四种DNA提取法在遗传性眼病DNA库中的比较

目的通过对低渗溶血法、盐酸胍法、氯化钠法、NP-40法提取人类基因组DNA的比较，以得到一种最稳定、可靠、实用的DNA提取方法，应用于遗传性眼病DNA库的建立。方法用四种方法提取眼遗传性疾病患者的血液基因组DNA，紫外分光光度测定，用琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增鉴定提取的基因组DNA。结果低渗溶血法提取基因组DNA量最多，纯度最高，PCR扩增效果最好，有利于遗传性眼病DNA库的建立。结论低渗溶血法是一种实用、可靠、稳定的提取方法，在眼遗传性疾病家系DNA库建立上值得推广应用。     

先天性鼻泪管阻塞的综合治疗

目的　先天性鼻泪管阻塞是婴幼儿常见的眼病 ,其处理历来存在争议。本文的研究目的是探讨应用滴抗菌素眼液加泪囊挤压按摩、泪道加压冲洗及鼻泪管探通术的综合治疗方法对先天性鼻泪管阻塞患儿的临床应用价值及其治疗效果。方法我们回顾性分析了 4 83例 54 7眼 ,从 1997年 1月～ 2 0 0 0年 12月在中山眼科中心小儿眼科门诊治疗的先天性鼻泪管阻塞的病例资料 ,首诊平均年龄为 11.8个月。根据患者的年龄和症状 ,分别采用滴抗菌素眼液加泪囊挤压按摩 ,泪道加压冲洗及鼻泪管探通的综合治疗方法进行处理 ,并观察随访 3个月以上 ,症状消失作为治愈的指标。结果　综合治疗方法对先天性鼻泪管阻塞总的治愈率为 97.3 % .其中 6.1%病例用滴抗菌素眼液加泪囊挤压按摩法治愈 ;8.2 %病例用泪道加压冲洗法治愈 ;83 %的病例用鼻泪管探通术治愈。共有 15例患儿在治疗中发生并发症。结论　综合治疗方法对先天性鼻泪管阻塞患儿是安全有效的处理方法。     

Leber视神经萎缩分子生物学检测

目的 探讨线粒体DNA1778突变与Leber视神经萎缩(Leber shereditary optic neuropathy,LHON)之间的关系. 方法采用突变特异性引物PCR(mutation specific primer PCR)及PCR RFLP(MaeⅢ)检测临床可疑LHON患者及有关亲属，两种方法结果均阳性者则收集其临床资料。 结果 10例11778突变阳性者中1例为携带者，9例为LHON病人,患者中男性6例，女性3例，起病年龄12-25岁，双眼起病间隔0-6个月，随访0-12年,视力为指数/眼前-0.1(除一例生育小孩后发病的患者有视力恢复),接受过视野、视诱发电位和色觉检查的患者结果均异常，而视网膜电图检查结果及全身情况多正常。 结论 10例受试者的两种分子生物学检测结果都显示线粒体DNA11778突变。携带者状态和视力恢复现象的存在表明线粒体DNA突变虽是LHON的主要病因，但其他因素如内分泌失调也可影响其发病。(中华眼底病杂志,1998,14:156-158)     

突变特异性引物PCR检测线粒体DNA11778突变

突变特异性引物ＰＣＲ检测线粒体ＤＮＡ１１７７８突变郭莉陈又昭贾小云张清炯郭向明【关键词】聚合酶链反应点突变ＤＮＡ突变分析中国图书资料分类法分类号Ｒ４４６．１Ｒ３４２．３Ｌｅｂｅｒ遗传性视神经萎缩（Ｌｅｂｅｒ′ｓｈｅｒｅｄｉｔａｒｙｏｐｔｉｃｎｅｕｒｏ...     

小儿视锥细胞与视锥杆细胞营养不良的临床 特点与候选基因突变分析

目的分析小儿视锥细胞和视锥杆细胞营养不良的临床特点及其候选基因变异情况。方法连续收集分析18例年龄4个月至8岁的视锥细胞和视锥杆细胞营养不良先证者的临床资料。应用聚合酶链反应异源双链单链构像多态法分析锥杆同源异形盒基因（cone-rod homeobox gene,CRX）全部3个外显子、GUCY2D基因（retinal-specific guanylate cyclase gene）外显子2和8,寻找可能的变异。结果18例患儿因家人发现其有明显视觉障碍来诊。 其中13例有眼球震颤,8例有畏光,7例有轻微、不典型眼底改变。11例眼底正常。4例可测 定视力者视力均低于0.3,14例小于3岁者无法测定视力。视锥细胞营养不良与视锥杆细胞营养不良的临床症状和眼部表现相互重叠。均未发现CRX基因和GUCY2D基因突变。结论小儿视锥细胞和视锥杆细胞营养不良视觉障碍明显,眼球震颤较多见。多数眼底正常,少数有眼底改变但不典型。本组病例可能与CRX基因和GUCY2D基因外显子2、8突变无关。(中华眼底病杂志,2001,17:293-295)     

90例高度近视先证者中核心蛋白聚糖基因突变筛查

目的：研究定位于12q23的核心蛋白聚糖（decorin)基因与高度近视的关系。方法：惧高度近视先证者90例,制备外周血白细胞基因组DNA,应用PCR法分别扩增核心蛋白聚糖基因8个外显子及其邻近含子,然后用异源双链－SSCR法分析PCR产物,寻找可能的变异。结果：分析90例高度近视先证者核心蛋白聚糖基因全部8个外显子及其邻近内含自子,未发现任何变异。结论：核心蛋白聚糖基因突变可能与本组高度近视无关。decorin基因与人类疾病的关系有待进一步研究。     

烯醇化酶同工酶电泳测定及其在视网膜母细胞瘤诊断中的意义

烯醇化酶是一种糖酵解酶,为二聚体蛋白质,由来自不同基因位点的3个亚基α、β、γ组成,现已发现有5种同工酶:αα、αβ、ββ、αγ、γγ.α亚基广泛分布于各种组织,β亚基分布于心肌和骨骼肌中,而γ亚基为神经组织所特有,存在于神经元和神经内分泌细胞中.     

常染色体显性视网膜色素变性NRL基因的突变研究

目的 对中国人常染色体显性视网膜色素变性（RP）NRL基因的突变现状进行研究。方法 抽取120例RP先证者的静脉血提取DNA。行NRL基因的引物设计合成，PCR扩增，琼脂糖电泳鉴定，异源双连-SSCP电泳。结果 120例散发型RP患者未发现NRL基因突变。结论 中国人RP NRL基因的突变频率很低。     

p53和MDM2在3种RP小鼠视网膜中的表达

目的 了解凋亡相关基因p53和MDM2与视网膜色素变性（retinitis pigmentosa,RP)发病的关系。方法 以RP模式动物rds小鼠，rd小鼠，C3H小鼠及正常对照C3B小鼠为材料，提取不同发病时间（出生后7，12，17，23，29，37和50d)视网膜的总RNA，以β-actin和L19核糖体蛋白基因为内对照，RT－PCR分析小鼠发病过程中视网膜p53和MDM2的表达。结果 在C3B小鼠视网膜中，p53和MDM2的表达完全同步。出生后7d，高表达；7－12d期间，表达量迅速下降；12－50d期间，表达水平低，但基本稳定；p53和MDM2在rds小鼠的表达水平低，但基本上是同步，稳定表达。在rd小鼠中，p53的表达变化不大，但MDM2的表达则与p53不同步，类似于C3B小鼠MDM2的表达。在C3H小鼠的视网膜，p53和MDM2的表达也不同步。7－23d期间，p53的表达基本稳定；自23d后逐步下降，其中23－29d期间，p53的表达下降最快。而MDM2的表达总体变化不大。结论：在这3种RP模式动物中，虽然凋亡相关基因和MDM2存在着表达差异，但其发病过程中视网膜细胞的变性死亡可能是通过p53非依赖型途径进行的。