性杂交信号的平均面积明显低于免疫增强组及对照组(P＜0.05).②PVN单个细胞内AVP mRNA阳性杂交信号的平均灰度值在免疫反应高峰时显著低于免疫反应开始增强时(P＜0.05),在免疫抑制最低时却明显高于免疫反应开始受抑制时(P＜0.05).③AVP mRNA阳性杂交信号在PVN内所占的总面积在免疫反应高峰时显著大于免疫反应开始增强时和对照组(P＜0.05),在免疫抑制最低时则明显小于免疫反应开始受抑制时(P＜0.05).④AVP mRNA阳性杂交信号在整个PVN内的平均灰度值在免疫反应高峰时明显低于免疫反应开始增强时(P＜0.05),在免疫抑制最低时却明显高于免疫反应开始受抑制时(P＜0.05).结论 PVN内AVP mRNA的含量与免疫应答反应的强度成正比,AVP基因的转录随免疫应答反应的变化而变化.     

针刺对金黄地鼠视交叉上核c-Fos表达的影响

目的观察针刺导引对金黄地鼠视交叉上核内c-Fos表达的影响。方法实验动物为雄性叙利亚金黄地鼠,共30只,随机分为电针组和捆绑对照组,每组15只。金黄地鼠经驯化后进入自由运行状态,在恒定黑暗第3天于近似昼夜时间(CT)9:00,15:00,21:00分别给予电针、捆绑刺激,每个时间点5只动物。各方法治疗2小时后用免疫组织化学方法检测各组金黄地鼠视交叉上核中c-Fos的免疫反应阳性细胞并对此进行计数,采用q检验方法进行统计学分析。结果30只金黄地鼠全部进入结果分析。针刺组与捆绑对照组比较在CT9:00和CT21:00可使视交叉上核内c-Fos表达显著增加(85.50±11.21,42.50±5.32,q=43.00,p<0.01;52.00±2.94,38.50±3.87,q=13.50,p<0.01)。结论针刺在CT9:00及CT21:00可使c-Fos表达增加,说明针刺对c-Fos表达的影响在主观白天及主观夜间的后半期。     

大鼠下丘脑室旁核一氧化氮和外周血白细胞介素1β含量的昼夜节律变化及相关性的探讨

目的:探讨大鼠外周血白细胞介素1β(IL-β)和下丘脑室旁核中的一氧化氮是否具有昼夜节律以及两者的相关性。材料和方法:成年雄性SD大鼠24只随机分为4组,分别在16:00、22:00、4:00和10:00时腹腔注射细菌脂多糖。两小时后,分别麻醉采血及灌注取脑。采用放射免疫分析法测定外周血IL-1β的含量,运用β-NADPH-酶组化和计算机图像分析技术对室旁核中NADPH-d阳性神经元的切面面积和平均灰度值进行分析。结果:1.6:00时组外周血IL-1β含量最高,12:00时组最低,显示出明显的昼夜节律性。2.四组大鼠室旁核内NADPH-d阳性神经元的切面面积12:00时组最大,18:00时组最小,差异有显著性。3.外周血IL-1β含量昼夜节律变化的时相比室旁核一氧化氮产生量昼夜节律变化的时相早6小时。结论:大鼠外周血中IL-1β和室旁核一氧化氮的产生量均有昼夜节律性变化,外周血中IL-1β可能对室旁核一氧化氮的产生有促进作用。     

摘除双侧眼球对大鼠视交叉上核节律性的影响

成年Ｗｉｓｔａｒ雌鼠５７只，随机分为实验组３０只，行双眼摘除术。对照组２７只。术后４周将各组动物体重相近的每３只列为一个配伍组，分别在０９：００～１０：００、１７：００～１８：００、２３：００～２４：００三个时间处死。将含有视交叉上核的脑组织经固定、恒冷箱切片后，用免疫组化ＡＢＣ法染色显示视交叉上核内含ＶＩＰ或ＡＶＰ的神经元，微机图像分析仪上测量光镜下这两种神经元的相对切面面积及平均免疫反应强度。结果：（１）对照组不同时间处死的动物ＶＩＰ能神经元切面面积以２３：００～２４：００最大，０９：００～１０：００次之，１７：００～１８：００最小，呈昼夜节律变化，ＡＶＰ能神经元也以２３：００～２４：００最大，但在０９：００～１０：００和１７：００～１８：００间差异无显著性；（２）摘除双眼后各时间组间ＶＩＰ能神经元和ＡＶＰ能神经元切面面积均不再显示显著性差异。提示实验组动物视交叉上核的这两种神经元功能活动的昼夜节律已发生改变；（３）实验组和对照组动物的ＶＩＰ能神经元和ＡＶＰ能神经元平均免疫反应强度在所测的三个时间中，均未见明显差异。