银染单链构象多态性检测冠心病载脂蛋白E基因型

目的 ①建立一种简便、准确、实用的人栽脂蛋白E(apoE)基因型的检测方法；②研究冠心病(CHD)患者栽脂蛋白E基因多态性。方法 应用聚合酶链反应(PCR)特异性扩增apoE基因含编码112位和158位氨基酸的基因序列，用SS—SSCP技术进行apoE基因型分析。结果 运用SS—SSCP法检测了47名冠心痛患者apoE基因型，发现ε4／2、ε3／2、ε3／3、ε4／3、ε4／4基因频率分别为4．26％，14．89％，63．83％，12．76％，4．26％，并且发现ε2、ε3、ε4等位基因频率分别是9．57％，77．66％，12．77％。结论 ①该方法简单、快速、准确，对人体无害，适合于一般实验室开展；②ε4等位基因是CHD的易患因子之一，而ε3等位基因则具有保护作用。     

GL50分子在活化T细胞表面的表达及对细胞增殖的影响

目的探讨GL50分子在活化T细胞表面的表达及其生物学意义。方法分别取不同时相（24-144h）激发型CD3单抗联合CD28单抗活化的T细胞，采用流式细胞术分析T细胞表面GL50分子表达阳性率，RT-PCR法检测T细胞内GL50分子mRNA转录水平；^3H-TdR掺入法分析阻断GL50信号对T细胞增殖的影响。结果激发型CD3单抗联合CD28单抗活化T细胞后24h GL50分子阳性表达率为17．2％，其后逐渐升高至活化120h时达最大阳性率95．7％，并维持至活化144h时基本不变；T细胞活化24—144h均可检测到GL50分子mRNA表达；阻断性GL50分子单抗对活化T细胞增殖具有显著抑制作用。结论GL50分子在活化T细胞表面呈诱导性表达，且可与T细胞表面自身受体结合在免疫应答放大效应中发挥重要作用。     

对抗牵引下的后扳拔伸法治疗腰椎间盘突出症

腰椎间盘突出症 (以下简称腰突症 )是指腰椎间盘的变性、损伤 ,髓核从破裂的纤维环处膨出、脱出 ,其突出的部分和变性的纤维环引起脊髓、马尾、脊神经根的压迫刺激症状 ,其主要临床表现为腰痛及下肢的坐骨神经痛。好发于青壮年 ,以 2 0～ 35岁为多见 ,男性多于女性 ,本病严重影响患者的生活、工作。自 1996年开始 ,我们采用对抗牵引下的后扳拔伸法治疗腰突症 ,疗效显著 ,报告如下。1　一般资料本组 70例中 ,男 5 0例 ,女 2 0例 ,男女之比为 2 5∶1;年龄最大 70岁 ,最小 2 0岁 ,平均年龄 5 0 8岁 ;病程最短 3ｄ ,最长4月 ,平均病程 2 8 4ｄ…     

FLT3及FLT3-ITD突变体在HEK293T细胞的表达和纯化北大核心CSCD

目的构建fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)及FLT3-内部串联重复序列(FLT3-ITD)突变体的真核表达载体,在HEK293T细胞中稳定表达并通过免疫沉淀技术对蛋白进行纯化。方法从正常人及FLT3-ITD阳性急性髓系白血病患者骨髓干细胞中提取RNA,反转录为cDNA,使用带有流感病毒血凝素(HA)标签序列的特异性引物,采用PCR扩增出人FLT3及FLT3-ITD突变体编码区全长并克隆到CD530A-T2A-GFP载体上。重组的FLT3及突变体FLT3-ITD表达质粒,通过脂质体polyJ et转染到HEK293T细胞进行表达。使用HA抗体结合微珠沉淀带HA标签的FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。然后,通过HA肽段将蛋白竞争洗脱下来,洗脱下来的蛋白经银染染色。结果 FLT3及FLT3-ITD突变体全长编码序列成功构建到CD530A-T2A-GFP载体上,Western blot法及聚丙烯酰胺凝胶银染法成功检测到FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白的表达、纯化。结论在HEK293T细胞中成功表达并纯化FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。     

微生物检验精品课程建设的实践与探索

立足高等职业教育,分析研究精品课程建设的内涵、课程设置的思路、课程实施的途径及过程管理等,从而发挥精品课程在教育改革中的积极作用。     

儿童肾母细胞瘤相关的易感综合征筛查与相应的肾母细胞瘤治疗进展

肾母细胞瘤是儿童最常见的恶性肿瘤之一, 约占儿童肿瘤的7%。其中10%～17%的肾母细胞瘤与肿瘤易感综合征(cancer predisposition syndrome, CPS)有关, 此类肾母细胞瘤发病更早, 恶性度及双侧发病率更高。目前非易感型综合征的肾母细胞瘤的治疗生存率可达90%以上, 治疗方案包括手术及联合放化疗, 而易感型综合征肾母细胞瘤治愈成功率较低, 为了保留肾单位、改善预后, 其治疗也各不相同。与肾母细胞瘤相关的CPS有WAGR综合征、Denys-Drash综合征和Beckwith-Wiedemann综合征等。目前国内医师缺少对肾母细胞瘤相关的易感综合征预防及诊断的认识, 本文通过回顾相关文献, 对肾母细胞瘤相关的易感综合征的筛查和相应的肾母细胞瘤治疗方法进行综述。     

激发型CD28单抗诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的作用研究

为了探讨激发型CD2 8单抗诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的作用及其机制 ,在表达CD2 8分子的多发性骨髓瘤细胞U2 6 6和XG 1的培养体系中加入终浓度为 10 μg/ml的激发型CD2 8单抗 ,逐日观察和分析细胞的生长与增殖状况。结果显示 ,在加入激发型CD2 8单抗后 2 4h即可见细胞聚集且逐渐加剧 ,细胞的立体感和折光性逐渐减弱 ,细胞的生长与增殖抑制 ,台盼蓝着色阳性率增加 ;凝胶电泳的结果表明 ,多发性骨髓瘤细胞出现降解的DNA条带 ;透射电镜分析的结果显示 ,加入激发型CD2 8单抗培养 2 4～ 4 8h ,30 %以上的细胞出现核质边聚的凋亡早期的病理性改变 ,培养 72h后 ,5 0 %以上的细胞出现空泡及凋亡小体。提示激发型CD2 8单抗具有诱导表达CD2 8分子的多发性骨髓瘤细胞凋亡的作用。     

CD80和CD86介导的共刺激信号的比较及其生物学作用

共刺激信号在T细胞的活化中具有重要的作用,CD80和CD86是两个重要的共刺激分子。尽管两者存在许多相似之处,但随着研究的深入,发现两者在分子结构、所介导的生物学功能等方面均存在着诸多的不同。研究两者区别对于更好的了解它们的功能具有重要的意义。     

转染人CTLA-4细胞的对树突状细胞B7分子表达的影响

从PHA活化的人外周血T细胞中抽提总RNA,经RT-PCR扩增出CTLA-4的全长基因,构建逆转录病毒载体pEGZ-Term/CTLA-4,经PCR及电泳鉴定后感染包装细胞293T。收集培养上清感染L929细胞。用Zeocin选择培养。经免疫荧光及流式细胞术进行筛选,获取稳定表达CTLA-4分子的细胞株CTLA-4/L929。将CTLA-4/L929经丝裂霉素处理后与体外细胞因子诱导的树突状细胞共同孵育。分别于24、48及72h,用直接免疫荧光法和流式细胞术分析树突状细胞B7-1和B7-2分子的表达。研究结果显示,构建的重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/CTLA-4的PCR产物长约700 bp,与人CTLA-4基因的长度一致。经Zeocin选择及多次亚克隆化培养,CTLA-4基因转染细胞CTLA-4/L929稳定表达膜型CTLA-4分子。以其为刺激细胞与树突状细胞共同培养后,可明显下调树突状细胞B7-1的表达,但对B7-2的表达没有影响。本研究获得的CTLA-4基因转染细胞株,为进一步探讨CTLA-4及其配基分子在免疫应答中的作用与机制提供了手段。     

紫杉醇对IL-36γ介导的抗肿瘤作用的影响

目的: 探讨不同剂量紫杉醇对IL 36γ介导的抗肿瘤作用的影响。方法: 构建重组表达载体pCDEF3 IL 36γ,再经基因转染、亚克隆筛选和实时定量PCR（RT qPCR）鉴定,构建可稳定表达IL 36γ的转染细胞株B16 IL 36γ;利用荷瘤小鼠模型,观察转染表达的IL 36γ对肿瘤生长的影响;将肿瘤细胞转染表达的IL 36γ联合不同剂量紫杉醇（0,12.5,25和100 μg）进行C57BL/6J雌鼠腹腔注射,分析紫杉醇对肿瘤直径的影响,并检测肿瘤中干扰素 γ mRNA的表达。结果： 成功获得能稳定表达IL 36γ的转染细胞株B16 IL 36γ;IL 36γ可显著抑制B16肿瘤的生长;100 μg剂量的紫杉醇明显抑制了IL 36γ介导的抑肿瘤生长作用和肿瘤中干扰素 γ表达,而12.5 μg剂量的紫杉醇则对IL 36γ介导的抑肿瘤生长和肿瘤中干扰素 γ表达具有促进作用。 结论： 采用IL 36γ进行肿瘤免疫治疗的同时,不宜采用高剂量紫杉醇,但可联合低剂量紫杉醇达到一定的协同效果。