miR-15a／16在多发性骨髓瘤患者中的表达研究北大核心CSCD

染色体异常和血管生成在多发性骨髓瘤（multiplemyeloma,MM）发病中占有重要地位。13q14缺失是MM患者最常见的染色体异常,miR-15a／16即定位于该染色体上。     

利妥昔单克隆抗体治疗不同激素敏感性的ITP患者的疗效比较

目的:观察小剂量利妥昔单克隆抗体治疗糖皮质激素无效和依赖的ITP患者的疗效及其与激素敏感性的关系,为临床医师合理用药提供参考。方法:将79例ITP患者纳入研究,其中对糖皮质激素无效的19例,对糖皮质激素依赖的有60例。对所有患者给予地塞米松40 mg/d×4,d 7、14、21、28静脉滴注利妥昔单克隆抗体100 mg,治疗后对所有患者随访12个月,分析患者对激素的敏感性与利妥昔单克隆抗体治疗反应的关系。应用流式细胞术及ELISA法检测治疗前后Tregs比例,BAFF、IL-2和sCD40L水平的变化。结果:79例ITP患者经地塞米松联合利妥昔单克隆抗体治疗后1、3、6及12个月的总有效率分别为79.7%(63/79)、69.6%(55/79)、63.3%(50/79)和60.8%(48/79),其中对糖皮质激素无效(n=19)和存在糖皮质激素依赖(n=60)的ITP患者1、3、6和12个目的总有效率分别为47.4%(n=9)vs 90.0%(n=54);36.8%(n=7)vs 80.0%(n=48);21.1%(n=4)vs 76.7%(n=46);21.1%(n=4)vs 73.3%(n=44),2组间差异具有统计学意义。进一步分析两组治疗后1、3、6及12个月2组Treg细胞比例分别为(1.70±0.43)%vs (3.47±0.72)%;(1.66±0.33)%vs (4.29±0.91)%;(1.71±0.37)%vs (4.44±0.97)%;(3.36±0.54)%vs (4.29±1.04)%。研究结果表明,糖皮质激素依赖患者在治疗1个月后血浆中BAFF,IL-2和sCD40L的水平明显降低(P0.05),糖皮质激素无效患者的BAFF、IL-2和sCD40L水平虽然也有降低,但2组间差异无统计学意义。结论:对糖皮质激素依赖的患者应用利妥昔单克隆抗体治疗更有效,对Treg细胞、BAFF,IL-2和sCD40L调节是其可能机制之一。     

异基因造血干细胞移植中急性移植物抗宿主病的影响因素

急性移植物抗宿主病(aGVHD)严重影响异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的移植成功率,是移植相关死亡的重要原因.目前,通过研究aGVHD的相关影响因素,降低allo-HSCT后aGVHD的发生率是国内外学者研究的热点之一.本文拟就供、受者因素,移植前的预处理方案,以及移植物抗宿主病(GVHD)的预防等方面,对近年allo-HSCT中aGVHD相关影响因素的研究最新进展进行总结.     

小鼠造血干细胞移植后移植物抗宿主病与内皮细胞损伤的关系

目的 探讨异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病(GVHD)与内皮细胞损伤的关系.方法 以C57BL/6小鼠为供者、Balb/c小鼠为受者,分4组进行异基因造血干细胞移植,每组受者15只:对照组(仅输入磷酸盐缓冲液)、单纯骨髓移植组(仅输入骨髓单个核细胞)、GVHD组(输入骨髓单个核细胞和脾细胞)、GVHD减轻组(在GVHD组基础上加用环孢素A).分别于移植后不同时间观察受者的表现,检测外周血中内皮细胞及组织病理学变化.结果 术后第5天,各组受者均无典型的GVHD表现及组织病理学改变;术后第9天,GVHD组受者出现明显的GVHD的表现及病理学改变,并于15 d内全部死亡.术后第5天,单纯移植组、GVHD组和GVHD减轻组受者的外周血中内皮细胞数分别为(11.51±7.40)、(7.34±1.26)和(7.36±0.16)个/μl,三组间差异均无统计学意义(P＞0.05);术后第9天,内皮细胞数分别为(10.49±5.61)、(153.64±35.35)及(47.82±4.69)个/μl,三组间差异均有统计学意义(P＜0.05).术后第5天,单纯移植组、GVHD组、GVHD减轻组受者GVHD靶器官组织病理学评分分别为3.33±0.58、4.33±1.53及4.0±1.73,三组间差异均无统计学意义(P＞0.05);术后第9天,评分分别为3.33±1.15、10.0及4.33±0.58,三组间差异均有统计学意义(P＜0.05);术后第14天,评分分别为2.33±1.25、10.33±2.58和3.33±1.15,三组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 GVHD的发生再次引起内皮的损伤,同时损伤的内皮加重了GVHD.

Abstract：

Objective To study the relationship between graft-versus-host disease (GVHD) and endothelium injury following hematopoietic stem cells transplantation in mice. Methods C57BL/6 mice as donors and Balb/c mice as recipients were randomly divided into 4 groups: control group, bone marrow transplantation group, GVHD group, GVHD mitigation group. The clinical manifestations,circulating endothelial cells and tissue pathological changes were observed at different time points after transplantation. Results No manifestations of GVHD were found in each group at the day 5, while those were found in GVHD group at the day 9 and all died within 15 days. The counts of endothelial cells in peripheral blood showed no significant difference at the day 5 between GVHD group (7. 34 ±1.26 cells/μl) and bone marrow transplantation group (11.51 ± 7. 40 cells/μl) or GVHD mitigation group (7. 36 ± 0. 16 cells/μl), while among three groups there was statistically significant difference at the day 9 (GVHD group: 153. 64 ± 35. 35 cells/μl vs bone marrow transplantation group: 10. 49 ±5. 61 cells/μl and GVHD mitigation group: 47. 82 ± 4. 69 cells/μl). The scores of pathological aGVHD had no significant difference at the day 5 between GVHD group (4. 33± 1. 53) and bone marrow transplantation group (3. 33 ± 0. 58) or GVHD mitigation group (4. 00 ± 1.73), while among three groups there was statistically significant difference at the day 9 (GVHD group: 10. 0 vs bone marrow transplantation group: 3. 33 ± 1.15 or GVHD mitigation group: 4. 33 ± 0. 58) and at the day 14 (GVHD group: 10. 33 ± 2. 58 vs bone marrow transplantation group: 2. 33 ± 1.25 or GVHD mitigation group 3. 33 ± 1.15). Conclusion Occurrence of GVHD causes endothelial damage again and injured endothelium worsens the GVHD.     

小鼠异基因造血干细胞移植中清髓照射对供者来源内皮祖细胞归巢的影响

目的 研究异基因造血干细胞移植预处理因素--清髓照射对供者来源内皮祖细胞(EPCs)归巢的影响. 方法 密度梯度离心和差速贴壁法获取小鼠骨髓单个核细胞,EGM-2培养基培养,5～7 d检测CD133+CD31+CD45low表面标记及吸食Dil-Ac-LDL和结合FITC-UEA-1鉴定,并行羟基荧光素=醋酸盐琥珠酰亚胺酯(CFSE)标记.实验分组:正常组,正常+EPCs移植组,照射组,照射+EPCs移植组.流式细胞术(FCM)分析外周血、脾脏和骨髓中内皮细胞(ECs)、EPCs和CFSE阳性细胞比例;病理、电镜和免疫荧光分析各组织的损伤情况及CFSE标记EPCs的分布. 结果 流式细胞术鉴定内EPCs为CD45lowCD133+CD31+;Dil-ac-LDL+、FITC-UEA-1+.照射后短时间内循环中ECs即开始升高,第5 d达高峰,持续到第7 d,与正常组相比差异有统计学意义 (P<0.05);循环中EPCs照射后短时间内也增加,于第4 d达到峰值,随后下降至正常水平,其增加与正常组相比差异有统计学意义 (P<0.05).照射后3 d光镜下肝脏弥漫性的炎症浸润,小肠大量炎症细胞浸润;电镜下肝脏中血小板聚集到内皮下暴露的胶原上,小肠中ECs和基底膜间被损坏.照射+EPCs移植组,荧光显微镜下观察,移植后3 h见CFSE阳性细胞归巢至损伤的肝脏和小肠,细胞少且不连续; 36 h细胞较多,且呈连续性.结论 移植预处理中的清髓照射可引起严重的内皮损伤, 该损伤启动了EPCs的动员,并驱动外源性EPCs归巢至损伤比较重的组织中.     

神经型钙黏蛋白分子在多发性骨髓瘤患者中的表达

目的 探讨神经型钙黏蛋白（N-cadherin）分子在多发性骨髓瘤（MM）患者中的表达及其临床意义.方法 收集54例初治MM患者及20名健康人骨髓单个核细胞,应用实时荧光定量PCR法检测N-cadherin mRNA表达,Western blot法测定其蛋白表达.结果 MM患者N-cadherin mRNA表达水平为6.056±3.033,健康对照组为1.788±0.778,二组相比差异有统计学意义（P＜0.0001）.按照ISS分期,Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期MM患者N-cadherin mRNA表达水平分别为3.681±3.185、5.757±3.292、7.460±3.647,其中Ⅱ期、Ⅲ期与健康对照组相比差异均具有统计学意义（均P＜0.05）;Ⅰ期与健康对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）.有髓外浸润及无髓外浸润患者N-cadherin mRNA表达量分别为9.159±3.178、5.083±3.288,差异有统计学意义（P＜ 0.001）.有骨质破坏和无骨质破坏患者N-cadherin mRNA表达量分别为6.544±3.729、4.240±2.896,差异有统计学意义（P=0.047）.初治MM患者N-cadherin mRNA表达水平为6.056±3.033,治疗后有效患者N-cadherin mRNA表达水平下降（3.768±2.216）（P=0.015）,治疗无效患者N-cadherin mRNA水平与治疗前相比差异无统计学意义（P＞0.05）.初治MM患者N-cadherin蛋白表达量明显高于缓解期患者及健康对照组,而在治疗后复发的患者中,N-cadherin蛋白表达量明显高于初治患者.结论 N-cadherin分子在MM患者中高表达,其可能参与MM的发生及发展.     

利尿合剂在心力衰竭伴顽固性水肿的临床应用

目的：观察利尿合剂在治疗心衰伴顽固性水肿的临床疗效。方法：24例心衰伴顽固性水肿患者在休息,限制水、钠摄入,洋地黄制荆,ACEI及血管扩张剂治疗的基础上应用多巴胺20mg、速尿100mg,加入低分子右旋糖酐250ml组成利尿合剂,静脉滴注,每日1次,3～5d后停用。结果：24例心衰伴顽固性水肿患者显效7例,有效14例,无效3例。结论：利尿合剂治疗心衰伴顽固性水肿效果显著。     

稳定下调血管内皮钙黏蛋白表达对K562细胞药物敏感性的影响

目的:探索稳定下调VE-cadherin蛋白对K562细胞药物敏感性的影响及其可能的机制。方法:设计靶向人VE-cadherin的特异性干扰序列,连同IRES-GFP及NEO基因片段,构建重组慢病毒载体;三质粒系统包装慢病毒颗粒,感染K562细胞,筛选稳定下调VE-cadherin的K562细胞。应用CCK8法测定K562细胞对伊马替尼药物敏感性的变化,AnnexinⅤ/7-AAD标记细胞,流式细胞术检测细胞凋亡;荧光定量PCR检测白血病细胞CD133、ALDH1的转录水平;Western blot方法检测白血病细胞VE-cadherin、BCR-ABL和β-catenin表达水平。结果:成功构建重组慢病毒载体pLB-sh VEC-NEO-IRES-GFP,并包装慢病毒,筛选出稳定下调VE-cadherin蛋白的K562细胞株。稳定下调K562细胞VE-cadherin表达后,在相同药物浓度处理下白血病细胞增殖率降低,凋亡率升高,CD133及ALDH1转录水平降低,BCR-ABL融合蛋白表达水平无明显变化,总β-catenin蛋白表达水平下降,细胞核β-catenin蛋白水平亦下降。结论:稳定下调K562细胞VE-cadherin蛋白的表达可使白血病细胞药物敏感性增高,其机制可能与降低β-catenin蛋白的稳定性、减少β-catenin蛋白的核转位有关的。     

慢病毒介导RNAi干扰β-catenin对小鼠骨髓间充质干细胞生物学行为的影响

本研究通过构建β-连环蛋白（β-catenin）特异的RNAi慢病毒表达载体,探讨阻断Wnt／β-catenin信号通路对骨髓间充质干细胞（MSC）生物学行为的影响。设计3对针对β-cateninmRNA不同位点的shRNA编码序列,分别连接到慢病毒载体质粒PLB中,构建PLB-β-catenin／shRNAl,PLB-β-catenin／shRNA2和PLB-β-catenin／shR-NA3;将重组质粒与慢病毒包装质粒及包膜蛋白质粒共转染293FT细胞,收获病毒颗粒,浓缩后测定病毒滴度,感染Msc细胞,并应用流式细胞术分选GFP阳性细胞,Westernblot和RT-PCR验证其对细胞内β-catenin基因表达的抑制效果,筛选干扰效率最高质粒;CCK-8法检测细胞增殖,Annexin-V／7-AAD法检测干扰后细胞凋亡情况,细胞划痕实验及Transwell实验检测MSC迁移能力。结果表明：构建的特异性慢病毒siRNA干扰组（PLB-β-catenin／shRNA2）能有效抑制β-catenin的mRNA和蛋白表达,并抑制细胞的增殖;而空载体对照组（PLBgroup）和正常对照组（controlgroup）细胞增殖无明显变化,两组之间无显著的统计学差异（P〉0．05）;流式细胞术检测结果显示,采用血清饥饿法处理后,干扰组细胞的凋亡率明显增加,但两对照组之间无统计学差异（P〉0．05）;细胞划痕和Tran-swell实验显示,干扰组MSC的迁移能力明显降低,对照组细胞迁移能力无明显变化。结论：构建的特异RNAi慢病毒能够有效抑制β-catenin基因的表达,减少细胞内目的基因mRNA和蛋白的水平,从而对MSC细胞的增殖、凋亡和迁移能力产生重要影响。     

miRNA和Th17相关细胞因子在多发性骨髓瘤患者中的表达及其意义北大核心CSCD

目的 探讨miRNA和Th17相关细胞因子在多发性骨髓瘤（MM）患者发病中的作用机制.方法 收集27例MM患者骨髓标本,以8名健康人为正常对照,应用荧光实时定量PCR（qRT-PCR）法检测其miR-15a/16、-34a、-194-2-192簇、-181a/b的表达情况,采用ELISA法检测患者血清Th17相关细胞因子IL-17、IL-21、IL-22、IL-23、IL-27的表达水平.分析miRNA与Th17相关细胞因子表达的相关性.结果 与对照组比较,MM患者组miR-15a/16、-34a、-194-2-192簇表达水平降低,而miR-181a/b表达水平升高,差异均有统计学意义（P值均＜0.05）;MM患者血清IL-17、IL-21、IL-27的表达水平升高,IL-22表达水平降低,差异均有统计学意义（P值均＜0.05）;IL-23表达水平与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）.ISS分期Ⅲ期患者的miR-181a/b和IL-17、IL-21、IL-23、IL-27表达水平高于Ⅰ期患者,而miR-15a/16、-34a、-194和IL-22的表达水平则低于后者,差异均有统计学意义（P值均＜0.05）.miR-34a与IL-21,miR-181a与IL-23,miR-192与IL-21、IL-27,miR-194与IL-27的表达水平均呈正相关,而miR-192与IL-21呈负相关（P值均＜0.05）.结论 miRNA和Th17相关细胞因子在MM患者中均存在异常表达,其表达水平与MM患者的ISS分期有关,同时两者之间也存在密切的联系,提示失调的miRNA可能影响Th17细胞的分化进而参与MM的发生、发展.