电刺激应激对C57 BL/6小鼠腹腔巨噬细胞产生白细胞介素1的影响

应激所致的免疫功能改变的机理认为与神经内分泌和免疫系统双向调节作用有关。鉴于白细胞介素1(IL-1)在这双向环路中的作用,促使研究电刺激应激对C57 BL/6小鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1的影响。结果表明:应激6、12、20h后IL-1活性明显抑制,分别是正常活性的63.7±5.5％、59.2±4.8％、61.2±3.8％,P值均<0.01。而应激1、3 h后IL-1活性与正常无明显差异。我们进一步观察到:将应激6、12、20 h后的腹腔巨噬细胞在体外温育2、4、8 h后,再用内毒素诱生,随温育时间延长,巨噬细胞产生IL-1水平逐渐回升,8 h后IL-1活性基本恢复正常。上述结果提示:6 h以上电刺激应激抑制IL-1生成,但这种抑制在培养8 h条件下是可逆的。     

白细胞介素1受体

白细胞介素1受体(IL-IR)介导了IL-1所有的生物学作用。用先进的分子生物学方法已证明,IL-I~R 是一条分子量约力80kD 的多肽,它的 N 端位于胞外,由319个氨基酸组成,主要功能是与 IL-1结合,C 端由217个氨基酸组成,位于胞内,其作用是与细胞内受体后信号转导系统相联系。每个正常细胞含 IL-lR 的数量较少,约在10～1000个结合位点之间。     

RNAi沉默Polo-like kinase-1基因表达对大肠癌细胞端粒酶活性的影响

 目的 探讨polo-like kinase-1（PLK1）基因对大肠癌细胞增殖和端粒酶活性的影响。 方法根据PLK1基因序列特点,设计并用化学方法合成小干扰核糖核酸分子（small interfering RNA,siRNA）,转染人大肠癌SW480细胞后,分别采用实时定量PCR和Western blot检测PLK1基因mRNA和蛋白表达水平。分别采用MTT法和TRAP-ELISA方法检测PLK1基因转染对大肠癌细胞增殖和端粒酶活性的影响。 结果 所设计的5个siRNA均能明显抑制大肠癌SW480细胞PLK1 mRNA水平,以P4效果最好。以P4转染处理大肠癌细胞后,PLK1 mRNA水平和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性。MTT和TRAP-ELISA方法检测发现,P4siRNA转染组细胞增殖和端粒酶活性明显受到抑制,且呈浓度和时间依赖性（P＜0.05,P＜0.05）。 结论 PLK1基因对大肠癌细胞增殖具有重要的调控作用,以PLK1 siRNA转染处理大肠癌细胞,可明显抑制大肠癌细胞的恶性增殖,其机制可能与抑制端粒酶活性有关。     

人内源性逆转录病毒研究概况

人类内源性逆转录病毒(HERV)是几百万年前整合到人类基因组中的逆转录病毒的残余物，约占了整个基因组的8%。大部分HERV元件在进化过程中由于突变、缺失等的积累，已没有编码能力。但仍有少数由于正选择的压力，完整的开放阅读框被保留了下来。它们在一些特定的组织或分化发育的特定阶段表达，可能具有重要的生理意义。而在某些疾病情况下的高表达水平提示其可能与疾病的发生发展相关。由于最初插入位点的关系或后来的转座作用，HERV元件相互之间以及对基因组中的其他基因都可能有影响。对HERV目前还了解甚少，本文将对HERV的生物学功能以及对HERV-K、-W、-H三个家族的研究概况作一简要综述。     

大肠癌转移相关基因骨桥蛋白反义及正义真核表达质粒的构建

目的 构建大肠癌转移相关基因骨桥蛋白(OPN)反义和正义真核表达质粒。方法 运用PT-PCR技术分别克隆两种OPN cDNA序列:pGEM-T Easy-OPN(反义201bp)和pGEM-T Easy-OPN（ORF），并由此构建两种重组真核表达质粒：peDNA3．1( )-OPN(201bp)反义真核表达质粒和peDNA3．1( )-OPN(ORF)正义真核表达质粒。结果 OPN反义和正义真核表达质粒构建成功。结论 两种真核表达质粒的构建成功，为进一步研究OPN与大肠癌肝转移的相关性提供了实验平台。     

急性白血病（M4,M5）单核细胞产生白细胞介素1的研究

本研究观察了脂多糖刺激正常人和急性白血病（Ｍ４，Ｍ５）患单核细胞产生白细胞介素１（ＩＬ－１）的差别。结果表明：原代培养的白血病细胞能产生ＩＬ－１；但其产生ＩＬ－１水平明显低于正常人单核细胞水平，相差非常显（Ｐ〈０．００１）；同时发现ＩＬ－１产生水平与白血病病程有关（发病期：４２２３．９±２６３．５ｃ／ｍｉｎ；缓解期：５６１４．３±４９３．４ｃ／ｍｉｎ，Ｐ〈０．００１）。提示：ＩＬ－１产生水平可     

含LTR序列的psiTPTE22基因mRNA在肿瘤中的表达

目的：通过检测psiTPTE22基因编码的AK097082及BC031001的mRNA表达情况，确定其是否是基因芯片检测到的在结肠癌组织中高表达的基因，同时探讨该基因在癌症发生发展中的可能作用。方法：应用RT-PCR以及实时荧光定量．PCR法检测psiTPTE22编码的AK097082及BC031001的mRNA在肾、肝、胃、肺、结肠的癌组织和相应癌旁正常组织以及9个肿瘤细胞系和胎盘组织中的表达情况。结果：RT-PCR显示只有psiTPTE22编码的BC031001 mRNA在结肠组织中表达，但实时荧光定量PCR检测及F检验发现其在结肠癌与相应正常组织中的表达差异无统计学意义（P〉0．05），因此psiTPTE22并不是基因芯片检测到的在结肠癌中特异高表达的基因。实时荧光定量．PCR还发现BC031001 mRNA在肾、肝、胃和肺的正常组织中高表达，而在相应的癌组织中表达较低；该mRNA在多个肿瘤细胞系中不表达或表达量很低；在胎盘组织中表达较高。对各组癌组织与相应癌旁正常组织的表达量进行F检验发现，肾、肝、胃、肺的癌旁正常组织和相应癌组织中的表达水平差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：psiTPTE22基因编码的BC031001mRNA表达水平与多种癌症呈负相关性，但其原因及其在肿瘤发生发展过程中的作用还有待进一步研究。     

针对PLK1基因mRNA的SiRNA治疗结肠癌的细胞学研究

目的研究小干扰RNA（Small interfering RNA, SiRNA）处理结肠癌细胞株SW480，对该细胞存活生长的影响。方法化学合成了对应于PLK1(Polo-like kinase 1)基因表达mRNA碱基序列不同位点的3种特异SiRNA，分别用脂质体将其以及等比例混合物转染SW480细胞，MTT法检测不同的SiRNA对细胞存活的影响，并应用细胞染色和DNA电泳分析细胞凋亡。结果发现3种SiRNA及其混合物对SW480细胞的存活具有相应的抑制作用，随着浓度的增加SW480细胞存活百分率下降，而且混合物均比单一使用效果好，三种混合物在25nM处抑制了近20％的SW480细胞存活，同时观察到细胞形态和核酸变化的凋亡现象。结论化学合成的SiRNA降低了SW480细胞的存活，诱导了细胞凋亡，而且联合应用效果更好，提示新的抗肿瘤措施。     

肺癌活检组织中Polo样激酶-1 mRNA水平检测的临床意义

目的 探讨实时荧光定量-聚合酶链反应(RFQ -PCR)检测肺癌活检组织Polo样激酶-1(PLK1)mRNA水平,及其与肺癌临床病理分期、分型的相关性.方法 对69份肺癌、28份肺良性疾病患者的纤维支气管镜活检标本,采用RFQ-PCR检测PLK1和GAPDH荧光强度,并绘制曲线,计算出循环数阈值(Ct),相同组织中PLK1和GAPDH的初始模板量的比值为2CtGAPDH-CtPLK1,同时以此值作为PLK1 mRNA水平的相对定量指标进行标本检测结果评价.结果 肺癌组PLK1 mRNA水平为0.124±0.194,肺良性疾病组为0.037±0.042,两者差异有统计学意义(P=0.03).而其在各病理类型和不同TNM分期之间的差异均无统计学意义(P＞0.05),仅小细胞肺癌的表达水平略高(0.191±0.275).结论 RFQ -PCR测定纤维支气管镜活检标本中PLK1基因表达增高与肺癌的发生存在一定关系,并且可能成为肺癌检测的一个肿瘤标志.