面向医学本科生开设《细胞培养技术》选修课程的教学体会

我校为临床医学及其它相关专业本科生开设了<细胞培养技术>课程.在该课程教学过程中,我们对教学内容,教学方法,教学考核等进行了认真仔细的探讨,研究面向医学本科生开设<细胞培养技术>选修课的可行性与重要性,为提高学生实验操作技能,启蒙科研思维能力,以及培养科研兴趣等打下良好基础.     

大学实验室开放项目的实践与思考

为更好发挥高校实验室在人才培养中的功能而设立的实验室开放项目,对高校学生实践能力、科研思维能力的培养发挥着重要的作用.但由于实验室开放项目在管理和实施中存在着一系列的问题,影响了该项目作用的充分发挥.本文就高校实验室开放项目的意义、实施、存在的问题及对策进行分析总结,以使这一新型的教育模式得到更好的发展.     

启动子区5′CpG岛去甲基化对人结肠癌细胞生物学表型的影响

目的：探讨DNA启动子区5′CpG岛甲基化状态与人结肠癌RKO细胞增殖凋亡等生物学特征的关系。方法： 应用特异性DNA甲基转移酶（DNMTs）抑制剂-5-氮-2′-脱氧胞苷（5-Aza-2′-deoxycytidine，5-Aza-CdR）处理肠癌RKO细胞72 h，甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）及DNA测序法分析p16/CDKN2基因CpG岛甲基化状态；MTT、FCM、荧光染色及透射电镜检测启动子区去甲基化后细胞生长、形态和细胞周期凋亡的影响。 结果： DNMTs抑制剂能较好地逆转启动子区胞嘧啶甲基化状态；CpG岛去甲基化后能明显地抑制肠癌细胞的生长，增加细胞群体倍增时间（P<0.01），诱导肠癌细胞凋亡，影响肠癌细胞周期分布，并具有良好的量效依赖关系。 结论： 通过逆转CpG岛高甲基化能有效地抑制肠癌细胞增殖，为临床治疗大肠癌提供新的作用靶点。     

无血清培养条件下抗肿瘤药物对HL—60细胞凋亡的诱导作用

研究了在有血清和无血清培养条件下，放线菌素D，阿霉素，秋水仙碱，阿糖胸苷等诱导HL－60细胞凋亡的作用。结果表明，在两种培养条件下，所测试的抗肿瘤药物均可诱导LH－60细胞凋亡，其证据是DNA凝胶电泳呈现特有的“梯形”，典型的凋亡细胞（核结构浓集，集分块，胸膜出芽，细胞体积缩小）和DNA片段增多。各组的细胞存活率，DNA片段率及凋亡细胞发生率在有血清和无血清培养条件下均无明显差异（P>0．05）。说明可用无血清培养代替有血清培养来诱导细胞凋亡。     

医学专业本科生《医学分子生物学》教学探讨

医学分子生物学是医学领域中最为活跃的学科之一，针对医学专业本科生开设《医学分子生物学》课程，是当前医学科学发展的必然要求，也由于分子水平医学知识的新颖和深奥，学习掌握有一定的难度。本文从课程教学的特征、教学中遇到的问题和改进的措施等方面进行分析，探讨《医学分子生物学》的教学改革，针对不同的问题提出相应的措施，以便于该课程的教学能够顺利进行，为培养未来医学人才提供参考。     

实时定量PCR检测SiRNA对SMMC-7721细胞中MK基因表达的抑制作用

目的 通过实时定量PCR(Real-Time PCR)检测基因表达的mRNA,建立一种直接观察小干扰RNA(SiRNA)抑制目的基因表达的方法.方法 化学设计合成对应于中期因子(midkine,MK)基因表达mRNA的SiRNA,经脂质体转染肝癌细胞株SMMC-7721,一定时间后,提取总RNA,逆转录cDNA,然后用实时定量PCR方法,以3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase;GAPDH)为内参照定量MK的表达,比较不同组中MK基因mRNA的量.结果 3种SiRNA处理的SMMC-7721细胞中MK基因的表达mRNA明显降低(P＜0.01).结论 实时定量PCR方法直接、简便、精确地反映了SiRNA对目的基因表达的抑制作用.     

抗乙肝免疫核糖核酸前体脂质体的研究

目的制备、研究抗乙肝iRNA前体脂质体。方法采用白细胞黏附抑制试验检测抗乙肝iRNA前体脂质体体外和小鼠口服后体内生物活性。结果抗乙肝iRNA前体脂质体口服有效 ,而iRNA和正常肝RNA前体脂质体均无作用。抗乙肝iRNA前体脂质体体外活性检测未黏附抑制指数在 5 3 .8%～ 76.2 % ;多批次供试品活性检测结果显示其稳定性和重复性较好。结论将抗乙肝iRNA制备为前体脂质体可成为有效的口服剂型     

无血清培养条件下抗肿瘤药物对HL-60细胞凋亡的诱导作用

研究了在有血清和无血清培养条件下,放线菌素 D、阿霉素、秋水仙碱、阿糖胞苷等诱导 HL-60细胞凋亡的作用。结果表明,在两种培养条件下,所测试的抗肿瘤药物均可诱导 HL-60细胞凋亡,其证据是 DNA 凝胶电泳呈现特有的"梯形",典型的凋亡细胞(核结构浓集、核分块、胞膜出芽、细胞体     

抗乙肝免疫核糖核酸脂质体前体对小鼠生物活性的研究

为了避免抗乙肝核糖核酸（iRNA)口服易受RNase降解而失活,将其制备成抗乙肝iRNA脂质体前体。采用白细胞粘附抑制试验（LAI）检测了抗乙肝iRNA脂质体前体外和小鼠口服后体内生物活性。结果表明,抗乙肝iRNA脂质体前体口服给药小鼠可明显抑制白细胞粘附;而裸露iRNA和正常肝RNA脂质体前体均无作用;抗乙肝iRNA脂质体前体体外活性检测未粘附抑制指数（NAI％）在53．8％－76．2％。多批次样品活性检测结果显示稳定性和重复性较好。说明将抗乙肝iRNA制备为脂质体前可作为有效的口服剂型。     

RNAi沉默Polo-like kinase-1基因表达对大肠癌细胞端粒酶活性的影响

 目的 探讨polo-like kinase-1（PLK1）基因对大肠癌细胞增殖和端粒酶活性的影响。 方法根据PLK1基因序列特点,设计并用化学方法合成小干扰核糖核酸分子（small interfering RNA,siRNA）,转染人大肠癌SW480细胞后,分别采用实时定量PCR和Western blot检测PLK1基因mRNA和蛋白表达水平。分别采用MTT法和TRAP-ELISA方法检测PLK1基因转染对大肠癌细胞增殖和端粒酶活性的影响。 结果 所设计的5个siRNA均能明显抑制大肠癌SW480细胞PLK1 mRNA水平,以P4效果最好。以P4转染处理大肠癌细胞后,PLK1 mRNA水平和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性。MTT和TRAP-ELISA方法检测发现,P4siRNA转染组细胞增殖和端粒酶活性明显受到抑制,且呈浓度和时间依赖性（P＜0.05,P＜0.05）。 结论 PLK1基因对大肠癌细胞增殖具有重要的调控作用,以PLK1 siRNA转染处理大肠癌细胞,可明显抑制大肠癌细胞的恶性增殖,其机制可能与抑制端粒酶活性有关。