双荧光素酶报告基因技术验证miR-31对LATS2的靶向调控作用

目的通过双荧光素酶报告基因技术验证miR-31对大肿瘤抑制因子2(LATS2)的靶向调控作用,观察miR-31在心肌细胞肥大过程中的可能影响。方法运用Targetscan软件预测大鼠miR-31对LATS2的靶向调控作用;以双荧光素酶报告质粒为工具载体,分别插入人工合成的大鼠LATS2基因野生型3′UTR(LATS2-3′UTR-WT)及突变型3′UTR(LATS2-3′UTR-MU)片段,构建LATS2-3′UTR-WT及LATS2-3′UTR-MU双荧光素酶报告质粒;重组双荧光素酶报告质粒分别与miR-31过表达质粒共转染293T细胞,检测荧光素酶活性并分析miR-31对LATS2的靶向调控作用;血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导体外心肌细胞肥大模型,RT-qPCR检测miR-31、LATS2及心肌细胞肥大基因心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)的表达,F肌动蛋白荧光探针观察心肌细胞形态变化。结果 Targetscan软件预测结果显示,大鼠miR-31与LATS2基因3′UTR存在互补结合位点;经酶切及基因测序鉴定,成功构建LATS2-3′UTR-WT及LATS2-3′UTR-MU双荧光素酶报告质粒;与LATS2-3′UTR-MU+miR-31组相比,LATS2-3′UTR-NC+miRNA-31组荧光素酶活性无明显变化(0.98±0.03 vs.1.00±0.03,P0.05),而LATS2-3′UTR-MT+miR-31组与LATS2-3′UTR-NC+miR-31组相比,荧光素酶活性显著降低(0.74±0.02 vs.1.00±0.03,P0.01);AngⅡ诱导48h后可检测到心肌细胞肥大基因ANP(P0.01)及β-MHC表达上调(P0.05),心肌细胞肥大过程中miR-31表达显著上调(P0.01),LATS2基因明显下调(P0.05),96h后心肌细胞表面积明显增大。结论 miR-31可通过与LATS2基因3′UTR互补结合实现其对LATS2靶向调控作用,miR-31靶向作用LATS2可能参与调控心肌细胞的肥大。     

不同时间段临床分离MRSA生物膜形成能力的探讨

目的 探讨不同部位分离MRSA在不同时间段形成生物膜的能力,为防止治疗中生物膜形成对细菌耐药的影响.方法 收集临床各部位分离的MRSA,采用结晶紫法测定MRSA在不同时间段形成生物膜的能力.结果 所有菌株随培养时间延长形成生物膜的能力增强,其中尿液分离菌株生物膜形成强度更加明显.结论 为了减少生物膜的形成,在治疗过程中...     

金黄色葡萄球菌生物膜形成与ica操纵子关系探讨

目的 了解不同部位分离金黄色葡萄球菌在不同时间生物膜形成与ica操纵子关系.方法采用结晶紫法测定不同部位在不同时间形成生物膜的含量;采用PCR法测定菌株是否含有ica基因.结果生物膜形成能力强的菌株则ica基因大部分为阳性.结论含有ica基因的金黄色葡萄球菌则生物膜形成的能力较强.     

CD8阳性T细胞亚群在肺癌外周血的检测及分析

目的 检测肺癌患者外周血清中CD8⁺T细胞亚群CD28⁺及CD57⁺的表达程度,探讨其临床意义。 方法 合肥市第二人民医院经细胞学或病理学诊断为肺癌的初次治疗患者30例, TNM分期(UICC,第7版)Ⅲ期12例,Ⅳ期18例。病理类型腺癌15例,鳞癌8例,小细胞肺癌7例。流式细胞仪分别检测肺癌患者组治疗前后及健康对照组人群的血清中CD8⁺T细胞CD28⁺和CD57⁺的表达水平,分析该表达水平变化及与肺癌临床分期和病理学类型之间的关系。 结果 肺癌患者治疗前血清中CD28⁺T细胞亚群比例为(12.34±3.72)%,CD57⁺ T细胞亚群比例为(19.53±5.26)%。而健康对照组血清中CD28⁺T细胞亚群比例为(23.53±4.15)%,CD57⁺ T细胞亚群比例为(11.37±2.73)%,差异有统计学意义(P<0.05),该类指标与肿瘤病理类型无关,而随着不同临床分期增加,CD8⁺CD57⁺T细胞未见差异,而CD8⁺CD28⁺T细胞表达差异有统计学意义(P<0.05)。经两周期化疗后,缓解组(完全缓解+部分缓解)患者血清中CD28⁺、CD57⁺T细胞亚群比与健康对照组患者相比,差异无统计学意义(P>0.05),而未缓解组(稳定+进展)患者的CD28⁺、CD57⁺T细胞亚群比例分别为(10.62±2.74)%、(20.45±4.36)%.与健康对照组差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 肺癌患者血清中CD8⁺CD28⁺T细胞表达较正常人群明显减低,而CD8⁺CD57⁺T细胞表达较正常人群明显升高,联合该两种T细胞亚群检测不仅可以了解肺癌患者免疫状况,同时可以评估肺癌患者预后,有一定临床应用价值。     

评价大鼠离体肝灌流模型稳定性的方法

以自建的大鼠原位循环肝灌流模型为研究模型,建立一套实用的模型稳定性评价方法。首先进行一般稳定性评价,包括肉眼观察肝脏形态,监测门脉压、灌流液pH,定时检测灌流液K⁺浓度、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,肝组织病理检查等;要求在整个灌流过程中肝脏色泽均匀,无斑块状改变,以门静脉压始终无骤变,稳定在8~14 mmHg范围内,变化不超过0.5 mmHg/30 min,pH始终处于7.4~7.2,变化不超过0.1/30 min,K⁺浓度无突然升高现象,灌流液中ALT、AST水平随时间无显著性变化,肝组织病理检查不出现除空泡性变以外的病变为标准,确定模型可维持稳定的时间。在满足一般稳定性的基础上,根据不同的研究目的对模型进行功能稳定性评估,要求研究所用的指标能在空白灌流组和阳性药灌流组之间体现显著性差异;本研究以药物肝损伤研究为例,以灌流液ALT、AST、LDH(乳酸脱氢酶)水平为指标,并进行肝组织病理检查,结果两组出现极显著性差异,故判定用所建立的灌流模型进行肝损伤研究可真实反映受试药的肝损伤情况,一般不会出现假阴性和假阳性结果。     

针刺健康受试者廉泉穴的针感与脑效应相关性分析

目的 基于功能性磁共振成像(f MRI)探索针刺廉泉穴过程中针感与脑效应的相关性。方法 纳入18～35岁右利手健康受试者20例,采用随机交叉设计法将其随机分为两部分各10例,一部分受试者先接受真针刺,间隔7天洗脱期后再接受假针刺;另一部分受试者先接受假针刺,间隔7天洗脱期后再接受真针刺。将最终获得的40例次数据中接受真针刺时收集的数据归为试验组,接受假针刺时收集的数据归为对照组。真针刺为针刺廉泉穴,行手法1 min,留针8 min,再重复1次,共干预18 min;假针刺为针刺类廉泉穴,针灸师手拿针柄但不行手法持续1min,留针8 min,再重复1次,共干预18 min。针刺过程中采用马萨诸塞州总医院针感量表对针感进行评分,对受试者全脑进行f MRI扫描,以低频振幅分析(ALFF)指标评估受试者针刺后脑区功能活动的变化;对试验组针感评分与差异脑区的ALFF指标进行相关性分析,以探索脑功能活动变化与针感之间的关系。结果 试验组针感中酸痛、深压痛、沉重感、胀痛、刺痛、如鲠在喉评分及总分均高于对照组(P<0.05或P<0.01);疼痛、麻木感评分两组比较差异无统计学意义(P>...     

阿帕替尼治疗晚期结肠癌临床疗效观察

目的 阿帕替尼治疗晚期结肠癌临床疗效观察,明确阿帕替尼的治疗效果.方法 根据随机性原则选取从2015年1月至2016年10月期间在我院住院治疗的结肠癌患者75例,将75例确诊为结肠癌患者作为临床研究对象,随机盲法分为两组,对照组35例,对照组患者采取奥沙利铂+卡培他滨化疗2周期,观察组30例,采取阿帕替尼进行治疗4周,治疗后评估两组患者的疗效情况.结果 对照组CR患者12例(34.29%),观察组11例(36.67%),PD患者对照组5例(14.29%),观察组2例(6.67%),缓解率对照组22例(62.86%),观察组23例(76.67%),疾病控制率对照组30例(85.71%),观察组28(93.33%),两组客观缓解率及疾病控制率相比差异均无统计学意义(P>0.05).结论 阿帕替尼对晚期结肠癌患者治疗疗效明确,不良反应少,阿帕替尼与奥沙利铂+卡培他滨化疗均可行,尤其是对晚期患者可耐受,有益于临床治疗.     

原发性高血压左室肥厚患者循环miRNA的高通量测序分析

目的:探讨原发性高血压左室肥厚患者循环miRNA的特异性表达,为高血压左室肥厚的诊断和预测寻找新的候选生物学标志。方法:入选原发性高血压合并左室肥厚及原发性高血压不合并左室肥厚患者各5例,采集患者血浆标本并进行miRNA提取,通过高通量二代测序技术检测两组患者循环miRNA表达变化,对测序数据进行分析筛选出差异性表达miRNA,进一步通过生物信息学分析差异表达miRNA的靶基因并进行功能富集分析,初步探讨差异表达miRNA的功能。结果:筛选出原发性高血压左室肥厚患者差异化特异性表达miRNA共64个,其中表达上调的35个,表达下调的29个。生物信息学分析显示差异性表达miRNA的功能主要涉及心肌细胞肾上腺素信号、神经活化配体/受体相互作用、免疫炎症反应、脂肪酸代谢等与高血压左室肥厚密切相关信号通路的调控。变化差异最大的10个miRNA中,hsa-mir-100、hsa-mir-202、hsa-mir-181a-2、hsa-mir-450b富集的功能最为显著。结论:原发性高血压左室肥厚患者外周循环中存在特异性miRNA表达谱,可为原发性高血压左室肥厚的诊断和预测提供候选生物学标志。     

针刺治疗阿片类药物成瘾的机制研究进展

成瘾是一种慢性复发性脑病,针刺可以促进成瘾患者生理、心理功能的恢复,与目前可用的药物干预相比具有更大的治疗潜力,且无不良反应。针刺治疗成瘾性疾病已成为近年来戒毒领域的热点研究方向,但对其机制探索仍缺乏系统总结。因此笔者基于国内外研究,并结合所在团队在针刺治疗成瘾性疾病方向所做的系列研究工作,归纳总结针刺治疗阿片类药物成瘾的机制研究概况,对针刺治疗阿片类药物成瘾的作用机制进行综述。     

miR-31及其靶基因LATS2在大鼠肥大心肌细胞中的表达

目的观察大鼠心肌细胞肥大过程中miR-31及其靶基因LATS2的表达变化。方法构建双荧光素酶基因报告系统鉴定miR-3l对LATS2的靶向作用。体外培养原代大鼠心肌细胞,给予10-6mol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激构建体外心肌细胞肥大模型,RT-q PCR检测miR-31、LATS2及心肌肥大基因ANP与β-MHC表达,心肌细胞F肌动蛋白荧光探针染色观察心肌细胞形态变化,Western blot进一步检测LATS2蛋白表达。结果 miR-3l可与LATS2-3'UTR基因片段特异性结合并使荧光素酶活性显著降低。10-6mol/L AngⅡ干预48 h后可检测到心肌细胞肥大基因ANP及β-MHC表达上调(P0.01和P0.05),干预96 h后心肌细胞表面积明显增大。伴随心肌细胞的肥大变化,miR-31表达显著上调(P0.01),LATS2在基因及蛋白水平均明显下调(P0.05)。结论伴随大鼠心肌细胞的肥大变化,miR-31表达显著上调,而LATS2在基因及蛋白水平均明显下调。