人胎肝干细胞的体外培养及诱导分化

为体外分离培养和诱导分化人胎肝干细胞 ,从原代分离培养人胎肝干细胞集落 ,免疫细胞化学鉴定细胞集落分子标志物的表达 ;在体外特定细胞因子作用下诱导干细胞定向分化为成熟肝脏细胞 ,对其生物学特性进行初步鉴定。结果 ,从人胎肝组织中成功分离表达AFP、Albumin、Cytokeratin等标志物的胎肝干细胞集落 ,在体外特定细胞因子作用下肝干细胞可定向分化为成熟肝脏细胞。因此人胎肝中同样存在具有干细胞特性的原始细胞 ,体外可定向分化为成熟肝细胞。人胎肝干细胞的分离培养对于生物型人工肝的制备及其深入研究奠定了良好的基础     

微囊小肝细胞样前体细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭

目的探索大鼠海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊小肝细胞样前体细胞(SHPC)移植治疗急性肝衰竭(AHF)大鼠模型的可行性和有效性。方法选择体质量150~180 g健康雄性Wistar大鼠10只。采用Retrosine(30 mg/kg)腹腔内注射联合2/3肝切除诱导雄性Wistar大鼠SHPC增殖模型,改进Seglen胶原酶灌注联合Percoll密度梯度离心分离SHPC,倒置显微镜、电子显微镜下观察,并进行免疫组织化学染色;静电液滴法APA微囊包埋。选择体质量180~220 g健康雌性Wistar大鼠20只,随机分为A组(微囊化SHPC腹腔内移植)、B组(空囊对照组);采用D-氨基半乳糖腹腔注射制备大鼠AHF模型;观察模型一般状况及生存时间,术后不同时间点检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBiL)及血氨水平,检测肝脏病理改变。结果Retrosine腹腔内注射联合2/3肝切除成功建立SHPC增殖模型,分离获得细胞符合大鼠SHPC;APA微囊呈光滑规则球形,直径为(300±40)μm,强度、韧性良好,囊内细胞形态完整,存活率为(90.0±1.3)%。微囊SHPC移植后,A组较B组中位生存时间延长(119.00 h vs 70.33 h),差异有统计学意义(P<0.05);随时间延长,A组大鼠血清ALT、AST、TBiL及血氨水平明显下降,均低于移植前水平,各时间点A组明显低于B组,差异有统计学意义(P<0.05);肝组织病理显示A组肝细胞损伤较B组明显改善;存活48 h大鼠腹腔内微囊保持完整光滑球形,囊内SHPC形态完整,1周微囊有散在破损皱缩,囊内细胞有增多聚集趋势,细胞存活率85%以上。结论APA微囊化大鼠SHPC腹腔内移植能改善大鼠AHF模型生存时间、生物化学指标(ALT、TBiL等)及病理损伤。     

游离猪肝细胞的大量制备

因供肝缺乏,需人工肝的支持,以桥接肝移植。人工肝脏的研究已从非生物型发展到生物型。目前研制的生物型人工肝生物成分多用来源丰富、价格低廉的猪肝细胞。为适应生物型人工肝的临床应用,本研究参照和改良Ｎａｒｕｓｅ方法［２］,大量制备了高活率的游离猪肝细胞,报道如下。材料与方法１．材料①杂种猪,雌雄不限,体重１２～１５ｋｇ。②Ⅳ型胶原酶（Ｓｉｇｍａ产品）、ＭＥＭ、ＷＥＭ（Ｇｉｂｉｃｏ产品）。③氯胺酮、安定、肝素、生理盐水均为药用规格。④实验用水为三蒸水。２．试剂的制备（１）灌注液（ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｂｕ…     

胎儿骨髓源性胚胎后亚全能干细胞分离培养及向肝细胞的诱导分化

背景:目前研究认为在胚胎发育后的多种组织中存在一类干细胞群体,可分化为不同胚层的组织细胞;但又不同于胚胎干细胞,随着妊娠期间胚胎的发育胚胎干细胞会逐渐失去部分分化潜能,会出现一些特殊表型或分子标记,如CD105,称其为胚胎后亚全能干细胞.目的:根据胚胎后亚全能干细胞表达CD105的特性分离胎儿骨髓源性胚胎后亚全能干细胞,经体内外诱导使其分化为肝细胞样细胞并检测其功能.设计、时间及地点:动物随机分组,细胞分子生物学实验,于2003-03/2005-03在天津市第三中心医院卫生部人工细胞工程技术研究中心完成.材料:取22周龄左右胎儿股骨和胫骨骨髓分离出胚胎后亚全能干细胞.以雌性成年SCID鼠作为干细胞移植的受体.CD105免疫磁珠为德国Miltenyi Biotec产品.鼠抗人白蛋白抗体为美国Sigma产品.碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子为英国PEPROTECH产品.方法:利用密度梯度离心结合免疫磁珠方法分离胎儿骨髓CD105(+)胚胎后亚全能干细胞,体外培养,用含30 μg/L肝细胞生长因20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子的诱导培养基将其向肝细胞样细胞诱导分化.将24只SCID鼠随机分为干细胞治疗组和对照组,每组12只,均按800 mg/kg的剂量向腹腔内注射D-氨基半乳糖制备肝损伤模型.造模次日,干细胞移植组鼠在肝原位输注106左右CD105(+)细胞,对照组分别输注106左右的CD105(-)细胞或同等体积的培养液.主要观察指标:于干细胞移植后2,7d,1,3个月对肝脏组织行免疫组化检测人源白蛋白表达.结果:免疫磁珠筛选后的细胞免疫细胞化学检测CD105呈弱阳性表达:细胞在对数生长期的倍增时间为30 h左右:约传10代后进入衰退期.SCID鼠移植胚胎后亚全能干细胞3个月后在小鼠肝脏中可见有点状或小灶状的人白蛋白表达,对照组未见表达.结论:来源于胎儿骨髓的胚胎后亚全能干细胞可以在肝脏微环境下转化为肝细胞样细胞.     

小切口胆总管探查术后I期缝合的临床应用

目的 :探讨小切口胆总管切开取石后I期缝合的疗效及适应证。方法 :选择58例胆总管结石患者 ,常规经右上腹腹直肌开腹 ,切口长度6～8cm ,于十二指肠上方纵行切开胆总管 ,长度以结石大小而定 ,一般在2cm以内 ,胆总管切开取石后不放置T型管 ,以胆道镜探查胆道黏膜情况及结石 ,以取石钳及纤维胆道镜网篮取净结石 ,并确认远端通畅无残余结石及狭窄 ,应用5_0的可吸收胆肠吻合线I期缝合。结果 :所有病例均无胆瘘发生 ,术后平均住院时间为 (5 5±1 5)d ,具有住院时间短、痛苦小 ,并发症少、恢复快等优点。结论 :在严格掌握适应证前提下 ,胆总管切开取石后行I期缝合是可行的。     

磁共振胆胰管造影在梗阻性黄疸诊断和治疗中的作用

目的：探讨磁共振胆胰管造影(MRCP)对梗阻性黄疸患梗阻定位和定性的诊断价值及对治疗的指导意义。方法：对48例梗阻性黄疸的患进行MRCP检查，34例(70．8％)行手术治疗，14例(29．2％)行非手术治疗。结果：48例患中45例(93．8％)可通过MRCP明确诊断，并经手术或临床证实；2例(4．1％)硬化性胆管炎需结合其他临床资料做出诊断；1例(2．1％)胆总管结石误诊为胆管癌。结论：MRCP对胆道疾患诊断具有无创性、高灵敏度、高准确率等优点，能为梗阻性黄疸患临床治疗提供有效依据。     

肿瘤干细胞的研究现状

传统理论认为肿瘤生长是所有肿瘤细胞一起增殖的结果,因而治疗方法主要是针对肿瘤组织内的大多数细胞,常有复发和转移,使治疗失败。肿瘤干细胞的提出,可靶向性杀伤肿瘤干细胞从而使根治肿瘤和防止肿瘤复发和转移成为可能,且先前诸多关于肿瘤发生发展机制、细胞信号途径等研究成果可能需要重新评价,对传统的肿瘤治疗方式提出了巨大挑战。就肿瘤干细胞的起源、存在证据、肿瘤干细胞与正常干细胞之间关系、临床意义及展望综述如下。     

微囊化乳猪肝细胞培养

生物型人工肝是目前治疗暴发性肝衰一种有效的方法。它要求所用肝细胞能提供足够的方法,它要求所用肝细胞能提供足够的肝功能支持,应用异种肝细胞时膛应避免排斥反应的发生,肝细胞的微囊化可解决这些问题,我们在以往研究的基础上,制备微囊化乳猪肝细胞并进行体外培养。     

微囊肝细胞血液灌流治疗大鼠暴发性肝衰竭的实验研究

作为暴发性肝衰竭（ｆａｌｍｉｎａｎｔｈｅｐａｔｉｃｆａｉｌｕｒｅ，ＦＨＦ）的一种治疗手段，人工肝辅助装置正在不断的发展，但至今尚无一种理想的人工肝［１］。我们在微囊肝细胞同种移植成功治疗ＦＨＦ大鼠模型的基础上［２］，建立起一种新型人工肝即微囊肝细胞血液灌流。一、材料和方法１．ＦＨＦ大鼠动物模型应用健康雄性ＳＤ大鼠，１０％Ｄ氨基半乳糖溶液一次腹腔内注射，剂量：１２００ｍｇ／ｋｇ。２．采用改进的Ｓｅｇｌｅｎ原位胶原酶（Ⅳ型）灌注法，经门静脉，腹主动脉双重灌洗分离新生雄性乳猪肝细胞。３．微囊肝细胞…     

加味茵陈汤防治大鼠急性肝功能衰竭的实验研究

目的:探索中药加味茵陈汤对急性肝功能衰竭大鼠的防治效果。方法:加味茵陈汤汤剂(2g/mL),Wistar大鼠D-氨基半乳糖腹腔内一次注射(剂量1200mg/kg),分别以不同剂量中药灌胃(A组45g/kg;B组30g/kg;C组15g/kg),对照组(D组)给予相同体积生理盐水。观察一般情况改变及生存时间,于给药前、给药后24h、48h、72h取血测定血氨、AST、ALT及TBil,并取肝脏进行病理检查。结果:随中药剂量增加模型大鼠中位生存时间延长,A、B组与D组间比均有统计学差异(P<0.05)。C组及D组血氨、AST、ALT及TBil水平明显高于A、B两组,且D组高于C组(P<0.05)。A、B两组大鼠肝脏病理结果改善,均较D组坏死轻。结论:中药加味茵陈汤可以延长D-氨基半乳诱导大鼠急性肝功能衰竭模型的生存时间,改善TBiL及血氨等肝功能指标,减轻肝脏损伤的病理改变。