西藏小型猪IGF-1基因的克隆测序分析

目的 克隆西藏小型猪的肝脏组织中的IGF-1基因的cDNA序列,并与pubmed中查询到的猪cDNA进行比对分析。方法 本研究提取了西藏小型猪肝脏组织的总RNA,应用RT-PCR技术扩增了IGF-1基因的cDNA序列,将扩增出的片段克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒pMD18-T-IGF-1,进行测序分析。结果 首次克隆出了西藏小型猪肝脏组织中的IGF-1的cDNA序列,获得了大小为567bp长的片段,编码了186个氨基酸,与pubmed中查询到的猪（NM_214256.1）的IGF-1基因高度同源,比对序列发现,在440bp、455bp处发生了G→A、C→T的突变,该位点的突变引起相应编码氨基酸的变化,分别由组氨酸变成了精氨酸、亮氨酸转变成了丝氨酸。结论 本研究为西藏小型猪的生长发育机制研究提供了分子学依据,两个位点的突变引起的氨基酸的改变是否是导致西藏小型猪矮小的原因,需要进一步论证。     

睾丸内注射和体内电穿孔法建立转基因小鼠的实验研究

目的 探讨在体睾丸生精小管注射合并体内电穿孔建立转基因小鼠的可行性.方法 将两种不同处理的转染液分别注射到4组SPF级雄性昆明小鼠睾丸生精小管内,然后对同一种转染液注射的两组动物中的一组进行体内电穿孔,另一组则不进行体内电穿孔;2周后各组SPF级雄性昆明小鼠分别与超排处理的SPF级雌性昆明小鼠合笼交配,最后对各组新生仔鼠进行PCR-Southern检测.结果 PCR检测,四组之间存在显著差异(P＜0.01),并且以A组最高(45%);Southern blotting检测,4组之间差异不显著(P＞0.05),但A组的整合效率(25%)仍高于其他3组.结论 运用在体睾丸生精小管内注射合并体内电穿孔技术可以显著地提高外源基因的转染效率,该方法是否可广泛用于生产转基因动物还有待于进一步深入研究.     

人癌术后转移动物模型的建立及其生物学特性研究

目的 建立人癌术后转移动物模型,观察不同瘤源所建模型生物学特性的差异.方法 肿瘤生长至瘤径为1.5 cm时,把在裸小鼠皮下传代的GBC、HCT-116、NCI-H460和SMMC-7721移植瘤切除,建立术后转移裸小鼠模型,观察动物的生存状态和体内转移情况.结果 GBC对照组裸小鼠8周时未发现体内转移;术后组10周时肺转移6只(75%),切瘤后动物生存期延长2周.HCT-116对照组9周时肺转移3只(23.1%);术后组17周时肺转移15只(100%),脾脏转移5只(33.3%),淋巴结转移15只(100%),切瘤后动物生存期延长超过8周.NCI-H460对照组10周时裸小鼠未发现转移,术后组14周时肺转移5只(100%),切瘤后动物生存期延长4周.SMMC-7721对照组和术后组动物出现衰竭体征时均未发现体内转移,切瘤后动物生存期延长6周.结论 皮下移植瘤切除后,可以延长动物生存期,提高体内转移发生率,但是否发生高转移与瘤源自身的生物学特性有关.     

如何上好一堂实验动物学课

实验动物学教学内容多,且涉及面广。如何将这众多的教学内容在有限的时间里传授给学生,这给每一位实验动物学专业教师提出了更高的要求,就如何上好一堂实验动物学课谈几点浅见。     

生物全降解药物支架植入小型猪冠状动脉：安全性及组织相容性

背景：为解决聚左旋乳酸支架支撑力不足、代谢的酸性产物容易导致血管局部无菌性炎症等缺点,本课题组设计出新型支架,在聚左旋乳酸基础上融入无定型磷酸钙纳米颗粒。目的：评价新型生物全降解支架聚左旋乳酸/无定型磷酸钙纳米颗粒的安全性及组织相容性。方法：取16头健康西藏小型猪,随机选取左前降支、左回旋支或右冠状动脉支相同管腔大小的血管段,植入新型生物全降解支架1枚,于植入前、植入后1个月取股动脉血标本,行血液学检测。植入1,6个月后,复查冠状动脉造影后对支架段标本行苏木精-伊红染色,观察支架血管损伤、炎症及内皮化程度。结果与结论：支架植入前后血常规、血生化指标无明显变化。支架植入1,6个月后,冠状动脉造影提示冠状动脉通畅,无血栓形成,支架段血管与周围组织界限清楚,无组织粘连、坏死、贴壁不良等异常表现。与支架植入1个月时比较,植入6个月后的炎症积分降低（P 〈0.05）、内皮化积分增加（P 〈0.05）,植入部位损伤积分无明显变化;并且支架周围未见心肌梗死灶及炎性细胞浸润。结果表明新型生物全降解支架具有良好的安全性及组织相容性。     

西藏小型猪细胞色素b基因序列的比较

目的观测犬心心腔主要结构,为心脏比较解剖学积累一定的资料。方法10％甲醛固定犬心45例,一周后解剖并观测二尖瓣复合体、三尖瓣复合体、肺动脉瓣环、主动脉瓣环、肺静脉、前后腔静脉、冠状窦和卵圆窝,统计学处理后与人的心脏进行比较分析。结果①犬心左心室呈圆锥形,分为左心室流入道及左心室流出道,其流入道主要结构为二尖瓣复合体。二尖瓣环周径为49．16±10．00mm,腱索总数为16．72±2．76条。左心室流出道主要结构为主动脉瓣、主动脉窦、主动脉口。主动脉瓣环周径为34．55±8．00mm;②犬心右心室主要结构有三尖瓣复合体、肺动脉瓣、假腱索、隔缘肉柱等。三尖瓣环周径为71．03±14．02mm,肺动脉瓣环周径为35．97±8．17mm;③犬心左右心房的主要结构有前后腔静脉、肺静脉、冠状窦和卵圆窝。前腔、后腔静脉口径分别为43．91±10．17mm、37．67±10．54mm。肺静脉平均为29．44±12．71mm。冠状窦口径平均为14．12±4．00mm。其中冠状窦口呈圆形的占89．7％,唇形的占10．3％。卵圆窝发现率为100％。结论犬心的主要结构与人类相似,但大小及假腱索、腱索总数有一定差异。     

胰高血糖素样多肽-1对2型糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用研究

目的观察胰高血糖素样多肽-1(GLP-1)对大鼠2型糖尿病性心肌病心肌损伤的影响。方法采用高脂高糖膳食合并链脲佐菌素(40 mg/kg)诱导的方法建立2型糖尿病大鼠模型。将糖尿病大鼠模型随机分为模型组和GLP-1组,采取皮下包埋缓释泵,分别给两组大鼠连续灌注生理盐水或GLP-1 30 pmol/(kg·min 1),7 d后,处死取心脏,利用Langendorff离体心脏灌流系统进行心脏功能检测和心肌细胞形态学观察。结果糖尿病大鼠在建模成功后第10天出现左心室功能异常。3周后,与正常相比,左室发展压(LVDP)、心率–左心室发展压乘积值(RPP)、dp/dtmax、m-dp/dtmax分别降低40.80%、51.50%、50.87%、52.81%;心肌组织炎性细胞浸润增加,血管周围及心肌细胞间纤维化增加,心肌细胞凋亡指数增加。GLP-1处理组LVDP、RPP、dp/dtmax、m-dp/dtmax分别较模型组增加25.36%、10.90%、22.62%、30.07%,心肌细胞炎症、凋亡减少,心肌组织间及血管周围纤维化降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论糖尿病可直接诱发以间质性纤维化、代偿性纤维化、炎症细胞浸润和凋亡细胞增多为特点的心肌组织损伤,形成糖尿病性心肌病。体内持续释放GLP-1可缓解糖尿病引发的心肌组织损伤,对其心肌组织有保护作用。     

静脉输注过氧化氢溶液上调小鼠脾脏和外周血CD4~＋Foxo3~＋调节性T细胞

背景：现已证实,天然生成的调节性T细胞在维护机体免疫稳态、抑制炎性反应、抗移植排斥、抑制抗肿瘤免疫应答以及防治自身免疫病中都有重要的功能和作用。目的：探讨静脉输注过氧化氢对BALB/c小鼠CD4＋CD25＋Foxo3＋调节性T细胞的影响。方法：取BALB/c小鼠12只,随机分为两组。H2O2处理组小鼠尾静脉注射含有H2O2的PBS;PBS组小鼠静脉注射无菌PBS。分别在注射2周后处死小鼠,采集小鼠外周血、脾脏和胸腺,采用流式细胞仪检测其中CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞比例。结果与结论：H2O2处理组小鼠外周血和脾脏CD4＋Foxp3＋T细胞比例、CD4＋Foxp3＋/CD4＋细胞比例均高于对照组小鼠（P〈0.05）。提示静脉注射H2O2能上调小鼠外周血和脾脏内CD4＋Foxp3＋调节性T细胞的比例。     

利用人脐带血干细胞制备人鼠肝组织嵌合体模型

目的利用人脐带血干细胞研究制备HBV感染人鼠嵌合小鼠模型。方法将人脐血干细胞,经尾静脉分两次注射到裸鼠体内。分别于第7,14,21天取肝组织,进行AFP免疫组织化学检测,分析人肝细胞在裸鼠体内嵌合生长情况,并进行乙肝病毒感染实验,定量检测感染后小鼠血清中AFP、ALB。结果实验组小鼠在第7、14、21天肝脏内AFP持续阳性表达,AFP表达于细胞质内。HBV感染后小鼠肝脏HBsAg组化显示密集成片的阳性细胞。实验组和对照组表达差异显著(P<0.05)。结论将人脐血干细胞移植裸鼠肝脏内可以存活并分化成人肝细胞形成嵌合鼠,并能被HBV感染。     

广州地区三种小型猪血液生理生化指标的比较

目的 比较广州地区西藏小型猪、五指山小型猪和巴马小型猪血液生理生化指标的差异.方法 全自动血液细胞和生化分析仪测定24个血液生理生化指标.结果 24个指标中,血红蛋白、白细胞、单核细胞、血细胞比容、葡萄糖指标的测定差异显著;淋巴细胞、中性粒细胞、平均红细胞容积、平均红细胞血红蛋白、血清总蛋白、血清清蛋白、血尿素氮、血肌酐指标的测定差异极显著.其中血红蛋白、血细胞比容、平均红细胞容积、平均红细胞血红蛋白、血清总蛋白、血清清蛋白、血尿素氮、血肌酐指标以西藏小型猪最高,白细胞、淋巴细胞指标以五指山小型猪最高,而中性粒细胞、单核细胞、葡萄糖指标以巴马小型猪最高.结论 三种小型猪血液生理生化指标的比较,为建立小型猪生物学特性数据库提供了理论依据.