CKD3～5期慢病管理患者肾功能进展速率及影响因素的研究

目的:分析不同分期CKD患者肾功能进展速率及相关影响因素。方法:采用t检验分析SCr、BUN、e GFR、ALB、Hb、UA对疾病病程的影响;采用方差分析检验CKD不同分期对疾病进展速率的影响; 2年e GFR下降率评价CKD不同病因进展速率。结果:SCr、BUN、e GFR、Hb与病程进展有关; Hb与CKD3、4期病程进展有关; ALB、UA与病程进展关系不显。多组分析显示SCr、BUN、e GFR、Hb与疾病所处分期有关,ALB、UA无法定论。CKD4期、病因属糖尿病肾病恶化最剧烈。结论:慢性肾脏病的进展速率与所处分期密切相关,以CKD4期进展最为迅速,病因中糖尿病肾病为进展速率之最,慢性肾炎进展相对缓慢。影响因素中病因、生活方式、高血压、蛋白尿、糖尿病、贫血、低密度脂蛋白可影响CKD进展速率,尿酸、高脂血症是否是肾功能迅速恶化的高危因素临床尚无统一定论。     

乙莫克舍增强顺铂对肺癌细胞系A549的抑制作用

目的探讨化学药物顺铂与肉毒碱棕榈酰基转移酶1(CPT1)小分子抑制剂乙莫克舍(etomoxir)对肿瘤细胞增殖及迁移的影响。方法分别用顺铂(7.5μmol/L)、etomoxir(75μmol/L)及顺铂联用etomoxir处理人非小细胞肺癌细胞系A549 72 h,CCK8检测A549的增殖作用;Transwell细胞迁移实验检测A549的迁移能力;annexin V/PI检测A549细胞凋亡;用etomoxir和顺铂联合治疗,裸鼠皮下成瘤模型检测该种联合治疗方法对肿瘤生长的影响。结果顺铂联用etomoxir后,肿瘤细胞生长及迁移能力受到明显抑制(P0.05),并且肿瘤细胞的凋亡有明显增加(P0.05);另外顺铂联用etomoxir治疗后,小鼠肿瘤的生长受到明显抑制(P0.05)。结论顺铂联用etomoxir可以降低肿瘤细胞增殖能力,增强肿瘤细胞凋亡,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,进而抑制肿瘤在裸鼠体内的生长。     

小鼠乳腺癌干细胞免疫相关分子表达和免疫浸润的分析

目的 分析小鼠乳腺癌干细胞（BCSCs）中免疫相关分子的表达和肿瘤组织中免疫细胞的浸润。方法 用成球培养的方法在体外富集小鼠乳腺癌细胞系4T1和4T07的肿瘤干细胞（CSCs）;用实时定量PCR检测BCSCs中免疫检查点与抗原递呈相关基因的表达;用小鼠乳腺癌原位移植瘤模型和流式细胞测量术分别检测脾脏和肿瘤组织中各类免疫细胞的比例。结果 用成球培养的方法可以成功富集小鼠乳腺癌干细胞4T1和4T07;与贴壁培养的肿瘤细胞相比,小鼠BCSCs中免疫检查点和抗原递呈相关基因的表达有明显差异（P<0.05）。体内的结果表明,与贴壁肿瘤细胞来源的肿瘤组织相比,肿瘤干细胞来源的肿瘤组织中浸润更多的CD4⁺ T和CD8⁺ T细胞（P<0.05）,但是CD11b⁺ F4/80⁺的巨噬细胞浸润更少（P<0.05）。结论 小鼠BCSCs中免疫检查点与抗原递呈相关基因的表达有改变,且在体内可招募更多的T细胞到肿瘤组织中去。     

基于脑血管重建的血管内皮生长因子缓释微球制备及性质研究

目的制作用于脑血管重建研究的血管内皮生长因子(VEGF)缓释微球并研究其性质。方法采用W1/O/W2复乳溶剂挥发法制作VEGF-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)微球和载罗丹明B微球;使用扫描电镜观察其表面形态结构;采用微量蛋白测定法测定微球中药物的载药量和包封率,并对微球的体外释药性能进行研究;将用罗丹明B标记的微球注入大鼠颞肌组织,分别于第10天和第30天取颞肌组织行冰冻切片,倒置荧光显微镜下观察。结果扫描电镜观察到微球表面光滑无孔隙,粒径为4~10μm;微球载药量及包封率的测定显示其平均载药量为(25.50±1.57)%,平均包封率为(85.07±0.15)%,累积释放率可达80%以上;微球在颞肌组织中可持续存在30 d以上。结论 VEGF-PLGA微球能稳定长时间释放VEGF,可用于脑血管重建研究。     

BRD4拮抗剂GSK525762A抗普通型急性B淋巴细胞白血病的体外研究

目的 探讨4型含Bromo结构域蛋白(BRD4)拮抗剂对普通型急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者原代白血病细胞的作用及可能机制.方法 采用流式细胞术分选14例普通型B-ALL患者(Ph+ B-ALL4例,Ph-B-ALL 10例)白血病细胞,在模拟骨髓微环境条件下进行短期培养;给予BRD4拮抗剂GSK525762A处理后,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,用Annexin V/7-AAD法检测细胞凋亡率,荧光定量PCR法检测c-MYC、CDK6、Bcl-2 mRNA表达水平,Western blot法检测c-MYC、CDK6、Bcl-2蛋白的表达.结果 GSK525762A对14例普通型B-ALL患者原代白血病细胞均有抑制增殖作用,且呈剂量依赖性,其中位IC50值为256.25 (90.64～1 378.39) nmol/L.500、1 000、2 500 nmol/LGSK525762A作用后中位细胞凋亡率分别为45.17％ (9.38％～70.91％)、66.02％ (24.36％～96.34％)、89.29％(39.29％～99.37％).GSK525762A对ph+与Ph-B-ALL细胞具有类似的作用,但对Ph+B-ALL细胞抑制增殖和诱导凋亡作用均弱于Ph-B-ALL细胞.1 000 nmol/L GSK525762A处理白血病细胞24、48 h后,c-MYC、CDK6和Bcl-2 mRNA表达水平下降,其中对ph+和Ph-B-ALL细胞c-MYC、CDK6mRNA的下调作用差异无统计学意义,而对Ph+ B-ALL细胞Bcl-2 mRNA表达水平的下调弱于对Ph-B-ALL细胞;GSK525762A处理后白血病细胞c-MYC、CDK6、Bcl-2蛋白表达水平均下调.结论 GSK525762A可抑制普通型B-ALL原代细胞的增殖,并促进其凋亡,且对Ph+ ALL细胞在体外具有一定作用.该作用可能通过下调c-MYC、CDK6和Bcl-2而实现.     

去甲斑蝥素对人胰腺癌PANC-1 细胞凋亡作用的研究

目的 探讨去甲斑蝥素对人胰腺癌PANC-1细胞凋亡的作用及其机制。方法 将PANC-1 细胞株随机分为处理组 和对照组,处理组加入不同浓度的去甲斑蝥素培养24h后,CCK-8 法检测细胞增殖情况;流式细胞术分析细胞的凋亡情况;免疫印迹法检测细胞内质网应激和凋亡相关蛋白的表达;荧光定量PCR 技术检测细胞内质网应激和凋亡相关蛋白mRNA表达。结果 不同浓度去甲斑蝥素处理PANC-1细胞24h后,与对照组相比,能降低细胞的存活率并诱导其凋亡。与对照组相比,处理组中内质网应激和凋亡相关蛋白的表达水平均上调（均P＜0.05）,同时其mRNA 的表达水平亦均上调（均P＜0.05）。结论 去甲斑蝥素能明显抑制人胰腺癌PANC-1 细胞的生长并诱导其凋亡,并且具有浓度依赖性,这一作用可能是通过内质网应激介导的凋亡途径实现的。     

加速折旧法回收医疗设备成本的研究--以浙江大学医学院附属第二医院血透机为例

目的：鼓励临床科室延长设备使用年限的同时，加速医院回收设备成本，为临床科室增加收入，为医院节省成本。同时，减轻临床科室购买新设备的压力和提高购置新设备积极性，使医院硬件提升的脚步跟上医疗界科技发展的步伐。方法：以血透机为例，采用加速折旧法进行折旧计算。结果：血透室的收益比使用平均法扣除成本时的收益要高。结论：该方法适合在收入稳定的大型医院内进行大型医疗设备成本计算和成本扣除，确实能鼓励临床科室尽可能延长设备使用年限，减轻临床科室购买新设备压力。     

血清总胆固醇水平与MELD评分评估失代偿期乙肝肝硬化患者预后

目的 探讨血清总胆固醇(TC)水平与终末期肝病模型(MELD)评分对乙肝肝硬化失代偿期患者的短中期预后的预测价值.方法入选77例乙肝肝硬化失代偿期患者,分别根据随访3个月、6个月的存活情况分组,对死亡组与存活组中血清总胆固醇值、MELD评分及CTP分值进行比较;应用ROC曲线评价血清总胆固醇浓度、MELD评分及CTP评...     

OCT4A基因对K562细胞生物学活性的影响

目的:探讨OCT4A基因体外对K562细胞生物学行为的影响及与凋亡相关的分子机制。方法:克隆人OCT4A基因,构建靶向上调及下调OCT4A基因与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组慢病毒表达载体p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA,三质粒包装系统包装病毒,并测定滴度。实验分为空白对照、p LVX空质粒、p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA和非特异sh RNA共5组。Western-blot检测各组OCT4A蛋白表达。CCK-8法绘制各组细胞增殖曲线。采用Annexin V/7-AAD标记流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞分化抗原CD11b和CD15表达;实时定量PCR检测caspase3、BIM、BCL-x L和BAX m RNA表达变化。结果:成功克隆人OCT4A基因,并成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA。Western blot证实2种病毒感染后可分别有效上调及下调OCT4A蛋白的表达。CCK-8法检测显示,p LVX-OCT4A-Zs Green1组K562细胞体外增殖活性明显升高,而p LVX-OCT4A sh RNA组K562细胞增殖活性显著降低(P0.05)。感染后p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA 2组K562细胞凋亡率分别为(3.48±0.52)%和(7.25±0.57)%(P0.05),而OCT4A过表达及抑制后细胞表面分化抗原CD15、CD11b的表达无明显变化。OCT4A上调后Caspase-3、BIM、BAX较对照组均下调,但差异无统计学意义(P0.05),而BCL-x L基因表达则明显升高(P0.01)。结论:成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1及PLB-OCT4A sh RNA,它们可分别有效地上调及下调OCT4A蛋白表达。OCT4A基因可促进K562细胞的增殖、抑制凋亡,其抑制凋亡机制可能与BCL-x L基因上调有关。