Egr-1对低氧应激下肝癌细胞BEL-7402黏附和迁移能力的影响

目的探讨显性负性突变（dominant negative）抑制即刻早期蛋白Egr-1转录因子活性对低氧应激下肝癌BEL-7402细胞黏附和迁移能力的影响。方法构建显性负性突变Egr-1腺病毒,感染BEL-7402细胞,同时以空载体和空白细胞做对照。“划痕”实验检测细胞迁移能力的变化;细胞与基质黏附实验,免疫荧光检测Egr-1对黏附能力的影响;Westernblot检测相关蛋白的改变。结果成功构建获得Egr-1转录功能竞争抑制型稳定腺病毒,并感染BEL-7402细胞。与BEL-7402细胞比较,低氧状态下Ad-dnEgr-1/BEL-7402组细胞,迁移,黏附能力显著降低（P<0.01）,细胞中与迁移、粘附相关的微丝所形成的伪足结构明显减少,FAK蛋白磷酸化水平降低。结论抑制Egr-1转录因子功能可以抑制肝癌BEL-7402细胞的迁移和黏附。     

腺病毒介导的IL-24基因抑制人脑胶质瘤细胞增殖的机制研究

目的:探讨IL-24抑制人脑胶质瘤细胞增殖的可能机制.方法:用腺病毒介导的IL-24(Ad.IL-24)及腺病毒空载体感染人脑胶质瘤细胞U251,通过荧光显微镜观察腺病毒的感染效率,RT-PCR法检测IL-24的转录水平;用MTT法、流式细胞仪检测IL-24对U251细胞增殖的影响;用蛋白质印迹方法检测神经生长因子(NGF)、酪氨酸激酶受体A(tyrosine kinase A, TrkA)的表达水平,并分析其相关性.结果:Ad.IL-24及腺病毒空载体转染U251后,RT-PCR结果显示Ad.IL-24组出现高表达电泳条带,而腺病毒空载体组则未出现电泳条带;MTT结果显示Ad.IL-24明显抑制了U251细胞的增殖,且流式细胞仪细胞周期检测发现Ad.IL-24处理组较对照组G2/M期明显延长,蛋白质印迹结果显示过表达IL-24的U251细胞中NGF及TrkA表达降低.结论:IL-24可能通过减少细胞中TrkA和NGF的表达来抑制肿瘤细胞的增殖.     

高浓度酒精摄入对大鼠学习记忆及海马炎症因子表达的影响

目的:研究高浓度酒精摄入对大鼠学习记忆能力及海马内炎症因子表达的影响。方法:将20只雄性SD大鼠随机分为酒精组和对照组。酒精组大鼠给予酒精灌胃(50%,8 ml/kg,1次/d,28 d);对照组大鼠给予生理盐水灌胃。利用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,尼氏染色显示海马结构,免疫组化及免疫印迹检测海马内TNF-α和IL-6的表达。结果:酒精组大鼠学习记忆能力、海马尼氏染色强度均显著低于对照组;而海马TNF-α和IL-6的表达则强于对照组,且阳性细胞为多突起小细胞。结论:高浓度酒精可能通过增强海马内炎症因子表达而影响其功能、导致大鼠空间学习记忆能力下降。     

二甲双胍抑制赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1介导的卵巢癌细胞增殖和迁移

目的: 探讨二甲双胍抑制卵巢癌细胞增殖和迁移的可能分子机制。方法: 用不同浓度二甲双胍(0、5、10和20 mmol/L)处理卵巢癌HO8910和SKOV3细胞,EdU和迁移实验检测细胞增殖和迁移能力;免疫印迹和qRT-PCR检测细胞内赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(lysine specific demethylase 1,LSD1)蛋白及mRNA表达水平;免疫印迹检测PI3K/AKT信号通路蛋白表达水平。建立诱导型稳定敲低LSD1的卵巢癌HO8910和SKOV3细胞株,经10 mmol/L二甲双胍处理,通过EdU和迁移实验检测各组细胞增殖和迁移能力。结果： 与对照组相比,不同浓度二甲双胍处理组细胞增殖和迁移能力明显降低(P均＜0.01),LSD1蛋白表达水平明显降低,LSD1特异性底物H3K4me2蛋白表达水平明显升高(P均＜0.01);PI3K/AKT信号通路蛋白PI3K和p AKT表达水平明显降低(P均＜0.01)。二甲双胍处理和敲低LSD1后,细胞增殖和迁移能力均显著降低（P<0.05)。结论： 二甲双胍可能通过抑制PI3K/AKT通路下调LSD1蛋白表达,从而抑制卵巢癌细胞增殖与迁移。     

一氧化氮抑制胃癌细胞系SGC-7901增殖及C-FOS和C-JUN表达

目的 探讨一氧化氮（nitric oxide, NO）对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响及其机制。方法 MTT法测定细胞的生长，RT-PCR和Western印迹法检测C-FOS 和C-JUN的mRNA和蛋白表达。结果 SNP抑制SGC-7901细胞的生长(P < 0.05)，并呈剂量和时间性降低C-FOS 和C-JUN mRNA及蛋白表达。结论 NO可能通过下调C-FOS 和C-JUN的表达而抑制胃癌细胞的增殖。     

miR-136对胶质瘤U251细胞生物学功能的影响

目的: 初步探讨miR 136对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法: 选取胶质瘤U251细胞系,分别转染miR 136 mimic(模拟物组)和miR 136模拟物阴性对照(对照组),采用qRT PCR法检测转染效率,观察2组细胞miR 136表达差异;显微镜下观察转染24 h后细胞密度,并拍照记录;CCK 8法检测转染后细胞增殖活性;Transwell和划痕实验分别检测转染后细胞侵袭及迁移能力;检索miRnada生物信息学数据库,预测并分析miR 136下游靶基因;qRT PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中FZD4 mRNA和FZD4蛋白的表达。结果： 与对照组相比,模拟物组细胞miR 136表达水平明显升高(P<0.05);转染24 h之后,模拟物组细胞密度低于对照组;CCK 8检测显示模拟物组细胞增殖活性较对照组明显降低(P<0.05);Transwell和划痕实验显示模拟物组细胞侵袭和迁移能力较对照组降低;miRnada数据库分析显示FZD4是miR 136的下游靶基因;与对照组相比,模拟物组FZD4 mRNA和FZD4蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05)。 结论： miR 136可能通过靶向调控FZD4基因的表达抑制胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和转移。     

医学遗传学教学中学生学习动机激发初探

现从实施启发式教学、激发学习成就感、妥善组织学习竞赛、运用多媒体课件等方面进行阐述,并结合教学实践经验探索激发学生学习动机的有效途径.     

NO对胃癌细胞系AGS增殖的影响

背景与目的:一氧化氮(nitric oxide,NO)参与机体内的多种生理和病理反应,它作为重要的生物介质在肿瘤发生、发展和死亡中的作用已成为肿瘤研究的热点.本实验通过研究NO供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对胃癌细胞系AGS的作用,探讨NO对胃癌细胞生长增殖的影响.方法:应用MTT法评价SNP对细胞生长的抑制,流式细胞术检测细胞周期的变化,RT-PCR检测增殖细胞核抗原(PCNA)和caspase-3的mBNA基因表达,Western biot检测PCNA和caspase-3蛋自的表达.结果:SNP可剂量依赖性地抑制AGS细胞的生长,100、500、1 000、1 500、2 000 μmol/L SNP处理24 h,细胞生长抑制率分别为(2.02±2.96)%、(10.82±2.21)%、(18.95±3.35)%、(26.88 ±2.54)%、(42.57±1.27)%;SNP可以使细胞周期发生变化,与对照组比较100、500、1 000、1 500、2 000 μmol/LSNP处理24 h,S期细胞分别减少2.29%、7.8%、11.34%、20.49%、23.6%.G_0/G_1期细胞分别增加3.33%、9.3%、13.46%、21.37%、24.73%(P<0.05):随着SNP剂量增加和作用时间延长,PCNA mRNA和蛋白表达逐渐降低;caspase-3 mRNA表达无改变,但caspase-3酶原被裂解活化.结论:NO能抑制AGS细胞的生长和增殖,诱导细胞的凋亡,其作用呈显著的浓度依赖性.