大鼠门静脉高压形成过程中血浆内毒素水平与肠道iNOS的表达

在肝硬化形成过程中常伴随着f J静脉高压(portal hypertension,PHT)的形成,其血流动力变化过程中肠道高动力循环的形成是PHT维持和发展的重要条件.各种因素如内毒素,内皮素-1(endothelin-1,ET-1)等通过刺激血管舒张剂如NO等可引起肠道血管扩张而使门脉血流增加.近年来,肠源性内毒素血症(intestinal endotoxemia,IETM)与PHT的关系日益受到重视,前者可通过增加肠道iNOS(inducible nitric oxide synthase,NOS)的表达,促进肠道高动力循环的形成.而在PHT形成的早期及后期内毒素是否均参与了PHT的形成,未见报道.本实验重点研究血浆内毒素与肠道iNOS的动态关系,尤其在PHT形成早期及后期有何异同.     

NS398对原代培养海马神经元Aβ肽损伤的作用

目的:研究NS398对β淀粉样蛋白(Aβ25~35)诱导的原代培养海马神经元损伤的保护作用及其可能机制。方法:以原代培养的SD大鼠海马神经元为研究对象,随机分为空白对照组、Aβ肽损伤模型组、尼莫地平阳性对照组、NS398实验组。以10μmol/L Aβ25~35造海马神经元损伤模型,通过四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率,免疫细胞化学法测定Cox-2的表达,硫代巴比妥酸比色法测定培养液上清丙二醛(MDA)含量,观察NS398对Aβ25~35诱导的原代培养海马神经元损伤的保护作用。结果:与Aβ肽损伤模型组比较,NS398使神经元细胞存活率明显增高,Cox-2的表达下降,MDA含量减少,差异具有显著性(P<0.05)。结论:NS398可通过抑制Cox-2的表达,抑制细胞膜脂质过氧化对原代培养海马神经元损伤起保护作用。     

cTnI、AST及CK在鉴别诊断大鼠骨骼肌与心肌损伤应用价值的比较

目的:探讨心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI,cTnI)在鉴别诊断大鼠骨骼肌与心肌损伤应用价值.方法:选取32只SD大鼠随机分为四组,心肌损伤组,单次背部皮下注射异丙肾上腺素;骨骼肌损伤组,单次单侧胫骨肌注射布比卡因;联合损伤组,单次单侧胫骨肌注射布比卡因及背部皮下异丙肾上腺素.正常对照组,不给予任何药物.予给药后24 h,检测血清AST,CK及cTnI,常规HE染色观察骨骼肌和心肌受损情况.结果:心肌损伤组和联合损伤组血清cTnI均显著高于正常对照组和骨骼肌损伤组,差异具有统计学意义(P＜0.01),而联合损伤组和心肌损伤组AST与骨骼肌损伤组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),心肌损伤组CK与骨骼肌损伤组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:cTnI在鉴别大鼠心肌及骨骼肌损伤上较AST、CK有较高的敏感性,并且在一定程度上能够降低误诊及漏诊率.     

荷人卵巢上皮癌裸鼠冻融卵巢组织移植的效果评价

目的:获取人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤癌旁正常卵巢组织,经安全筛查并冻融后移植至去势裸鼠体内,探讨移植后效果,为临床应用提供依据。方法:将人卵巢上皮癌OVCAR3细胞种植于裸鼠皮下以获取瘤源,并进行卵巢原位移植,建立卵巢癌原位移植瘤模型,解剖裸鼠获取癌旁正常卵巢组织。癌旁组:取筛选后的癌旁卵巢组织进行玻璃化冷冻,复苏后分别进行皮下及原位移植,各20例;对照组:同龄正常裸鼠卵巢组织,皮下移植及原位移植各20例;去势裸鼠组:20只同龄去势裸鼠;正常卵巢组:20只同龄正常裸鼠。移植12周后,分析各组裸鼠卵巢组织内卵泡形态及激素分泌功能。结果:40只人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤模型中共获取35份活检正常的癌旁卵巢组织,获取率87.5%(35/40)。玻璃化冷冻前后卵巢组织中卵泡形态及各级卵泡比例均无显著差异(P>0.05),癌旁冷冻组织和癌旁新鲜组织的异常卵泡比例差异无统计学意义(P>0.05),冷冻组织以初级卵泡及次级卵泡等窦前卵泡为主。癌旁组皮下移植组织存活率80%(16/20),对照组皮下移植组织存活率90%(18/20),癌旁组原位移植组织存活率90%(18/20),对照组原位移植组织存活率95%(19/20)。移植后组织内卵泡以次级卵泡及窦状卵泡为主,各级卵泡的形态及构成比和未移植的同龄正常裸鼠卵巢相似(P>0.05);癌旁组卵泡数明显低于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01);皮下移植和原位移植组织内的各级卵泡数差异无统计学意义(P>0.05)。癌旁组卵泡刺激素水平明显低于去势裸鼠组,而雌二醇水平明显高于去势裸鼠组(P<0.01);癌旁组卵泡刺激素水平明显高于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01),而雌二醇水平明显低于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01);皮下移植和原位移植的卵泡刺激素水平和雌二醇水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:癌旁卵巢组织冻融移植后有正常卵泡发育及激素分泌功能;皮下移植和原位移植均可取得较好的效果;癌旁卵巢组织冻融移植有望作为卵巢上皮癌患者治疗后恢复卵巢内分泌功能的有效手段。     

NS398对Aβ肽损伤原代培养海马神经元的影响

目的:探讨Cox-2抑制剂NS398对损伤神经元的保护作用。方法:将原代培养的SD大鼠海马神经元随机分为空白对照组、Aβ肽细胞模型组和NS398实验组。以10μmol/L Aβ25-35制作原代培养海马神经元损伤模型,以四氮唑溴盐(MTT)比色法检测细胞存活率,免疫细胞化学法检测Cox-2、Caspase-3的表达。结果:Aβ25-35细胞模型组神经元形态变化明显,细胞存活率明显下降,Cox-2和Caspase-3表达增强,与空白组比较有显著差异(P<0.01)。NS398使神经元细胞存活率明显提高并使Cox-2和Caspase-3表达减弱,与Aβ肽模型组比较具有显著性差异(P<0.01)。结论:Aβ25-35导致Cox-2和Caspase-3的表达增强,并使SD大鼠原代培养海马神经元变性、死亡。NS398可能通过抑制Cox-2和Caspase-3的表达保护原代培养海马神经元。     

氯氰菊酯慢性染毒大鼠全血乙酰胆碱酯酶活性变化规律研究

目的:探讨氯氰菊酯(CP)慢性染毒后大鼠全血乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的变化规律.方法:120只80～100g雄性SD)大鼠随机分为4组,对照组(花生油)、低剂量组(40 mg/kg CP)、中剂量组(80mg/kg CP)和高剂量组(160 mg/kg CP),每组30只.灌胃给药28次,每日1次,共28 d,每日...     

Aβ肽损伤Alzheimer病细胞模型的建立及Cox-2的表达

目的: 研究以β淀粉样蛋白(Aβ25～ 35) 损伤原代培养海马神经元建立Alzheimer病细胞模型的方法及Cox-2在模型细胞中的表达。 方法: 以原代培养的SD 大鼠海马神经元为研究对象,以不同浓度Aβ25～ 35造海马神经元损伤模型,通过四唑盐(MTT ) 比色试验检测测定细胞存活率,免疫细胞化学法测定Cox-2的表达。 结果: Aβ25～ 35在终浓度在 5μmol/L, 10μmol/L, 20μmol/L 时神经元形态有明显的变化,细胞存活率明显下降,Cox-2的表达增加,与对照组相比较有显著性差异(P < 0. 01)。结论: Aβ25～ 35诱导了原代培养海马神经元变性、死亡, 使Cox-2的表达增加。Cox-2的异常高表达可能介导了神经元的损伤。     

肠道高动力循环动物模型的建立

目的:建立肠道高动力循环动物模型,为研究门静脉高压(PHT)形成机制提供有利工具。方法:采用复合因素致肝纤维化方法,建立肠道高动力循环模型。选用雄性Wistar大鼠,分别在饲养第0、2、4、6、8周末取材,经肠系膜上静脉末端穿刺测压,动态观察门静脉压力(PVP)变化;肝脏HE、V.G染色及外周血丙氨酸氨基转移酶(ALT)、透明质酸(HA)测定来确定肝纤维化及硬化分期;测定外周血中的内皮素-1(ET-1)及肠管组织匀浆中一氧化氮(NO)的动态变化水平观察肠道高动力循环形成情况。并与正常对照组比较。结果:肠管组织匀浆中NO和外周血ET-1出现先降低后升高,到第8周末明显高于正常对照组;PVP的动态变化与NO、ET-1动态变化呈正性相关(r分别为0.900 7、0.851 4,P<0.05);NO/ET-1比值总体呈升高趋势。结论:通过复合因素致肝纤维化方法,可以建立大鼠肠道高动力循环模型。     

预防性葛根素抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡

目的探讨预防性葛根素对UVB诱导的HaCa T细胞凋亡的影响。方法 HaCa T细胞与0.49、1.0mg.mL-1葛根素孵育1h后,以30mJ.cm-2UVB直接照射细胞,24h后收集细胞测定细胞凋亡率和p53蛋白。结果葛根素预处理HaCa T细胞的凋亡率下降,同时细胞表达的p53蛋白减少。结论预防性葛根素抑制UVB诱导的HaCa T细胞凋亡,可能与下调p53蛋白有关。     

流式细胞术检测肿瘤相关蛋白在人卵巢上皮性肿瘤裸鼠冻融卵巢组织移植中的意义

目的 通过对人卵巢上皮性肿瘤裸鼠原位移植瘤的癌旁组织相关蛋白的检测,探讨癌旁正常卵巢组织筛选的标准及冻融卵巢组织移植的可行性.方法 将人卵巢上皮性肿瘤OVCAR3细胞于裸小鼠颈背部近腋窝处皮下种植获取瘤源,行卵巢原位移植后,取癌组织、癌旁近端组织、癌旁中段组织、癌旁远端组织及正常裸鼠卵巢组织,采用流式细胞术检测各组织中的细胞角蛋白-7（CK-7）、CA125、p53、Survivin、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、金属蛋白酶组织抑制物-2（T1MP-2）的表达量;分别取全部指标阴性组、CK-7（-）CA125（-）Survivin（-）组、CK-7（＋）CA125（＋）Survivin（＋）组的组织、癌组织和冻融正常裸鼠卵巢组织进行移植,分析各组移植后的癌变率及CA125水平变化,同时检测原位移植后不同病变程度的裸鼠血清CA125水平.结果 从52份人卵巢上皮性肿瘤裸鼠原位移植瘤模型中获取46份（88.5％）活组织检查正常的癌旁残余卵巢组织;仅卵巢种植裸鼠血清CA125水平高于正常裸鼠（P＜0.01）,低于卵巢外种植裸鼠（P＜0.05）.原位移植瘤组织中CK-7、CA125、p53、Survivin、MMP-2及TIMP-2的表达率分别为93.3 ％（28/30）、93.3 ％（28/30）、86.7％（26/30）、86.7％（26/30）、83.3％（25/30）、83.3％（25/30）,癌旁近端组织的表达率分别为70.0％（21/30）、70.0％（21/30）、63.3％（19/30）、63.3％（19/30）、60.0％（18/30）、56.7％（17/30）,癌旁中段组织的表达率分别为33.3％（10/30）、30.0％（9/30）、30.0％（9/30）、30.0％（9/30）、26.7％（8/30）、23.3％（7/30）,癌旁远端组织的表达率分别为26.7％（8/30）、23.3％（7/30）、26.7％（8/30）、26.7 ％（8/30）、30.0％（9/30）、30.0％（9/30）;20份原位移植正常卵巢组织上述指标均为阴性.癌旁近端组织中CK-7、CA125、p53、Survivin、MMP-2及TIMP-2的表达率低于癌组织（P＜0.05）,高于癌旁中段组织及癌旁远端组织（P＜0.01）;癌旁中段组织及癌旁远端组织表达率差异无统计学意义（P＞0.05）.癌旁组织CK-7、CA125、Survivin的强阳性表达率明显高于p53、MMP-2、TIMP-2（P＜ 0.05）.全部指标表达阴性组或CK-7（-）CA125（-）Survivin（-）组的组织移植后,未发现癌变,其癌变率及CA125水平低于CK-7（＋）CA125（＋）Survivin（＋）组（P＜0.01,P＜0.05）.结论 CK-7、CA125、p53、Survivin、MMP-2及TIMP-2等分子指标的表达向无癌方向呈递减趋势,这些肿瘤相关基因表达全部阴性或主要指标CK-7、CA125、Survivin阴性均可作为筛选癌旁残余正常卵巢组织的标准,流式细胞术可作为筛查残留癌灶及隐匿转移的有效方法;人卵巢上皮性肿瘤裸鼠冻融卵巢组织移植安全、可行.