三基序蛋白25过表达对肺癌细胞H1299顺铂敏感性的影响

目的：初步探讨三基序蛋白25（tripartite motif containing 25,TRIM25）过表达对人肺癌细胞株H1299顺铂敏感性的影响及其分子作用机制。方法：应用基因克隆技术构建TRIM25高表达质粒载体,瞬时转染人肺癌细胞株H1299,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot法检测TRIM25蛋白表达水平及其过表达时丙酮酸激酶M2（pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2）蛋白水平的变化。用顺铂分别处理转染前后的H1299细胞24 h,MTT法检测细胞耐药性,Annexin V/PI双染法流式细胞仪（flow cytometry,ＦＣＭ）检测细胞凋亡。结果：同H1299空白组和转染pGCMV/neo空载体组比较,pGCMV-trim25转染组细胞中TRIM25蛋白的表达水平明显增加（P=0.003,P=0.005）;且TRIM25过表达时,细胞中PKM2蛋白的表达水平降低（P=0.001,P=0.003）。用顺铂处理后,pGCMV-trim25转染组细胞的药物敏感性显著下降（P<0.001）,转染组细胞凋亡率亦明显降低（P<0.001）。结论：TRIM25在肺癌细胞H1299中高表达时,可能通过下调PKM2而降低对顺铂的敏感性。     

非小细胞肺癌中TRIM25和PKM2蛋白表达

目的检测临床非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer, NSCLC）病人组织中TRIM25、PKM2蛋白的表达情况,探讨它
们的关联性及意义。方法应用组织免疫荧光法,检测TRIM25、PKM2 蛋白在60 例NSCLC组织和20 例癌旁边正常肺组织
（>5 cm）表达情况,同时运用Western blotting方法检测TRIM25、PKM2在10例新鲜NSCLC组织中表达情况,并结合标本的临
床病理特征进行分析。结果TRIM25在60例非小细胞肺癌组织中的阳性表达率45%,而20例癌旁正常肺组织中仅为10%（P=
0.005）。TRIM25在腺癌中阳性表达率为28.6%,而在鳞癌中为59.4%（P=0.017）。TRIM25被发现与TNM分期、淋巴结转移之
间呈正相关性（P<0.05）。PKM2在60例非小细胞肺癌组织中表达率为73.3%,而在20例癌旁正常肺组织中为30%（P=0.001）。
PKM2 在腺癌的表达为57.1%,而在鳞癌中为87.5%（P=0.008）。通过关联性分析TRIM25 和PKM2 存在相关性（P=0.026）。
Western blot结果表明当TRIM25表达升高时PKM2表达增长放缓。结论TRIM25、PKM2蛋白可能同时参与到NSCLC发生发
展过程中,存在负相关性。
     

米非司酮对小鼠着床期子宫内膜活化的β-连环蛋白(active β-catenin)表达的影响

目的:探讨活化的β-连环蛋白(active β-catenin)在胚胎着床过程中的作用。方法:将孕第2日(d2)昆明小鼠随机分成3组,每组30只,A组:孕d2单次背部皮下注射0.1ml米非司酮(1.2mg/ml);B组(溶剂对照):以等量1,3-丙二醇代替米非司酮;C组:不作任何处理。用免疫组织化学、间接免疫荧光、Western blotting方法定性、定量、定位检测3组小鼠在妊娠d3￣7活化的β-连环蛋白的动态表达。结果:B、C组小鼠子宫内膜中活化的β-连环蛋白于孕d3在腺上皮和腔上皮、基质细胞质和细胞膜表达;妊娠d4在腔上皮细胞质和细胞膜强表达,并达高峰;妊娠d5￣7在腺上皮、血管内皮、腔上皮下基质细胞膜和细胞质表达,且B、C组间在妊娠d3￣7各时间点的表达无显著性差异(P>0.05);A组小鼠妊娠d3￣7活化的β-连环蛋白的表达较B、C组显著降低(P<0.01),在妊娠d4表达量未见高峰,且表达部位局限于基质细胞,腔上皮无表达。结论:米非司酮可能通过抑制孕激素与其受体结合而下调活化的β-连环蛋白表达,进而抑制子宫内膜黏附性,影响子宫内膜容受性的建立而阻碍胚胎顺利着床。     

腺病毒载体的PEG修饰及其特性研究

目的：本研究通过对腺病毒载体（Adv）进行聚乙二醇（PEG）修饰,以达到改善Adv在体内免疫原性较强、血液半衰期短的不足.方法：使用活化的甲氧基PEG对Adv衣壳蛋白质进行修饰得到PEG化Adv（PEG-Adv）,用A549细胞评价了PEG-Adv的抗体抵抗能力、基因转导能力,并以体内试验考察其半衰期.结果：用本实验方法可通过调整反应中的PEG量控制Adv的PEG修饰率,PEG-Adv的血液半衰期及抗体抵抗能力显著优于普通Adv.结论：Adv经PEG修饰后,可显著改善Adv血液半衰期短、易被抗体中和等缺点,对开发高效的、有理想药动学特征的Adv具有重要意义.     

传染性单核细胞增多症患者不同标本EBV-DNA检测的临床价值

目的探讨血浆、外周血单个核细胞(PBMC)、咽拭子的EBV-DNA载量对16岁以上传染性单核细胞增多症(IM)患者的诊断价值。方法回顾性分析130例16岁以上疑似IM患者血浆、PBMC和咽拭子3种标本EBV-DNA载量检查结果。结果 61例临床和实验室确诊IM中,血浆标本检出16例,EBV-DNA检出率为26.22%;31例检测PBMC的患者EBV-DNA检出率为61.29%;37例咽拭子EBV-DNA检出率为83.78%。血浆、PBMC、咽拭子以一项或多项阳性为依据的联合检测,EBV-DNA检出率100.00%。结论通过血浆、PBMC、咽拭子EBV-DNA的联合检测可提高16岁以上IM阳性检出率,为临床提供更多的病原学诊断和治疗依据。     

GBLP在人脐静脉内皮细胞中差异表达的验证

目的 验证经手性药物比较蛋白质组学筛选鉴定的差异表达蛋白G蛋白β亚单位2样1蛋白(guanine nucleotide-binding protein subunit beta 2-like 1,GBLP).方法 分别用80 μmol/L的R/S-普萘洛尔(R/S- propranolol,R/S-PRO)处理人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)3 h.采用比较蛋白质组学方法分离鉴定差异表达蛋白-GBLP,Western blot法和激光共聚焦扫描显微镜(LSCM)分别验证经R/S-PRO作用后,HUVEC细胞中GBLP的表达丰度差异和细胞内定位.结果 Western blot和LSCM都证实,GBLP在S-PRO作用后的HUVEC中的表达丰度明显低于经R-PRO作用后的表达(P=0.011);GBLP定位于HUVEC的细胞膜和细胞质中,在细胞质中呈均匀分布,在膜上有局部聚集分布现象.结论 Western blot和LSCM验证结果与蛋白质组学鉴定结果一致.     

新型腺病毒载体的制备及其特性研究

目的：本研究在普通腺病毒载体（Adv）纤毛头节区插入了具有整合素特异性的RGD肽,制备了一种新型RGD-Adv,以克服Adv基因转导的柯萨奇腺病毒受体依赖性.方法：用体外连接法构建RGD-Adv,并考察其基因转效率、稳定性及体外、体内毒性.结果：RGD-Adv可有效地实现向受试细胞转导基因,其转导能力随病毒量的增加而加强.结论：具有av亲和性的RGD-Adv是一种安全高效的新型腺病毒载体,将在基因治疗及实验研究中发挥重要作用.     

中国人群let-7基因rs10877887多态性与癌症风险相关性的Meta分析

目的评价中国人群let-7基因rs10877887多态性与癌症风险之间的相关性。方法通过检索PubMed、Embase、万方数据库中的相关文献(检索日期截止到2016年12月31日),共纳入4个符合标准的病例-对照研究,包含2 754例病例和3 481例对照。采用优势比(OR)和95%可信区间(95%CI)进行let-7基因rs10877887多态性与癌症风险之间的相关性评价,同时也对敏感性和发表偏倚进行分析。结果 Meta分析结果表明,在Dominant模型(CC+CTvs.TT)下,let-7基因rs10877887多态性与癌症风险之间存在显著相关性(CC+CT vs.TT:OR=0.90,95%CI=0.82~1.00,P=0.048),可降低癌症发生的总体风险。结论基于目前研究的Meta分析结果表明,中国人群中let-7基因rs10877887多态性与癌症风险具有显著相关性,可降低癌症发生的总体风险。     

树突状细胞的抗原基因转导及其抗肿瘤免疫作用的研究

目的制备整合素靶向性腺病毒载体RGD-Adv，向树突状细胞（DCs）转导抗原基因，并研究表达特异性抗原DCs的免疫学特点和抗肿瘤效果。方法使用体外连接法构建RGD-Ad，并以流式细胞技术检测其基因转导效率，通过抗原呈递试验、CTL效应试验和小鼠体内抗肿瘤试验考察表达特异性抗原DCs诱导产生CTL效应和在体抗肿瘤作用情况。结果RGD-Adv可安全高效转导DCs，且为病毒载体剂量依赖性；表达特异性抗原DCs能有效诱导抗原特异性CTL效应，并具有显著抗肿瘤效果。结论RGD-Adv是一种理想的载体系统，通过使DCs表达特异性抗原，诱导机体特异性免疫机制，产生抗肿瘤效果，是一种极具前景的肿瘤免疫治疗方法。