鼠疫耶尔森氏菌荧光标记扩增片段长度多态性分型方法

目的 建立荧光标记扩增片段长度多态性(FAFLP)技术平台，探讨鼠疫菌基因分型。方法 用5种核酸限制性内切酶消化鼠疫菌基因组DNA，选择最佳内切酶组合，酶切片段经接头连接后，用荧光素标记的5条EcoRⅠ引物和9条MseⅠ引物组成的引物配对扩增，选择最佳引物组合，进行系列PCR条件的优化。扩增产物经ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer(遗传分析仪)检测，GeneScan等软件进行分析。结果 成功建立FAFLP技术平台。结论 FAFLP具有快速、简便、廉价、分辨率高、重复性好和污染少的优点，可用于鼠疫菌的基因分型分析。     

阿立哌唑治疗老年期精神分裂症的研究

目的:探讨阿立哌唑与利培酮对老年期精神分裂症的疗效和安全性。方法:将86例老年期精神分裂症患者随机分为2组,分别选用阿立哌唑或利培酮治疗,疗程12周,疗效评定采用阳性与阴性症状量表(PANSS)及不良反应量表(TESS)评定疗效和不良反应。结果:治疗12周后2组PANSS评分较治疗前均显著下降。阿立哌唑组有效率69.76%,显效率88.37%;利培酮组有效率72.09%,显效率90.70%,2组间差异无显著性(P>0.05)。结论:阿立哌唑与利培酮治疗老年期精神分裂症均有肯定疗效,不良反应均比较轻,安全性好。     

基于UG NX及MasterCAM透明泌尿系统模型设计和制作

目的针对目前模拟人体的泌尿系统模型结构单一、用途局限、不适于体外模拟实验等不足,本文将计算机辅助设计及制作（CAD／CAM）等技术应用于医学模拟模型的开发,设计制作了带双层管壁结构的多用途透明泌尿系统模型。方法利用现有的人体泌尿系统解剖参数,基于UGNX软件完成模型的设计,然后利用MasterCAM软件对模型进行数控编程,通过数字控制车床对模型各部件进行加工,最后组装各部件完成制作。结果完成带双层管壁结构的透明泌尿系统模型的制作,该模型具有功能多、成本低廉、模拟程度高等优点。结论该模型的制作是医工结合的一个新的尝试。     

防污染PCR-微孔板杂交检测布鲁氏菌方法研究

目的 建立防污染PCR—微孔板杂交—EIA检测技术，并用于布鲁氏菌及其模拟感染组织中细菌的检测。方法 根据布鲁氏菌31kD热休克蛋白和外膜蛋白2B(OMP2B)基因设计引物，筛选合适引物，并建立用服嘧啶糖基化酶防污染的PCR扩增—微孔板杂交与酶联显色检测布鲁氏菌的方法，并用于模拟污染布鲁氏菌动物脏器标本的检测。结果 根据布鲁氏菌31kD热休克蛋白和外膜蛋白2B基因设计的引物，建立了复合PCR，同时检测2个基因的存在，并发现不同引物序列对PCR扩增敏感性影响较大，可以相差1000倍。用0．5U的UDG可以防止10^8产物的污染，微孔板杂交—酶联显色检测比单纯PCR—电泳敏感10倍。将该体系用于污染动物脏器的检测，可以检测出反应体系中2—200个细菌的存在。结论 研究的防污染PCR—微孔板杂交—EIA试剂克服了目前PCR试剂运输不便、产物污染所致假阳性和判定结果欠客观的缺点，为布鲁氏菌的快速检测提供了一个有力手段。     

腹腔镜胆囊切除不同胃肠减压方法的临床分析

目的 探讨腹腔镜胆囊切除胃肠减压的最佳方法。方法 将216例2002年1月～2003年1月期间腹腔镜胆囊切除的病人，采用随机对照法分成3组：不插胃管组、常规插胃管组、全麻插管后插胃管组。对病人的舒适度、手术野显露情况、术后呕吐情况进行分析。结果 3组病人的舒适度分别为95．12％、2．70％、53．33％：手术暴露分别为4．88％、4.05％、3．33％；术后呕吐分别为13．41％、13．51％、13.33％。结论 腹腔镜胆囊切除不插胃管既减轻了病人痛苦，又减轻了病人对插胃管的心理压力，提高了舒适度，病人容易接受。     

blaCTX-M-55介导的宋内志贺菌耐药机制研究

目的：研究 blaCTX-M-55介导的宋内志贺菌＃1083的耐药机制。方法双纸片协同扩散法验证＃1083是否为产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）菌株;PCR 方法鉴定其耐药基因;接合转移实验验证携带 ESBL 基因的质粒是否具有可转移性;VITEK 2仪器检测菌株对多种抗生素的 MIC 值;基因组测序鉴定介导耐药基因转移的移动元件;引物延伸实验鉴定耐药基因转录起始位点。结果＃1083为 blaCTX-M-55介导产 ESBL 的菌株,携带 blaCTX-M-55的耐药质粒可通过接合转移的方式进入受体菌 EC600,并使受体菌具有相应的耐药谱;介导 blaCTX-M-55转移的转座单元为 ISEcp1-blaCTX-M-55-Δorf477,且其上游的插入序列 ISEcp1为耐药基因提供强启动子区,促进耐药基因表达,且此表达为恒定表达,不受抗生素的诱导作用影响。结论质粒携带的 blaCTX-M-55为＃1083的主要耐药基因,插入序列 ISEcp1介导此基因的表达与传播。     

16S rDNA基因芯片检测临床常见感染性细菌

目的 提高细菌和临床微生物检测的速度和准确性，建立含有20种细菌探针在内的感染性细菌检测用基因芯片模型。方法 使用16S rDNA克隆探针和合成的寡核苷酸探针两种，利用点样仪制成基因芯片。细菌DNA经过16S rDNA通用引物扩增后与芯片上的探针杂交，然后用荧光扫描仪检测信号。结果 基因芯片能够用于细菌检测，克服探针具有广泛和灵敏的特点，但是交叉反应明显；寡核苷酸探针具有较高的特异性，但是灵敏度稍差。结论 cDNA探针和寡核苷酸探针结合或设计几个不同的探针来指向同一株细菌很可能是将来基因芯片的检测方向。     

环境水军团菌分离培养及其表型与分子分型研究

目的探讨环境水系军团菌分离培养及其表型和分子分型鉴定方法。方法采用军团菌常规分离培养、生化试验、血清学分型和菌体脂肪酸成分分析、PCR试验、AFLP基因分型和SBT核酸测序分型鉴定等技术方法,对广东地区195份环境水系分离的226株军团菌进行表型和基因型分型鉴定。结果在广东地区195份环境水样中共检出军团菌226株,主要是嗜肺军团菌170株(75.22%),长滩军团菌21株(9.29%)、菲氏军团菌21株(9.29%)、橡树岭军团菌和茴芹军团菌各2株(0.89%),其他非嗜肺军团菌10株(4.42%)。125株军团菌细胞脂肪酸成分测定分嗜肺军团菌、橡树岭军团菌、长滩军团菌、菲氏军团菌等6种类型;54株嗜肺军团菌1型AFLP分型,分为25个基因型。7株不能用生化试验、细胞脂肪酸成分分析和AFLP分型做出鉴定的军团菌,用SBT核酸测序鉴定为菲氏军团菌2株、长滩军团菌3株和茴芹军团菌2株。结论广州地区环境水系军团菌分布以嗜肺军团菌为主,同时有橡树岭军团菌、菲氏军团菌、长滩军团菌和茴芹军团菌等多种军团菌种;SBT核酸测序鉴定有助于发现军团菌新种。     

大鼠肠系膜淋巴结和外周淋巴结固有exosome的制备及其对T细胞增殖的影响

目的 从大鼠肠系膜淋巴结、外周淋巴结中分离纯化exosome,鉴定其对T细胞增殖的影响.方法 取出BN(RTln)大鼠的外周淋巴结及肠系膜淋巴结并研磨、离心以获得非细胞组织上清,采用超滤密度梯度离心法提取exosome.透射电镜对收集的exosome进行形态学鉴定,BCA法进行蛋白定量,SDS-PAGE电泳分离蛋白,Western blot检测IL-10的表达,并通过昆合淋巴细胞培养检测其对T细胞增殖的影响.结果 两种淋巴组织来源的非细胞组织上清均含有exosome,肠系膜淋巴结源性exosome蛋白浓度[(1.92±0.10) μg/μL]显著高于外周淋巴结源性exosome[(1.57±0.06) μg/μL,P＜0.05],SDS-PAGE显示两种组织源性exosome所含蛋白种类和数量有明显差异,Western blot显示肠系膜淋巴结固有exosome中IL-10的表达显著高于外周淋巴结固有exosome,混合淋巴细胞培养结果显示肠系膜淋巴结固有exosome和外周淋巴结固有exosome对T细胞的增殖均有促进作用(P＜0.05),外周淋巴结源性exosome的促增殖作用显著大于肠系膜淋巴结源性exosome(P＜0.05).结论 肠系膜淋巴结、外周淋巴结均含有组织固有exosome,两种组织来源exosome有蛋白浓度和蛋白种类的差异,且均能促进淋巴细胞增殖,促进程度有显著差异.     

鼠疫耶尔森菌pgm位点及其侧翼序列遗传变异的比较分析

目的研究鼠疫耶尔森菌中国自然分离株pgm位点及其侧翼序列的变异，了解不同疫源地菌株间的毒力差异，为鼠疫防治提供帮助。方法比较分析现有4株菌的pgm位点及其侧翼序列的变异，采用PCR、等位基因特异性PCR扩增260株中国自然分离株和7株假结核耶尔森菌。结果除锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株外，其他菌株均缺失了YPl666的70～87bp之间的18bp碱基。1406bp处T的缺失仅存在于东方型菌株中。北天山东段型及西段A、B型，锡林郭勒高原型，青海田鼠型菌株的pgm位点下游都没有IS100插入；锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株的色素沉着区有1个IS285插入，在其下游3kb区域还有1个IS100插入。冈底斯山型和昆仑山A、B型菌株的pgm位点上游侧翼区与其他菌株不同。36株菌的pgm位点缺失，缺失的菌株主要集中在鄂尔多斯高原型，松辽平原B型，昆仑山A、B型4种生态型菌株中。结论北天山东段型及西段A、B型，锡林郭勒高原型，青海田鼠型菌株是中国鼠疫耶尔森菌中比较古老的菌株。锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株是一个独特的分支，建议归为第4个生物型——田鼠型。北天山东段型及西段A、B型，锡林郭勒高原型，青海田鼠型菌株的pgm位点，由于在其下游没有IS100插入，所以稳定、不易缺失。pgm位点及其侧翼序列的变异与菌株的生物型、自然疫源地和生态型都具有一定的相关性。