氟尿嘧啶联合顺铂对骨肉瘤MG-63细胞的抑制作用及其对TRPV5和TRPV6蛋白表达的影响

目的:研究氟尿嘧啶联合顺铂对骨肉瘤细胞株MG-63的生长抑制作用,探讨其对瞬时性受体电位通道5(TRPV5)和瞬时性受体电位通道6(TRPV6)蛋白表达的影响。 方法:常规培养MG-63细胞,以5×10⁴mL^-1的细胞密度种植细胞,实验分为对照组、氟尿嘧啶组、顺铂组及氟尿嘧啶联合顺铂组4组。CCK-8法检测不同时间MG-63细胞的生长抑制情况;分别于24、48和72 h采用细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒检测MG-63细胞加入不同药物后的凋亡情况;免疫细胞化学染色法检测MG-63细胞在加药前后TRPV5和TRPV6蛋白的表达情况。结果:氟尿嘧啶和顺铂对MG-63细胞的抑制作用均显著,且随着药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞中黑色颗粒增多,胞体回缩,细胞老化或死亡。与两药单独或是联用作用于MG-63细胞24 h比较,随着时间的延长,48 h 和72 h两者对细胞的抑制作用明显增强(P<0.05)。与对照组比较,氟尿嘧啶组和顺铂组24、48和72h后凋亡率逐渐增加(P<0.01),随着药物作用时间的延长,细胞凋亡率亦呈升高的趋势。当加入氟尿嘧啶和顺铂72 h后,MG-63细胞表达TRPV5和TRPV6含量较加药前明显降低(P<0.05)。结论:氟尿嘧啶与顺铂联用可以提高MG-63细胞增殖抑制及凋亡作用,同时对MG-63细胞TRPV5和TRPV6表达水平具有明显的抑制作用。     

大鼠骨髓间充质干细胞表达心肌基因表型的时间依赖效应

背景:前期实验已经证实30%心肌培养上清是诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的最佳浓度.目的:在前期实验基础上,观察30%心肌培养上清条件下诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的时间依赖效应.设计、时间及地点:对比观察,于2007-08/2008-06在徐州市心血管病研究所完成.材料:健康成年SD大鼠,体质鼍180～220 g.方法:分离大鼠骨髓间充质干细胞和心肌细胞并在体外培养纯化.以1×108L-1的细胞密度种植心肌细胞,培养72 h后收集上清.将骨髓间充质干细胞的DMEM/F12培养基换为含有30%M199心肌细胞培养上清作为实验组,对照组仍将细胞接种在DMEM/F12培养基上继续培养.主要观察指标:30%心肌细胞培养上清诱导7,14,21d后,应用免疫细胞化学技术检测骨髓间充质干细胞中α-平滑肌肌动蛋白、β-肌动蛋白和心肌特异性肌钙蛋白T的表达.结果:30%心肌细胞培养上清诱导骨髓间充质干细胞后,细胞的形态没有改变,但与对照组相比,α-平滑肌肌动蛋白、β肌动蛋白和心肌特异性肌钙蛋白T的表达均呈阳性,其中以第14天的蛋白表达量最高(P＜0.01).结论:30%心肌细胞培养上清诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的最佳诱导时间是14 d.     

糖尿病与高血压糖尿病大鼠心脏β-AR变化的比较

目的比较糖尿病与高血压糖尿病大鼠心脏β肾上腺素受体（β—AR）及其介导的功能变化。方法采用链脲佐菌素（STZ）注射制胰岛素依赖性糖尿病大鼠模型和高血压糖尿病大鼠模型,放射配体结合实验和离体左心房收缩功能实验等方法观察心脏β—AR及功能的改变。结果与对照大鼠相比,糖尿病大鼠心脏β-AR的最大结合容量（Bmax）下降31％（P〈0．05）,KD值不变;高血压糖尿病大鼠心脏β-AR的Bmax增加27％（P〈0．05）。与对照大鼠相比,糖尿病大鼠左心房β-AR介导的最大收缩反应（Rmax）下降69％（P〈0．01）;高血压糖尿病大鼠左心房β—AR介导的Rmax下降40％（P〈0．05）,pD2值不变。结论糖尿病时,大鼠心脏β—AR数量减少,其介导的Rmax也是降低的;而高血压糖尿病时,虽然大鼠心脏β-AR数量代偿性增加,但其介导的Rmax是降低的,其可能与β-AR后信号转导效应减弱有关。     

心肌细胞培养上清诱导骨髓间充质干细胞的分化

背景：前期研究发现,心肌细胞培养上清具有诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的能力,这可能与培养上清内的某种细胞因子或几种细胞因子有关。目的：分析大鼠心肌细胞培养上清诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞是否与心肌细胞培养上清内细胞因子含量不同有关。方法：采用全骨髓贴壁培养法分离骨髓间充质干细胞并在体外培养纯化,酶消化法分离心肌细胞,分别以1×10^8L-1的细胞浓度培养72h后收集上清。用酶联免疫吸附试验技术检测心肌细胞和骨髓间充质干细胞培养上清内的肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子1、血小板源生长因子、干细胞因子、成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子的水平。结果与结论：心肌细胞培养上清组内的胰岛素样生长因子1、血小板源生长因子和成纤维细胞生长因子水平明显高于骨髓间充质干细胞培养上清组（P〈0．01）,提示心肌细胞培养上清内的胰岛素样生长因子1、血小板源生长因子和成纤维细胞生长因子可能与诱导骨髓问充质干细胞分化为心肌样细胞有关,其中主要的细胞因子是胰岛素样生长因子1。     

亮菌甲素治疗溃疡性结肠炎疗效及对血清IL-1β、IL-4的影响

目的探讨亮菌甲素对溃疡性结肠炎患者的治疗作用及对血清IL-1β、IL-4的影响。方法将2009年1月至2012年12月收治住院的病变累及部位在直肠和乙状直肠的溃疡性结肠炎患者随机分为三组,亮菌甲素治疗组（I组）、亮菌甲素联合地塞米松治疗组（Ⅱ组）和地塞米松对照组（Ⅲ组）。I组予以生理盐水100ml,加入亮菌甲素10nag灌肠治疗,每晚1次;Ⅱ组予以生理盐水100ml,加入亮菌甲素10mg和地塞米松5mg灌肠治疗,每晚1次。Ⅲ组予生理盐水100ml,加入地塞米松5mg灌肠治疗,每晚1次;观察三组患者治疗前后的疗效及血清IL-4和IL-1B的变化。结果三组均治疗4周后,I组的总有效率为90．O％,II组的总有效率为95．0%,高于Ⅲ组70．0％（P〈O．05）。I组和Ⅱ组的IL-4与治疗前及Ⅲ组比较均明显升高（P〈0．05）,IL-1B均明显降低（P〈0．05）。结论亮菌甲素治疗病变累及部位在直肠和乙状直肠的溃疡性结肠炎疗效显著,有助于增加溃疡性结肠炎患者的IL-4和降低IL-1β,其作用机制可能与其调节机体的免疫有关。     

心肌细胞培养上清诱导骨髓间充质干细胞的分化

背景：前期研究发现,心肌细胞培养上清具有诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的能力,这可能与培养上清内的某种细胞因子或几种细胞因子有关。 目的：分析大鼠心肌细胞培养上清诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞是否与心肌细胞培养上清内细胞因子含量不同有关。 方法：采用全骨髓贴壁培养法分离骨髓间充质干细胞并在体外培养纯化,酶消化法分离心肌细胞,分别以 1×10⁸ L^-1的细胞浓度培养72 h后收集上清。用酶联免疫吸附试验技术检测心肌细胞和骨髓间充质干细胞培养上清内的肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子1、血小板源生长因子、干细胞因子、成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子的水平。 结果与结论：心肌细胞培养上清组内的胰岛素样生长因子1、血小板源生长因子和成纤维细胞生长因子水平明显高于骨髓间充质干细胞培养上清组(P < 0.01),提示心肌细胞培养上清内的胰岛素样生长因子1、血小板源生长因子和成纤维细胞生长因子可能与诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞有关,其中主要的细胞因子是胰岛素样生长因子1。     

β2-肾上腺素能受体过表达后成年犬心肌细胞收缩功能的改变及机制

背景：在转基因小鼠、大鼠等小动物实验中发现，心肌细胞特异性过表达β -肾上腺素受体可以改善其收缩功能，但目前尚缺乏在大型哺乳动物进行的有关实验报道。 目的：探讨犬心肌细胞过表达β2-肾上腺素受体后心肌细胞收缩功能的改变及其可能机制。 方法：采用胶原酶消化法分离培养犬心肌细胞，用携带β2-肾上腺素受体目的基因的重组腺病毒转染心肌细胞。转染48 h后观察心肌细胞β2-肾上腺素受体蛋白表达及在基础状态和最大收缩状态下(以异丙肾上腺素10-6 mol/L刺激)心肌细胞cAMP水平及收缩功能的变化。 结果与结论：转染β2-肾上腺素受体的心肌细胞β2-肾上腺素受体蛋白表达及胞内cAMP水平明显增多(P < 0.05)，基础状态下收缩功能明显增强，但不改变最大收缩幅度百分比。说明β2-肾上腺素受体的过表达可能通过增加心肌细胞内cAMP水平改善心肌细胞的收缩功能。     

糖尿病与高血压糖尿病大鼠心脏α1-AR变化的比较

目的比较糖尿病与高血压糖尿病大鼠心脏α1肾上腺素受体（α1—AR）及其介导的功能变化。方法采用制糖尿病和高血压糖尿病大鼠的模型、放射配体结合实验和离体左心房收缩功能实验等方法观察大鼠心脏α1-AR及其介导的功能变化。结果与同龄对照大鼠相比,糖尿病大鼠心脏α1—AR的最大结合容量（Bmax）无显著增加;高血压糖尿病大鼠心脏,α1-AR的Bmax显著增加（P〈0．05）。与对照大鼠相比,糖尿病大鼠左心房α1—AR介导的最大收缩反应（Rmax）无显著增加;高血压糖尿病大鼠左心房α1—AR介导的Rmax下降26％（P〈0．05）,pD2值不变。结论糖尿病时,大鼠心脏α1-AR数量及其介导的Rmax均无显著增加;而高血压糖尿病时,虽然大鼠心脏α1-AR数量代偿性增加,但其介导的Rmax降低,可能与α1-AR后信号转导效应减弱有关。     

β2-肾上腺素能受体过表达后成年犬心肌细胞收缩功能的改变及机制

背景:在转基因小鼠、大鼠等小动物实验中发现,心肌细胞特异性过表达β-肾上腺素受体可以改善其收缩功能,但目前尚缺乏在大型哺乳动物进行的有关实验报道.目的:探讨犬心肌细胞过表达β2-肾上腺素受体后心肌细胞收缩功能的改变及其可能机制.方法:采用胶原酶消化法分离培养犬心肌细胞,用携带β2-肾上腺素受体目的基因的重组腺病毒转染心肌细胞.转染48 h后观察心肌细胞β2-肾上腺索受体蛋白表达及在基础状态和最大收缩状态下(以异丙肾上腺素10-6 mol/L刺激)心肌细胞cAMP水平及收缩功能的变化.结果与结论:转染β2-肾上腺索受体的心肌细胞β2-肾上腺素受体蛋白表达及胞内cAMP水平明显增多(P<0.05),基础状态下收缩功能明显增强,但不改变最大收缩幅度百分比.说明β2-肾上腺素受体的过表达可能通过增加心肌细胞内cAMP水平改善心肌细胞的收缩功能.     

NGF诱导PC12细胞向神经元的分化

目的：研究NGF诱导PC12细胞向神经元的分化情况。方法：实验分为10、20、50和80 μg•L^-1 NGF组及含10%胎牛血清的对照组。不同浓度的NGF组均诱导PC12细胞72 h,在24、48和72 h分别观察细胞的突起长度和细胞最大直径的变化情况;在诱导72 h后利用免疫细胞化学技术,观察不同剂量NGF作用后PC12细胞向MAP2阳性细胞分化的情况。 结果： 20、50和80 μg•L^-1 NGF组MAP2阳性细胞数明显高于对照组,且以50 μg•L^-1 组最为明显（P<0.05）。与对照组比较,加入NGF组分化的细胞其突起和细胞直径明显增长和增大,以50 μg•L^-1 组最为明显（P<0.01）。结论：NGF能够诱导PC12细胞向神经元分化,50 μg•L^-1 的NGF浓度是诱导PC12细胞向神经元分化的最适浓度。