石蜡包埋涎腺肿瘤组织中人乳头瘤病毒的分型检测

目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)16型、18型与涎腺肿瘤病因学之间的关系.方法 采用型特异性引物PCR法对44例涎腺肿瘤组织标本中31例HPV检测阳性的组织DNA进行HPV分型检测.结果 检出HPV16 E7阳性率为13.64%,HPV18 E7阳性率为47.72%;涎腺肿瘤组织中HPV18 E7阳性率明显高于HPV16 E7阳性率;恶性肿瘤组中HPV16 E7、HPV18 E7阳性率显著高于良性肿瘤组(P<0.05).结论 HPV 16型、18型E7基因可能在恶性肿瘤的发生中起作用,其中HPV18感染与涎腺肿瘤的发生可能更密切.     

GRP78在全长丙肝病毒RNA转染细胞中表达的研究

目的 用蛋白质组学的方法研究全长丙肝病毒RNA转染细胞的差异表达蛋白,观察差异表达蛋白GRP78的表达变化。方法 提取全长丙肝病毒RNA转染Huh-7细胞和未转染Huh-7细胞总蛋白,进行双向凝胶电泳和MALDI-TOF质谱分析,鉴定差异表达蛋白。应用RTQ-PCR检测GRP78的相对表达量。结果 经双向凝胶电泳和质谱鉴定,共发现54个差异表达蛋白,其中包括GRP78蛋白。RTQ-PCR检测结果显示,在转染初期GRP78基因转录显著上调,转染24 h的相对表达率是未转染细胞的2.104倍,后随时间推移逐步下调。结论 建立了重复性较好、分辨率较高的全长丙肝病毒RNA转染细胞2D图谱。GRP78蛋白的显著差异表达提示GRP78蛋白在丙肝的发生和发展中起一定的作用。     

细胞角蛋白8真核表达载体的构建、表达及生物信息学分析

目的:构建人细胞角蛋白8(CK8)全长CDS序列真核表达载体,并转染人肝癌细胞SMMC7721,为研究CK8的生物学功能提供细胞模型。方法:RT-PCR扩增CK8全长CDS,克隆入pMD18-Tsimplevector质粒,鉴定正确后,亚克隆入质粒pEGFP-C1,构建真核表达载体pEGFP-CK8。脂质体介导转染SMMC7721细胞,荧光显微镜、realtimePCR和Westernblot检测CK8的表达。生物信息学软件分析CK8理化特性、信号肽及功能位点等。结果:PCR、酶切和测序结果均证实重组质粒含有人CK8全长CDS序列,转染实验表明CK8在SMMC7721细胞中发生了高表达。结论:成功地构建了人CK8全长CDS真核表达载体,并使其在SMMC7721细胞中获得高表达,为研究CK8的生物学功能奠定了实验基础。     

左氧氟沙星对金黄葡萄球菌小RNA表达的影响

目的研究左氧氟沙星对金黄葡萄球菌小RNA表达的影响及对细菌生长的作用。方法分别在不同抑菌浓度左氧氟沙星干扰情况下,培养金黄葡萄球菌实验株RN6390和RN1HG001,提取RNA,用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同菌株中RNAⅢ、RsaA、RsaE、RsaG、RsaH的含量,比较不同抑菌浓度左氧氟沙星作用下小RNA的表达差异。结果在MH培养液和BH培养液中左氧氟沙星对RN6390和RN1HG001的MIC均为0.25μg/ml。5种小RNA中,RNAⅢ的表达量最多,RsaG最少;当左氧氟沙星浓度≥1/4MIC时,开始对金黄葡萄球菌的生长产生明显抑制作用,5种小RNA的表达均开始下降;在RN6390菌株,1/16 MIC和1/8 MIC的左氧氟沙星能促进RsaH表达。结论不同浓度左氧氟沙星对金黄葡萄球菌小RNA表达具有抑制或者促进作用,提示除了其本身具有的阻碍细菌DNA合成的功能外还可能影响细菌基因的转录。     

结核分枝杆菌异烟肼耐药基因katG的检测

目的探讨结核分枝杆菌异烟肼(INH)耐药的分子机制,建立快速检测结核分枝杆菌INH耐药性的方法。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测105株结核分枝杆菌临床分离株的katG基因,运用DNA测序和生物信息分析比对进行验证。结果以H37Rv标准株为对照,34株敏感株中5株(14.7%)存在KatG基因异常,105株耐药株中55株(52.4%)存在KatG基因异常。结论结核分枝杆菌对INH耐药与KatG基因突变有关,PCR-RFLP技术可快速、准确地检测结核分枝杆菌对INH的耐药性。     

面向21世纪,搞好医学分子遗传学课程建设

21世纪是生物生命世纪 ,生物生命科学将在整个世纪发挥巨大作用。在这一新世纪中 ,培养高级人才是迎接新世纪挑战的重要任务。显然 ,培养 2 1世纪高级医学人才的重任 ,责无旁贷的落到医学研究生的培养和教育上。众所周知 ,课程设置是教学活动中最具有实质性的因素 ,设置高质量的先进课程 ,是搞好研究生教学的基础和根本。很难想象 ,一般化的课程能培养出一流的优秀人才。1 .设置医学分子遗传学是时代的要求当代生物医学学科的发展方向 :一是在横向上相互渗透、交叉和融合 ,产生新学科 ;二是在纵向上朝分子水平发展 ;三是在应用上从认识、利…     

二氢叶酸还原酶和谷氨酰胺合成酶双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响

目的 研究二氢叶酸还原酶（DHFR，D）与谷氨酰胺合成酶（GC，G）单基因和二氢叶酸还原酶与谷氨酰胺合成酶（DHFR GS，DG）双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响。方法 选择N端部分TPO基因（T184）作为靶基因，以DHFR和GS基因作为筛选及扩增基因构建重组质粒pDCT184与pGCT184，将两种质粒分别转染CHOdhfr^-细胞形成单基因筛选扩增系统，两种质粒共转染CHOdhfr^-细胞形成双基因筛选扩增系统，在双基因筛选扩增系统中设计三种药物加压方式，第一种为DG方式；先用DHFR系统压力（MTX）筛选，再用GS系统压力（MSX）筛选；第二种为GD方式；先用GS系统压力筛选（MSX），再用DHFR系统压力筛选（MTX）；第三种为共加压方式；同时利用DHFR与GS系统压力筛选（MTX MSX）。通过比较T184基因拷贝数及表达水平来研究DHFR和GS双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响。结果 T184基因拷贝数及表达水平在DG双基因选择方式没有明显差异。结论 采用DHFR GS双基因筛选扩增系统共加压方式是提高CHOdhfr^-细胞表达外源基因的有效途径。     

地高辛标记探针在单纯疱疹病毒检测及分型中的应用

利用地高辛配基制备单纯疱疹病毒型特异性ＤＮＡ片段探针，对４４株单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）临床分离株作了分型鉴定。结果显示２５株为ＨＳＶ－１，１９株为ＨＳＶ－２。比较研究发现，地高辛标记与同位素３２Ｐ中标记探针检测符合率为１００％，地高辛标记探针在灵敏性、特异性方面与同位素探针相同，对ＨＳＶ的分型率均达１００％。由于地高辛标记探针无放射性污染，能长期贮存及多次使用，适合在基层医院推广应用。     

反复自发性流产与抗心磷脂抗体和抗精子抗体之间的关系研究

目的 :探讨妊娠早期 (妊娠 5～ 11周 )反复自发性流产 (RSA )与抗心磷脂抗体 (ACA )和抗精子抗体(ASA)之间的关系。方法 :用ELISA法检测 3 3 8例反复自发性流产患者 (研究组 )血清ACA IgM和ACA IgG以及ASA IgM和ASA IgG。选择 69例无流产史并已分娩的妇女作为对照组。结果 :研究组ACA IgM和ASA IgM阳性检出率与对照组相比 ,差异有非常显著意义 (P <0 0 1) ;ACA IgG和ASA IgG阳性检出率与对照组相比 ,差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ;研究组ACA IgM或ACA IgG的阳性检出率以及ASA IgM或ASA IgG阳性检出率与对照组相比差异有极其显著意义 (P <0 0 0 1)。结论 :妊娠早期反复自发性流产与抗心磷脂抗体和抗精子抗体之间有密切关系     

乳腺癌组织中HPV16E6和E7的检测

目的 检测乳腺癌组织中人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16 E6和E7基因.方法 采用聚合酶链反应法(PCR)检测40例乳腺癌和20例正常乳腺组织中HPV16E6和E7.结果 40例乳腺癌中HPV16 E6和E7基因的检出率分别为60%(24/40)和55%(22/40),20例正常乳腺组织中HPV16 E6和E7检出率分剐为5 %(1/20)和5%(1/20),两者均存在显著性差异(P＜0.05).乳腺癌中HPV16E6和E7基因的检出率在患者不同年龄、肿块大小、雌孕激素受体水平和淋巴结转移中均无显著性差异(P＞0.05).结论 E6和E7基因共存于HPV16感染的乳腺癌中,HPV16可能是乳腺癌发病的病因学因素之一.