小檗碱通过调节凋亡相关基因的表达抑制金黄色葡萄球菌诱导的ECV-304细胞凋亡

目的:研究小檗碱在金黄色葡萄球菌(S.aureus)诱导ECV-304细胞内凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的调节作用,探讨其抑制金黄色葡萄球菌诱导ECV-304细胞凋亡的机制。方法:小檗碱(Berberine,BBR)预处理ECV-304细胞2h后,用1∶100感染复数的S.aureus感染细胞,采用半定量RT-PCR及Western-blot法检测金黄色葡萄球菌感染后ECV-304细胞内Bcl-2、Bax和Caspase-3的mRNA及蛋白表达水平。结果:小檗碱预处理ECV-304后再感染S.aureus可显著性增加凋亡相关细胞因子Bcl-2 mRNA水平及蛋白表达量,而Bax和Caspase-3表达下调。结论:小檗碱可以通过调节凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达抑制S.aureus诱导的ECV-304细胞凋亡,本实验结果为临床治疗S.aureus感染提供理论依据。     

鼠疫耶尔森氏菌荧光标记扩增片段长度多态性分型方法

目的 建立荧光标记扩增片段长度多态性(FAFLP)技术平台，探讨鼠疫菌基因分型。方法 用5种核酸限制性内切酶消化鼠疫菌基因组DNA，选择最佳内切酶组合，酶切片段经接头连接后，用荧光素标记的5条EcoRⅠ引物和9条MseⅠ引物组成的引物配对扩增，选择最佳引物组合，进行系列PCR条件的优化。扩增产物经ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer(遗传分析仪)检测，GeneScan等软件进行分析。结果 成功建立FAFLP技术平台。结论 FAFLP具有快速、简便、廉价、分辨率高、重复性好和污染少的优点，可用于鼠疫菌的基因分型分析。     

DNA甲基转移酶2在乳腺癌患者中的表达及意义

目的检测DNA甲基转移酶2(DNMT 2)基因在乳腺癌患者外周血中的表达情况,并分析其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测60例乳腺癌患者(实验组)及50例体检健康女性(对照组)外周血中DNMT 2的表达情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测两组间DNMT 2蛋白表达,并分析DNMT 2与各临床特征之间的关系。结果实验组DNMT 2 mRNA在外周血中的表达(5.785±3.956)与对照组(4.739±2.359)比较,差异无统计学意义(t=1.642,P=0.103),DNMT 2蛋白表达在两组间差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论DNMT 2基因和蛋白在乳腺癌患者外周血中表达不明显。     

凋亡相关基因在金黄色葡萄球菌感染人脐静脉内皮细胞的表达

目的研究凋亡相关基因Bcl-2、Bax和caspase-3在金黄色葡萄球菌(S.aureus)感染人脐静脉内皮细胞株ECV-304内的表达,探讨其对人脐静脉内皮细胞的凋亡作用。方法采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹(Western-blot)法检测S.aureus感染后人脐静脉内皮细胞Bcl-2、Bax和caspase-3的mRNA及蛋白表达水平。结果 S.aureus感染人脐静脉内皮细胞后,其细胞内与抗凋亡相关的细胞因子Bcl-2mRNA水平及蛋白表达量下降,感染12小时差异有统计学意义(P0.01),而促凋亡的细胞因子Bax和caspase-3表达上升,感染6小时差异有统计学意义(P0.01)。结论凋亡相关细胞因子Bcl-2、Bax和caspase-3可能在S.aureus感染所致的脐静脉内皮细胞凋亡中起重要的作用。     

流感病毒受体结合表位真核载体的构建及表达

目的构建甲型流感病毒血凝素(HA)信号肽(SP)与HA唾液酸受体结合部位(RB)所含T、B表位的基因片段(RBT、RBB)真核表达质粒,研究其在真核细胞中的表达与免疫特性。方法通过重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将HA的SP分别与RB、RBT、RBB通过一段多肽接头Gly4Ser融合为SP-RB、SP-RBT和SP-RBT,将其分别插入pcD-NA3.1(+)载体,构建质粒,鉴定正确后转染MDCK细胞,RT-PCR、免疫荧光、MTT检测该质粒的表达和分泌。结果融合基因真核表达质粒构建成功,在MDCK细胞中成功表达,转染细胞培养上清能刺激淋巴细胞增殖。结论SP-RB、SP-RBT、SP-RBB真核表达载体成功构建,表达产物能刺激淋巴细胞增值,为流感病毒唾液酸受体结合部位的T、B细胞表位免苗研究提供初步依据,也为流感核酸疫苗的研制奠定了基础。     

新鲜冰冻血浆使用合理性及有效性回顾性分析

目的通过对本院2016年4月～2017年3月新鲜冰冻血浆使用情况进行回顾性分析,了解血浆使用合理性及有效性,指导临床合理用血。方法通过医院信息系统收集2016年4月～2017年3月新鲜冰冻血浆使用情况及相关信息,根据评价标准判断血浆使用的合理性及有效性,并对全院新鲜冰冻血浆使用情况进行调查分析。结果新鲜冰冻血浆输注合理率49.2%,输注有效率33.9%。手术科室与非手术科室输注合理率和有效率的差异无统计学意义,合理与不合理输注有效率的差异有统计学意义。新鲜冰冻血浆不合理使用主要是搭配输血、INR正常1.5倍患者出血以及无出血患者的预防性输注。结论新鲜冰冻血浆不合理输注现象较严重,不合理输注有效率低,医院输血管理委员会应发挥作用,加强全院用血情况的监测与分析,对临床用血进行培训与督导,提高血浆输注的合理性及有效性。     

肠杆菌基因间重复序列PCR指纹图谱技术分析结核分枝杆菌流行情况

目的利用肠杆菌基因间重复序列为引物的聚合酶链反应（enterbacterial repetitive intergenic consensus-PCR，ERIC-PCR）分型技术分析我市结核分枝杆菌流行情况。方法收集2003年9月至2006年5月门诊痰菌阳性标本，培养并提取DNA做ERIC—PCR指纹图，并利用RAPDPHYLIP及Treeview软件对其进行聚类分析。结果122株临床分离株产生42种不同的指纹图，聚类分析结果显示可分为3簇，成簇率76、2％。指纹图谱与患者年龄、菌株的耐药性及耐药种类有关。结论ERIC—PCR具有不需已知核酸序列，分辨效果好，简便快捷等优点，是进行分子流行病学调查的有效工具。我市结核病呈高水平传播，主要为耐药菌株并以中青年患者传播为主。     

肾癌80例影像表现及影像学检查程序分析

我院2000—01～2005—12行相关影像检查并经手术病理证实的肾癌80例，对其影像表现及影像学检查程序分析如下。 1临床资料 1．1一般资料 本组男58例，女22例，年龄14～81（平均47．6）岁。临床以无痛性肉眼血尿、腹部肿块、腰痛或低热就诊。 1.2方法X线机为Philips AxiomR200数字X线机，按照常规程序进行IVP检查。超声检查采用GE Vivid 7型彩色多普勒超声诊断仪，探头频率2．5～4．0Hz。CT机为GE Highspeed 16层螺旋CT，轴位扫描，层厚5mm。MR成像采用GE Signa Contour 0．5T超导磁共振扫描仪，腹部相控阵线圈，     

医学微生物学实验教学改革尝试

为适应当今突飞猛进的医学发展,培养高质量的医学人才,医学教育改革势在必行,通过对实验教学的认识、内容、方法和考核4个方面探讨医学微生物学实验教学改革策略,从而提高实验教学质量和学生的整体素质.     

鼠疫耶尔森菌pgm位点及其侧翼序列遗传变异的比较分析

目的研究鼠疫耶尔森菌中国自然分离株pgm位点及其侧翼序列的变异，了解不同疫源地菌株间的毒力差异，为鼠疫防治提供帮助。方法比较分析现有4株菌的pgm位点及其侧翼序列的变异，采用PCR、等位基因特异性PCR扩增260株中国自然分离株和7株假结核耶尔森菌。结果除锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株外，其他菌株均缺失了YPl666的70～87bp之间的18bp碱基。1406bp处T的缺失仅存在于东方型菌株中。北天山东段型及西段A、B型，锡林郭勒高原型，青海田鼠型菌株的pgm位点下游都没有IS100插入；锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株的色素沉着区有1个IS285插入，在其下游3kb区域还有1个IS100插入。冈底斯山型和昆仑山A、B型菌株的pgm位点上游侧翼区与其他菌株不同。36株菌的pgm位点缺失，缺失的菌株主要集中在鄂尔多斯高原型，松辽平原B型，昆仑山A、B型4种生态型菌株中。结论北天山东段型及西段A、B型，锡林郭勒高原型，青海田鼠型菌株是中国鼠疫耶尔森菌中比较古老的菌株。锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株是一个独特的分支，建议归为第4个生物型——田鼠型。北天山东段型及西段A、B型，锡林郭勒高原型，青海田鼠型菌株的pgm位点，由于在其下游没有IS100插入，所以稳定、不易缺失。pgm位点及其侧翼序列的变异与菌株的生物型、自然疫源地和生态型都具有一定的相关性。