结核分枝杆菌链霉素耐药基因rpsL的检测

目的探讨结核分枝杆菌(TB)对链霉素(Sm)耐药的分子机制,建立快速检测结核分枝杆菌Sm耐药性的方法。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测80株结核分枝杆菌临床分离株的rpsL基因。结果以H37Rv标准株为对照,21株敏感株中,1株(4.76%) SSCP和RFLP分析存在rpsL基因异常;59株耐药株中,36株(61.02%)SSCP和RFLP分析存在rpsL基因异常。结论结核分枝杆菌对Sm耐药与rpsL基因突变有关,PCR-SSCP和PCR-RFLP技术可快速、准确地检测结核分枝杆菌对Sm的耐药性。     

耐多药结核分支杆菌基因突变在老年结核病病人耐药性检测中的应用

目的探讨耐多药结核病(MDR-TB)临床分离株rPOB、KatG和rpsL基因突变在结核病耐药性检测中的应用价值。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术分析了同时耐异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)的多耐药临床分离株和35株药物敏感株的rPOB、KatG、rpsL基因突变。结果以结核分支杆菌H37RV为对照,35株药物敏感株的rPOB、rpsL基因SSCP图谱正常,其特异性为100%;KatG基因有2株图谱异常,特异性为94.3%。71株结核分支杆菌临床分离株均未发现rPOB、KatG、rpsL基因缺失,其PCR扩增产物SSCP分析结果表明36株多耐药临床分离株中,32株rPOB基因图谱异常;21株KatG基因图谱异常;26株rpsL基因图谱异常。其敏感性分别为rPOB(88.9%)、KatG(58.3%),rpsL(72.2%)。结论结核分支杆菌耐RFP、INH、SM耐药性的产生主要是由于rPOB、KatG和rpsL基因突变所致。PCR-SSCP技术有望成为结核分支杆菌耐药性检测的方法之一。     

聚合酶链反应—单链构象多态性技术检测耐多药结核分支杆菌rpoB、KatG、rpsL突变的研究

应用PCR-SSCP技术快速检测耐INH,RFP,SM结核分支杆菌分离株rpoB、KatG、rpsL基因突变,评价其在检测结核分支杆菌耐药性方面的价值。方法 32侏耐INH、RFP、SM结核分支杆菌临床分离株及25侏结核分支杆菌敏感分离株用PCR-SSCP方法分别检测,rpoB、KatG、rpsL基因突变。结果 32株耐多药结核分支杆菌分离株中,rpoB、KatG、rpsL PCR扩增产物PCR-SSCP分别有28株（87.5%)rpoB基因,19株（59.3%)KatG基因和23株（71.9%)rpsL基因电泳条带与结核分支杆菌标准株H37Rv电泳条带相比有明显差异,而25株结核分支杆菌敏感株的PCR-SSCP条带与结核分支杆菌H37Rv相似,特异性为100%。结论 PCR-SSCP方法敏感、特异,可快速检测结核分支杆菌rpoB、KatG、rpsL耐药基因突变,有利于耐多药结核分支杆菌耐药性的快速检测。     

高分辨率熔解曲线技术用于结核分枝杆菌临床分离株异烟肼耐药性的快速检测

目的评价高分辨率熔解曲线分析技术(high-resolution melting curve,HRM)检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的应用价值。方法 1)通过传统比例法药敏实验对本实验室保存的49株结核分枝杆菌进行异烟肼耐药性分析。2)进一步对该结核分枝杆菌进行异烟肼耐药相关基因KatG基因和inhA基因进行异烟肼耐药决定区测序分析,筛查突变位点。3)根据筛查到的突变位点设计高分辨率熔解曲线分析所用的特异性引物,对异烟肼耐药基因耐药决定区进行高分辨率熔解曲线分析检测DNA突变,评估用高分辨率熔解曲线分析技术对结核分枝杆菌异烟肼耐药性检测的效率。结果 1)比例法药敏结果显示,49株实验菌株中20株为异烟肼耐药株,29株为异烟肼敏感株。2)测序分析结果显示:(1)KatG基因出现了4种突变形式,分别是234单位点突变;234、315双位点突变;234、463双位点突变;234、315、463三位点联合突变。(2)inhA基因检测到3种突变,即-8位、-15位、-152位。3)(1)对耐药株的基因突变进行分析发现:20株异烟肼耐药株中11株存在KatG基因第315位密码子的突变、占异烟肼耐药株的55%;6株存在inhA基因-15(4株)位碱基、-8(1株)位碱基、-152(1株)位碱基的突变,共占异烟肼耐药株的30%;2株同时存在基因KatG315密码子和inhA-15位碱基的突变,占异烟肼耐药株的10%;1株均未检测到KatG基因和inhA基因的突变,占异烟肼耐药株的5%。通过基因突变检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的敏感性为95%、特异性为100%。(2)用高分辨率溶解曲线检测实验菌株耐药基因突变的结果显示,18株存在基因突变,24株不存在基因突变,检测的灵敏度为94.7%、特异性为80%。(3)以高分辨率熔解曲线检测到突变为耐药的判断标准,检出19株为耐药株,24株为敏感株。以比例法药敏结果为参照,检测的灵敏度为95%、特异性为82.76%。结论高分辨率溶解曲线用于结核分枝杆菌对异烟肼耐药性的检测具有较好的灵敏度,耗时短,在异烟肼耐药结核病的快速诊断方面具有一定的应用价值。     

聚合酶链反应-单链构象多态性技术检测耐多药结核分支杆菌rpoB、KatG、rpsL突变的研究

目的　应用PCRSSCP技术快速检测耐INH,RFP,SM结核分支杆菌分离株KatG、rpoB、rpsL基因突变,评价其在检测结核分支杆菌耐药性方面的价值。方法 32株耐INH、RFP、SM结核分支杆菌临床分离株及25株结核分支杆菌敏感分离株用PCRSSCP方法分别检测,rpoB、KatG、rpsL基因突变。结果 32株耐多药结核分支杆菌分离株中,rpoB、KatG、rpsL PCR扩增产物PCR-SSCP分别有28株(87.5%)rpoB基因,19株(59.3%)KatG基因和23株(71.9%)rpsL基因电泳条带与结核分支杆菌标准株H₃₇Rv电泳条带相比有明显差异,而25株结核分支杆菌敏感株的PCR-SSCP条带与结核分支杆菌H₃₇Rv相似,特异性为100%。结论 PCR-SSCP方法敏感、特异,可快速检测结核分支杆菌rpoB、KatG、rpsL耐药基因突变,有利于耐多药结核分支杆菌耐药性的快速检测。     

MTBDRplus技术快速检测结核分枝杆菌耐多药的临床应用评价

目的 评价线性探针杂交技术(简称MTBDRplus技术)对福州地区耐药结核杆菌的检测效果,并了解该地区耐药结核分枝杆菌的耐药基因特征方法 选取246株临床结核分枝杆菌分离株,以传统罗氏药敏试验为金标准,评价MTBDRplus技术在临床上应用的检测效果,分析耐药基因突变分布频率结果 与传统罗氏药敏试验相比较,MTBDRplus检测利福平(RIF)和异烟肼(INH)耐药性灵敏度分别为91.7%(11/12)和83.3%(15/18),MTBDRplus检测RIF和INH耐药性特异度分别为99.6%(233/234)和95.2%(217/228)。12例rpoB基因存在突变的结核分枝杆菌中,58.3%rpoB基因S531L突变;26例katG和inhA基因存在突变的结核分枝杆菌中,57.7%(15/26)katG基因315突变;存在C15T位点突变的菌株仅9.1%(1/11)为INH耐药菌株结论 MTBDRplus技术是一个敏感、特异的快速诊断耐多药结核病的有效方法,该技术在福州地区具有较好的应用前景。福州市耐药结核分枝杆菌以rpoB S531L和katG S315T突变型为主。建议谨慎判断结核分枝杆菌inhA基因C15T位点突变引起的INH耐药。     

结核分枝杆菌临床分离株耐药性与耐药基因突变关系的研究

目的分析临床分离结核分枝杆菌耐药性与耐药基因突变的关系。方法用绝对浓度法和基因测序技术检测临床分离的22株结核分枝杆菌对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、卡那霉素(KM)、氧氟沙星(OFLX)、对氨基水杨酸(PAS)耐药性和相应耐药基因kat G、rpo B、rpsl、rrs、gyr A、thy A的突变。结果 22株结核分枝杆菌中耐药菌株占45.5%。INH耐药率为18.2%,RFP耐药率为27.3%,SM耐药率9.1%,KM耐药率为18.2%,OFLX的耐药率为13.6%,PAS耐药率为4.5%。敏感菌株中均未检测到耐药基因突变。耐药菌株中除2株外均检测到相应耐药基因突变。结论结核分枝杆菌对抗结核药物耐药性与相关耐药基因突变密切相关。     

KatG基因点突变与结核分枝杆菌异烟肼耐药相关性研究

目的　探讨过氧化氢酶编码基因 (KatG)基因点突变和结核分枝杆菌异烟肼 (INH)耐药性之间的关系 ,筛选相关位点用于筛查临床INH耐药株基因型。方法　采用三步法聚合酶链反应(PCR)对临床耐异烟肼菌株中发现的 6个位点进行定点诱变 ,用含诱变基因的 pET2 4b质粒转化大肠埃希菌BL2 1菌株 ,在异丙基硫代 β D半乳糖苷 (IPTG)诱导下表达 ,使用镍亲和柱和Q 琼脂糖快速流动凝胶纯化各KatG诱变蛋白并测定其过氧化氢酶和过氧化物酶活性。结果　完成KatG基因 6个位点的诱变及相应诱变蛋白的表达和纯化 ,过氧化氢酶、过氧化物酶活性测定发现 ,3个诱变蛋白[KatG(W32 1G)、KatG(R4 18Q)和KatG(A4 5 6S) ]基本失活 ,其余 3个诱变蛋白的活性亦有不同程度下降。结论　所引入的 6个突变均可造成KatG蛋白过氧化氢 过氧化物酶活性下降 ,与结核分枝杆菌INH耐药有关 ,可用于筛查临床INH耐药株基因型     

利用荧光偏振技术检测耐异烟肼结核分枝杆菌KatG 315点突变

目的 应用模板指导的荧光染料终止物掺入反应-荧光偏振检测技术(templatedirected dye-terminator incorporation with fluorescence polarization detection，TDI-FP)分析结核分枝杆菌KatG 315点突变与异烟肼耐药性的关系，并建立一种准确、快速的诊断结核分枝杆菌异烟肼耐药性的新方法。方法 对临床82例耐多药结核病患者所感染的结核分枝杆菌菌株进行常规培养和药敏实验；提取结核分枝杆菌DNA，并经聚合酶链反应(PCR)扩增271bp的KatG基因片段，PCR产物经消化处理清除残余dNTPs和引物，进行TDI反应，应用Victor2测定荧光偏振值，分析所有样品的KatG基因315位点的基因型。结果 29例异烟肼高度耐药患者的结核分枝杆菌中有15例发生KatG 315的G→C突变，其中4例为KatG 315突变和未突变的混合感染，突变率为52％；32例异烟肼低度耐药患者的结核分枝杆菌中有15例为KatG 315突变和未突变的混合感染，突变率为47％；21例异烟肼敏感患者的结核分枝杆菌未发现KatG 315突变。结论 KatG 315突变与结核分枝杆菌对异烟肼产生耐药性密切相关；应用TDI-FP技术检测KatG 315突变具有准确、快速、简便以及高通量等优点，在结核分枝杆菌耐异烟肼的临床诊断中有着广阔的应用前景。     

多重聚合酶链反应-单链构象多态性分析检测耐异烟肼结核分枝杆菌

目的　建立耐异烟肼 (isoniazid ,INH )结核分枝杆菌多重聚合酶链反应 单链构象多态性分析 (multiple polymerasechainreaction singlestrandconformationpolymorphism ,multi PCR SSCP)方法 ,快速、特异地同时检出aphC启动子、inhA、katG基因的突变情况 ,用于快速诊断结核分枝杆菌对INH的耐药性。方法　根据结核分枝杆菌的aphC启动子序列、inhA序列、katG序列 ,分别设计出 3对特异性寡聚核苷酸引物 ,采用multi PCR及SSCP技术 ,同时检测对结核分枝杆菌耐INH起作用的这 3个基因的突变情况。结果　对H3 7Rv标准株、临床分离INH敏感株 (2 3株 )及INH耐药株 (3 5株 )分别采用常规PCR和multi PCR同时进行扩增 ,两种扩增方法均能扩增出预期的目的片段 ,且结果符合率达10 0 % ;采用单基因PCR SSCP ,aphC启动子序列突变检出率 17% (6/3 5)、inhA序列突变检出率 2 0 % (7/3 5)、katG序列突变检出率 66% (2 3 /3 5) ;multi PCR SSCP突变检出率 83 % (2 9/3 5)。结论　耐药基因检测指导治疗是一种新探索 ,multi PCR SSCP方法敏感、特异 ,能同时快速有效地检测结核分枝杆菌aphC启动子、inhA、katG 3个INH耐药基因的突变 ,提高检验效率 ,有望成为临床指导用药的好方法。     

Use of fluorescence resonance energy transfer for rapid detection of isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis clinical isolates.

SETTING: Rapid detection of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis is important to select effective treatment and prevent transmission of resistant isolates. OBJECTIVE: To evaluate the use of fluorescence resonance energy transfer (FRET) for rapid detection of isoniazid (INH) resistance in M. tuberculosis clinical isolates. DESIGN: One hundred INH-resistant and 50 INH-susceptible isolates of M. tuberculosis were included in the study. The drug susceptibility of all isolates was determined by the standard agar proportion method, and all isolates were then tested by FRET. Three genes associated with INH resistance, katG, inhA and ahpC, were analysed. All isolates were amplified with three pairs of primers. Three pairs of fluorescently labelled DNA probes specific to codon 315 of katG, nucleotide 209 in the regulatory region of inhA and a frequent mutation site in the intergenic region of oxyR-ahpC, were used for mutation detection. RESULTS: The results obtained using FRET were compared with those from the proportion method. The sensitivity and specificity of FRET were respectively 76% and 100%. The frequencies of mutations were 48% in katG, 17% in inhA, 8% in ahpC, 2% in inhA-ahpC and 1% in inhA-katG. CONCLUSION: FRET is a rapid, specific method that can be useful to detect INH resistance in M. tuberculosis clinical isolates.     

结核分支杆菌耐异烟肼分子机制的研究

目的了解结核分支杆菌耐异烟肼（ＩＮH）分离株ＫａtG基因完全缺失或突变的情况，探讨其在ＩＮＨ耐药性中的可能作用。方法应用ＰＣＲ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对５８株结核分支杆菌临床分离株的ＫａｔＧ基因进行分析。结果以Ｈ３７，ＲＶ标准株为对照，１２株敏感株的ＫａｔＧ基因扩增产物，１１株SSCP泳动正常，1株（８．３％）异常；２４株耐ＩＮＨ株中，３株（ｌ．５％）PCR扩增阴性，ＺＩ株ＫａtG扩增阳性，其中１６株（７６．２％）SSCP泳动异常；２２株耐其它抗结核药物株中，也有７株（３１．８％）SSCP异常。结论某些结核分支杆菌ＩＮＨ耐药性产生可能是由于其ＫａｔＧ基因完全缺失或ＫａｔＧ基因突变所致，但某些菌株也可能与ＫａｔＧ基因无关，是其它耐药基因所致或存在多种机制，尚需进一步探讨。     

31株结核分枝杆菌异烟肼耐药相关基因检测及序列分析

目的了解贵阳地区分离的结核分枝杆菌katG基因、inhA启动子和oxyR-aphc间隔区基因突变特征。方法对31株结核分枝杆菌临床分离株（异烟肼耐药株17株,异烟肼敏感株14株）的katG基因、inhA启动子和oxyRaphc间隔区进行DNA片段的PCR扩增,并进行测序分析。结果 17株异烟肼耐药菌株中有16株检出katG基因突变,其中70.5%（12/17）为315位密码子变异,且变异类型均为AGC→ACC,敏感株未发现315位点突变。11株敏感菌和4株耐药菌在463位密码子发生变异,变异类型均为CGG→TGG,变异率分别为78.6%（11/14）和23.5%（4/17）,差异无统计学意义。有12株耐药株的变异类型为katG基因双重位点突变,其中10株为katG315（AGC→ACC）和463（CGG→TGG）位变异,463（CGG→TGG）和299（GGC→AGC）变异及463（CGG→TGG）和419（GAC→CAC）位变异各1株。2株异烟肼耐药菌检出oxyR-aphC启动区G32A突变,其中1株为联合katG463和299位突变。结论贵阳株结核杆菌菌株异烟肼耐药基因突变具有多态性,主要的变异类型为katG315位点突变。     

Prevalence of S315T mutation within the katG gene in isoniazid-resistant clinical Mycobacterium tuberculosis isolates from Dubai and Beirut.

OBJECTIVE: To determine the prevalence of S315T mutation within the katG gene that confers clinically significant resistance to isoniazid in isoniazid-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates recovered from tuberculosis patients in Dubai and Beirut. METHOD: A total of 28 and 17 isoniazid-resistant and seven and six susceptible clinical M. tuberculosis isolates from Dubai and Beirut, respectively, were tested. The presence of S315T mutation in the katG gene was detected by amplification of the DNA region around codon 315 by polymerase chain reaction followed by restriction digestion with Msp I to generate restriction fragment length polymorphism. The genotyping of the isolates carrying S315T mutation was carried out by touchdown double-repetitive-element PCR (DRE-PCR). RESULTS: The mutation S315T was detected in 18 (64%) of 28 isoniazid-resistant isolates from Dubai and in six (35%) of 17 resistant strains from Beirut. None of the susceptible strains contained this mutation. The genotyping studies showed that the majority of the isolates carrying the S315T mutation exhibited unique DNA banding patterns. CONCLUSION: The data show a varying prevalence of S315T mutation within the katG gene in M. tuberculosis strains isolated from the two geographical locations, Dubai and Beirut.     

结核分支杆菌五种耐药基因检测的临床应用及评价

目的　检测结核分支杆菌rpoBkatG、rpsL、pncA和embB耐药基因 ,评价其临床应用价值。方法　采用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)分析和药敏试验 (比例法 ) ,了解 10 9例肺结核患者结核分支杆菌耐药情况 ,并分析、比较临床治疗效果。结果　 1/ 2以上的肺结核患者至少耐两种抗结核药物 ,对RFP、INH、SM、PZA和EB总耐药率分别为 80 7%、71 5 %、78 8%、5 7 7%和48 6%。rpoB、katG、rpsL、pncA和embB基因突变率分别为 76%、68%、71%、5 1%和 3 0 %。结核分支杆菌耐药基因突变率与耐药水平联系密切 ,多数结核分支杆菌耐药基因突变易发生在高耐药株 ,也有少数基因突变发生在低耐药株。根据药敏试验和耐药基因检测结果 ,6个月耐多药结核治愈率分别达到 5 4 8%和 62 8% ,治疗效果满意 ,两种方法差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　耐药基因检测指导治疗是一种新探索 ,PCR SSCP方法敏感、特异 ,可以快速检测结核分支杆菌rpoB、katG、rpsL、pncA和embB耐药基因突变 ,可能会成为临床指导用药的好方法     

六安地区结核分枝杆菌耐药基因katG 和rpoB 的突变特征

目的 分析临床分离的结核分枝杆菌katG 和rpoB 基因的突变情况与耐药之间的关系,了解六安地区耐药结核分枝杆菌的基因突变特征。方法 采用比例法对六安地区65 株结核分枝杆菌临床分离株进行药敏试验;通过特异性引物,对目的基因片段katG 和rpoB 进行扩增、测序后进行分析。结果 60 株结核分枝杆菌中分别有有9 株耐异烟肼和14 株耐利福平,其中同时耐异烟肼和利福平的6株。9 株耐异烟肼菌株中,4 株katG 在315（Ａ GC→ACC 或ACA）位点发生突变,占44.4％;14 株耐利福平菌株中,11 株rpoB 分别在516（GAC→GTC）、526(CAC→CGC 或TAC)和531(TCG→TTG)位点发生突变,占总耐药菌株的78.6％;6 株同时对利福平和异烟肼耐药,其中5 株katG 或rpoB 基因发生突变,占83.3％。结论 六安地区结核分枝杆菌耐异烟肼和耐利福平分别主要是由katG 和rpoB 基因突变引起,其中耐异烟肼主要在315（AGC→ACC 或ACA）位,而耐利福平在516（GAC→GTC）、526(CAC→CGC或TAC)和531(TCG→TTG)位,都发生了突变。     

耐多药结核分枝杆菌基因突变分析

目的对临床分离的耐多药结核分枝杆菌株进行基因突变分析。方法对耐多药结核分枝杆菌临床分离菌株进行耐药基因的PCR检测,利用基因序列测定方法分析耐药基因突变情况。结果从耐多药结核病（MDR-TB）患者临床分离菌株中快速检测到rpoB、katG、rpsL、embB基因及其突变。耐多药菌株、全耐及单耐利福平分离菌株均检测rpoB基因点突变,突变位点主要为第516、526和531常见密码子,1例MDR-TB出现第479位和第531位密码子同时突变。耐多药菌、全耐菌及单耐异烟肼的菌株均检测有katG基因点突变,突变位点均为第2066位碱基C突变为Go全耐菌和对乙胺丁醇（EMB）耐药的耐多药菌株均检测有embB基因点突变,突变位点均为第306位密码子ATG突变为ACG。全耐菌和对链霉素（SM）耐药的MDR-TB菌株均检测有rpsL基因点突变,突变密码子为CCT突变为CTT,其中从1株对SM敏感的MDR-TB中也检测到突变。全敏感株、标准株及利福平（RIF）、异烟肼（INH）或EMB敏感的耐药株均无rpoB、katG或embB基因突变。结论PCR及基因序列测定可快速检测耐多药结核基因,结核分枝杆菌耐多药性与多个基因突变相关。     

基因芯片快速检测结核分枝杆菌katG基因突变及其与异烟肼耐药相关性

目的了解结核分枝杆菌katG基因S315突变与异烟肼（isoniazid,INH）耐药相关性,建立快速简便的katG基因S315突变基因芯片检测方法。方法采用二倍稀释法检测123株结核分枝杆菌临床分离菌株对INH的耐药性。PCR及测序确定上述结核分枝杆菌katG基因S315位点突变率及突变类型。根据PCR及测序结果,设计Cy3荧光标记探针并制备katG基因S315位点突变检测基因芯片。基因芯片检测结果与PCR及测序结果进行对比分析。结果 123株结核分枝杆菌临床菌株中,39.0%（48/123）菌株对INH敏感,61.0%（75/123）菌株对INH耐药。结核分枝杆菌H37Rv株及所有临床菌株均能扩增出katG基因片段。75株INH耐药菌株中,69.3%（52/75）菌株katG基因出现S315位突变,其中25株突变类型为S315N（AGC→AAC）、12株为S315T（AGC→ACC）、7株为S315I（AGC→ATC）、各有3株分别为S315T（AGC→CGC）和S315R（AGC→AGA）、2株为S315G（AGC→GGC）。所制备的基因芯片对123株结核分枝杆菌katG基因S315野生型或突变型检测结果与PCR及测序结果完全一致。结论结核分枝杆菌katG基因S315突变与INH耐药密切相关。本研究中制备的基因芯片可快速、简便、准确、敏感和特异地检测结核分枝杆菌katG基因S315突变及其类型。     

福建省结核分枝杆菌异烟肼耐药相关基因突变特征初步分析

目的 了解福建省结核分枝杆菌异烟肼耐药相关基因的突变特征,为异烟肼耐药快速检测方法的建立提供一定的科学依据。方法 对来源于福建省结核病耐药性监测30个监测点纳入的75株耐多药和10株全敏感结核分枝杆菌分离株,进行katG、inhA、oxyR-ahpC基因片段PCR扩增并测序分析,用RD105缺失基因检测法进行北京家族基因型鉴定,使用卡方检验分析相关性。结果 10株全敏感株未检测到突变。75株耐多药结核分枝杆菌检测到72株katG、inhA、oxyR-ahpC发生单一或联合基因突变,突变率为96.0%(72/75)。其中,65株(86.7%,65/75)发生katG突变,涉及5个位点,最常见位点突变的密码子是315,突变率为82.7 %(62/75),最常见突变形式为Ser315Thr(77.3%,58/75);8株(10.7%,8/75)发生inhA突变,突变形式均为C(-15)T;5株(6.7%,5/75)发生oxyR-ahpC突变,突变形式为C(-39)T或C(-46)A。katG、inhA和oxyR-ahpC 在北京家族基因型菌株和非北京家族基因型菌株中的突变率分别为83.9 %(47/56)、12.5%(7/56)、7.1 %(4/56)和94.7 %(18/19)、5.3 %(1/19)、5.3 %(1/19),差异无统计学意义(P值分别为0.23、0.38、0.78)。结论 福建省结核分枝杆菌异烟肼耐药性相关基因突变绝大多数发生在katG、inhA和oxyR-ahpC基因位点,且以katG突变为主。初步分析显示北京家族基因型菌株流行与异烟肼耐药基因突变特征无关。     

Genomic mutations in the katG, inhA and aphC genes are useful for the prediction of isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis isolates from Kwazulu Natal, South Africa.

Genotypic analysis of isoniazid (INH) resistance in 79 isolates of M. tuberculosis (MTB) was undertaken by PCR-single strand conformation polymorphism (SSCP), Msp1 restriction enzyme analysis and sequence analysis of specific regions of three genes (part of the coding sequence of katG, and promoter regions of the inhA operon and ahpC) in order to determine the particular allelic variants within these genes. The epidemiologic relatedness was determined using IS6110 and polymorphic G-C region (PGRS (MTB484(1)) based restriction fragment length polymorphism (RFLP). Mutations in katG, inhA locus and ahpC were identified in 77/79, 19/79 and 10/79 isolates respectively. The ability of PCR-SSCP to detect mutations associated with INH resistance in katG, inhA and ahpC genes was 100% (CI 91.2-99.7%), 98.7% (CI 74.0-99.9%), and 100% (CI 69.2-100%) respectively. Specificity was 100%. All isolates with mutations in the 209 bp fragment of the MTB katG gene containing the Ser315Thr codon were positive by PCR-RFLP using Msp1 enzyme restriction analysis. Sixteen of 19 isolates with alterations on the 3' end of the ribosome binding site upstream of mabA in inhA locus simultaneously harbored Ser315Thr mutations in KatG. In 9/10 isolates, mutations in the ahpC promoter region were located in the 105 bp oxyR-ahpC intergenic region. None of 17 INH drug susceptible isolates harbored mutations in any of the three genetic regions, although the katG1 allele (Arg 463 Leu) was present in one isolate. Characterization by IS6110/PGRS(MTB484(1))RFLP analysis revealed that a number of drug resistant clones are widespread in the community. We conclude that the frequency of the Ser315Thr katG mutation in the local strain population makes the PCR-RFLP MTB katG assay a reliable, rapid and useful method for detecting INH resistance.