核酶在AIDS基因治疗中的研究新进展

利用核酶的核心酸内切酶活性将核酶应用于AIDS基因治疗的研究，近几年来有了许多新的突破，本文主要在核酶作用的位点、载体选择和宿主细胞选择及提高核酶作用有效率等方面对这一领域中新的研究进展作一综述性介绍。     

BALB/C小鼠对不同佐剂SARS灭活疫苗的早期免疫反应

目的：研究含不同佐剂的SARS灭活疫苗免疫小鼠后，小鼠的早期细胞免疫和体液免疫反应。方法：灭活的SAPS冠状病毒F69株分别与弗氏佐剂、氢氧化铝、CpG佐剂配伍，制备灭活疫苗。接种6周龄SPF’级BALB／C小鼠。定时采血，分析小鼠外周血中CD4^ 、CD8^ T细胞亚群动态变化，同时测定鼠血清中特异性IgG抗体及抗体的病毒中和活性。结果：由3种佐剂制备的SARS灭活疫苗免疫小鼠后，CD4^ 、CD8^ T细胞百分比升高或无明显改变，CD4／CD8比值无显著性改变。其中，弗氏佐剂疫苗免疫小鼠的CD4^ T细胞百分比升高较明显，且在一段时间内，维持在一个较高的水平；铝佐剂疫苗免疫小鼠后，未观察到明显T细胞亚群改变；而CoG佐剂疫苗免疫小鼠的CD8^ T细胞百分比改变较其它佐剂疫苗改变更明显。与此相异的是，3种疫苗均可诱导小鼠产生较高滴度特异性IgG抗体，并且所产生的抗体具有中和活性。在初免后第34天，3种佐剂组的IgG抗体滴度分别为1：12800、1：3200和1：1600，中和效价分别为1：2560、1：960和1：320。结论：SARS灭活疫苗接种小鼠后，可诱导较强的体液免疫反应，同时轻度上调CD4^ 、CD8^ T细胞活性，程度因佐剂而异。     

重组人抑癌相关蛋白核苷二磷酸激酶A的原核表达

目的:为提高表达量,简化纯化工艺,获得可用于临床研究的重组人NDPK-A蛋白,构建带有6×His纯化标签的原核表达载体,优化表达条件获得产物高表达并鉴定产物活性。方法:将抑癌基因nm23-H1 从质粒pBVNMH1中亚克隆于带有纯化标签的表达载体pQE40中;梯度变化表达条件获得产物高表达;镍离子螯合层析柱纯化目的蛋白;Western blot鉴定产物的免疫原性;HPLC测定产物的激酶活性;鸡胚尿囊膜试验鉴定产物抑制血管新生的生物活性。结果:pQE-40中亚克隆的nm23-H1 序列无误;目的蛋白最高表达量可达49.6%;纯化的表达产物能与天然NDPK－A的多克隆抗体特异结合;酶比活为472U/mg;具有抑制鸡胚尿囊膜血管新生的活性。结论:表达质粒pQE-nm23H 1 能高效表达重组人NDPK-A,纯化工艺简便,产物活性与天然NDPK-A无异。     

核酶在AIDS基因治疗中的研究新进展

利用核酶的核酸内切酶活性将核酶应用于AIDS基因治疗的研究,近几年来有了许多新的突破,本文主要在核酶作用的位点、载体选择和宿主细胞选择及提高核酶作用有效率等方面对这一领域中新的研究进展作一综述性介绍.     

SARS冠状病毒在Vero-E6细胞中的生活周期分析

冠状病毒家族生活周期的基本程序包括 :病毒吸附 ,配体 受体分子介导的病毒包膜与宿主细胞膜的融合、脱壳 ,遗传物质的复制、转录、蛋白合成 ,病毒装配和释放。对病毒生活周期的了解 ,是开发抗病毒药物 ,研究药物作用机理的前提。我们通过病毒滴定、荧光定量PCR等方法 ,确定SARS CoV在Vero E6中的吸附、复制、释放的时间及对应的病毒量。把SARS冠状病毒毒株F 6 9稀释为10 0TCID50 / 10 0 μl,按照 10 0 μl/支接种到Vero E6细胞管中 ,营养液为含 10 %胎牛血清MEM ,分别在 33℃、35℃、37℃ ,5 %CO2 培养箱中培养 ;于 2、4、6、8…     

SARS灭活试验疫苗免疫小鼠后CD4+与CD8+T细胞动态变化

以甲醛灭活SARS冠状病毒F6 9株 ,分别与福氏佐剂、氢氧化铝、CpG佐剂配伍 ,制备灭活疫苗 ,免疫实验动物。SPF级BALB c小鼠 ,雌雄各半 ,随机分为高、中、低 3个剂量组 ;初次免疫时 ,疫苗接种体积分别为 0 .3ml、0 .2ml和0 .1ml,腹腔 皮下接种小鼠 ;14d后进行第 2次免疫 ,免疫剂量减半。 2次免疫10d后 ,以不含佐剂的疫苗进行加强免疫。初次免疫后第 4、8、12、19、2 6、34天 ,各组小鼠取 3只断尾取血 ,肝素抗凝 ,流式细胞仪分析CD4 + 、CD8+ T细胞百分比。结果表明 ,中剂量含福氏佐剂的SARS灭活试验疫苗免疫小鼠后 ,外周血中CD4 + …     

pQE-hbFGF表达系统的构建及其蛋白质的表达和纯化

 目的　构建pQE-hishbFGF表达载体,通过一步纯化得到6×HishbFGF蛋白质。方法　用PCR扩增目的基因hbFGF ,连接到pQE40载体上,转化到Top10菌株筛选重组子,经测序后将质粒转化到表达菌M15上,经IPTG诱导表达,超声波破菌后通过镍离子螯合层析一步纯化得6×HishbFGF蛋白质,ELISA鉴定产物 ,用MTT法检测产物促细胞增殖的生物活性。结果　hbFGF基因插入pQE载体中,在M15中6×HishbFGF的表达量达到20%,且为可溶性表达。经一步纯化后得到N端带 6个组氨酸的hbFGF蛋白,纯度为96%,6×HishbFGF具有免疫原性及促进NIH3T3细胞增殖的活性。结论　 6×HishbFGF蛋白质在M15中可溶性地高效表达,并经一步亲和层析得到纯度高活性高的产物,降低了生产成本,为大规模生产hbFGF及hbFGF的应用研究奠定了基础。