呼吸道纤毛上皮细胞的组织块法培养

目的建立组织块法呼吸道纤毛上皮细胞原代培养模型,观察细胞生长分化情况,为深入研究黏液纤毛传输系统提供方法学基础。方法应用组织块法在鼠尾胶原上培养兔气管纤毛上皮细胞,对培养7天的标本行苏木素-伊红染色、黏蛋白5AC(mucin-5AC,MUC5AC)单克隆抗体免疫组织化学染色、扫描电镜及透射电镜观察、纤毛摆动频率测量。结果①细胞培养7天后可以见到大量的纤毛细胞和杯状细胞,纤毛形态正常,摆动活跃;②苏木素-伊红染色和黏蛋白MUC5AC单克隆抗体免疫组织化学染色可见分化良好的纤毛细胞和杯状细胞;③扫描电镜及透射电镜观察见纤毛细胞分化良好,纤毛形态正常;④(30±1)℃下测得纤毛摆动频率为(13.2±0.9)次/s。结论应用组织块法进行兔气管纤毛上皮细胞培养,可以得到分化良好的纤毛细胞和杯状细胞,纤毛摆动活跃,可应用此模型对黏液纤毛传输系统进行深入研究。     

免疫组化技术在实验动物组织中的应用体会

医学研究领域中常应用实验动物建立具有人类疾病模拟表现的疾病动物模型，这是人类认识自身疾病发生、发展规律和研究防治措施的重要途径。当科研人员利用实验动物完成疾病造模后，往往采用免疫组化技术对动物组织进行鉴定，以检测疾病造模效果，并从中总结出规律性的东西为人类健康服务。但是在以往实验动物组织的免疫组化实验中存在一些问题，下面就相关问题谈点我们的思考和体会。     

成人持续性变应性鼻炎生活质量评价和相关性分析

目的 评价成人持续性变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者的鼻炎相关生活质量以及不同评价指标间的相关性.方法 2006年4～9月北京地区持续性AR患者37例,男21例,女16例,年龄19～53 岁,平均(31.86±8.27)岁;同期非AR对照组22例,男10例,女12例,年龄18～56 岁,平均(35.59±11.72)岁.通过病史、典型症状和皮肤点刺试验确诊.患者对屋尘螨、粉尘螨、真菌和蟑螂等室内变应原以及树1、树2、豚草、藜和艾蒿等室外变应原敏感.使用鼻炎相关生活质量问卷(rhinoconjunctivitis quality of life questionnaire,RQLQ)评估生活质量.结果 AR患者RQLQ的各项评分的平均分都明显超过对照组(P＜0.001).相关性分析显示:①夜间睡眠质量欠佳和鼻堵症状评分显著相关(r=0.537,P＜0.01);②睡眠总分和鼻堵症状评分、鼻部症状总分显著相关(r=0.667,P＜0.001;r=0.425,P＜0.01);③睡眠总分和非鼻-结膜炎症状总分显著相关(r=0.434,P＜0.01);④夜间睡眠欠佳和注意力难以集中显著相关(r=0.359,P＜0.05);⑤非鼻-结膜炎症状总分和鼻部症状总分显著相关(r=0.434,P＜0.01);⑥喷嚏症状评分和情感反应项目中的症状令人难堪项的评分显著相关(r=0.349,P＜0.05).结论 持续性AR患者的鼻炎相关生活质量较非AR对照组受到明显影响.相关性分析提示鼻部症状可能是影响睡眠质量的主要原因,睡眠质量可能影响非鼻-结膜炎症状,喷嚏可能是导致患者感觉症状令人难堪的主要原因.     

CD34+细胞在变应性鼻炎外周血和鼻黏膜中的表达

目的探讨CD34 细胞在变应性鼻炎患者外周血和鼻黏膜中的表达及髓外CD34 细胞可能参与变应性鼻炎鼻黏膜中的炎性细胞特别是嗜酸粒细胞(eosinophils,EOS)局部生成的可能性。方法取变应性鼻炎发作期和非发作期患者各12例,两组患者分别取外周血,用流式细胞仪做CD34 细胞记数;分别取鼻黏膜,用免疫组化方法标记CD34 细胞,在尽可能排除血管内皮细胞和纤维细胞CD34 阳性表达后,计数CD34 细胞。结果变应性鼻炎患者发作期外周血中CD34 细胞表达明显高于非发作期患者外周血中CD34细胞的表达(P<0.05),鼻黏膜中CD34 细胞主要表达于黏膜下层EOS聚集区,非发作期患者鼻黏膜中CD34 细胞表达明显高于发作期的鼻黏膜(P<0.01),并与活化的EOS数呈负相关。结论变应性鼻炎外周血、鼻黏膜中CD34 细胞的表达,提示了髓外CD34 细胞可能参与变应性鼻炎鼻黏膜中的炎性细胞特别是EOS的局部生成。     

特殊染色法标记鼻息肉中的嗜酸性粒细胞

鼻息肉组织中大量嗜酸性粒细胞浸润是其病理学特征之一,进一步阐明鼻息肉发病机制,是近年来研究的热点问题之一。在组织学水平标记嗜酸性粒细胞的方法主要是常规苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosin,HE),也可采用MGG（May-Grunwald-Giemsa)特殊染色法,根据细胞形态特征,可较准确地辨认组织中的嗜酸性粒细胞。     

京津冀地区健康学龄儿童呼出气一氧化氮正常值调查研究

目的　调查京津冀地区健康学龄儿童呼出气一氧化氮浓度（fraction exhaled nitric oxide，FeNO）正常值范围。方法　随机选取在我院门诊陪诊且符合健康标 准的京津冀地区学龄儿童337名，男161名，女176名，采用NIOX测定FeNO值，记录年龄、身高、体重、体质量指数及地域等数据；同时给部分可疑特应性体质的儿童行皮肤点刺试验。结果　京津冀地区健康学龄儿童FeNO均值为13ppb（part per billion），其95%CI正常值区间（偏态分布）为5～23 ppb，与学龄儿童的性别相关（P＜0.001），而与年龄分层、身高、体重、体重指数及地区差异等因素无明显相关（P＞0.05）。FeNO均值地区分布差异不明显（P >0.05）；其 几何均数值在北京地区为13 ppb，天津地区为13 ppb，而河北地区为14 ppb；其95%CI正常值范围（偏态分布）分别为5～21、5～21、5～23 ppb。结论　京津冀地区健康学龄儿童FeNO值仅与性别明显相关；然而地区之间仍然存在潜在差异，以河北地区学龄女童FeNO值最高；23 ppb作为京津冀地区健康学龄儿童FeNO的95%CI 正常值范围，但要考虑性别和地区因素。     

慢性鼻窦炎患者鼻一氧化氮/一氧化氮合酶表达水平与黏膜损伤水平的相关性研究

目的　探讨慢性鼻黏膜炎症中黏膜损伤程度与一氧化氮/一氧化氮合酶NO/NOS表达之间的关系。方法　选取连续进行鼻内镜手术的42例患者及5名正常人,进行常规的术前评估及鼻NO的测量;并在内镜手术中进行黏膜组织取材,固定后进行HE染色及NOS的免疫组化染色;评估内皮型NOS（eNOS）及诱导型NOS（iNOS）的表达程度、黏膜损伤的程度。结果　iNOS和eNOS在钩突（筛泡、中鼻甲及息肉组织）的黏膜层、黏膜下层及腺体中的表达分级和鼻NO浓度无明显相关性（P 均>0.05）;且iNOS与eNOS在黏膜各层的总表达情况与鼻NO浓度亦无明显相关性（P >0.05）。鼻黏膜中炎症细胞的浸润程度和鼻NO浓度无明显相关（P >0.05）。而鼻黏膜慢性炎症损伤程度和鼻NO表现出明显的负相关关系。结论　鼻NO浓度和鼻黏膜炎症损伤指标之间具有明显相关关系。因此,鼻黏膜炎症中鼻黏膜的炎症状态可能是调节鼻NO浓度的主要因素;鼻黏膜上皮可能是影响鼻NO的主要部位。     

鼻用糖皮质激素对变应性鼻炎和非变应性鼻炎患者呼吸道一氧化氮浓度的影响

目的　评估鼻用皮质类固醇激素对常年性变应性鼻炎及非变应性鼻炎患者鼻呼吸道一氧化氮（nitric oxide,NO）浓度的影响。方法　根据鼻内镜检查和鼻窦CT扫描排除鼻息肉及鼻窦受累患者,以皮肤点刺试验了解患者的特应性状态,并行鼻分泌物嗜酸性粒细胞检查。共选择收集23例常年性变应性鼻炎患者,17例非变应性鼻炎伴嗜酸性粒细胞增多症（nonallergic rhinitis with eosinophpilia,NARES）患者,20例正常人作为对照组。采集一般病史,视觉模拟量表评分法评估患者鼻部症状的严重程度,并填写鼻-结膜炎相关生活质量问卷,采用NIOX测量鼻呼出气。以布地奈德鼻喷雾剂（64 μg/喷/鼻）喷鼻治疗,2次/天,持续治疗4周,并于2周和4周时复查,再次评估症状、生活质量及鼻腔NO水平。结果　变应性鼻炎患者鼻NO水平明显高于NARES患者[（1053±137）ppb vs（741±65）ppb,P <0.001）];对比正常对照组[（838±79）ppb）],两组患者鼻NO水平较之分别表现为升高和降低,且差异具有统计学意义（P 均<0.001）。经鼻用布地奈德鼻喷雾剂治疗2～4周后,变应性鼻炎患者表现为鼻NO浓度降低,而NARES患者表现为鼻NO升高,且同组治疗前、后差异有统计学意义（P <0.001,P <0.05）。治疗2～4周之后,变应性鼻炎及NARES患者鼻NO水平持续向对照组接近,同时,患者的鼻部症状评分及生活质量评分明显改善。结论　变应性鼻炎和非变应性鼻 炎患者分别表现为NO浓度升高和降低;经鼻用糖皮质激素喷雾治疗后,两组患者鼻腔NO浓度向正常人水平回归。鼻腔NO水平改变可以作鼻炎患者炎症控制的指标。     

钩突上端和鼻丘气房的解剖学和影像学观察

目的 通过观察钩突上端和鼻丘气房的解剖关系，进一步阐明鼻丘径路鼻内镜下额窦开放手术的解剖学基础。方法 鼻内解剖标志完整的成人颅骨21个（42侧）和成人尸头1个，①鼻内镜观察颅骨钩突前上端与中鼻甲和鼻腔外侧壁的毗邻关系；②16排螺旋CT扫描（层距0．300mm，层厚0．625mm）结合三维重建技术（层厚0．625mm），观察颅骨钩突前上端与鼻丘气房的关系，以及钩突上端的附着点，同时测量鼻丘气房的前后径、横径和高度；③火棉胶包埋后冠状位薄层（100μm）断层经苏木精伊红染色后，观察成人尸头钩突前上端的毗邻关系。结果 ①鼻内镜下中鼻甲垂直板前缘中部与钩突前缘上部相互融合，在中鼻道前端顶部与鼻腔外侧壁间形成骨性穹隆；钩突前上缘除附着于上颌骨额突（42侧，100％）外，多数还同时附着于上颌骨额突后方的泪骨（33侧，78．6％）。②冠状位CT显示钩突上端的附着点可位于眶内壁、颅底或中鼻甲（垂直板）上，单一钩突上端附着点的位置，多数位于眶内壁上（33．3％），额窦在该平面经钩突上端内侧引流人中鼻道；其余附着于颅底（9．5％），额窦在该平面经钩突上端外侧引流入筛漏斗。2个附着点的钩突，多数附着于眶内壁和颅底（31．0％）；少数附着于眶内壁和中鼻甲（21．4％）。③多数鼻丘（90．5％）含1～2个气房，钩突参与组成鼻丘气房的内、下和上壁，左侧和右侧钩突的横径、高度以及前后径均无显著性差异。④尸头冠状位连续断层的观察结果与鼻内镜下和CT观察结果一致。结论 钩突上端参与组成鼻丘气房，并与中鼻甲前端形成骨性连接。通过开放鼻丘气房可从前下部疏通额窦引流通道。