颞骨矢状位组织切片与CT图像对照研究

目的制作颞骨矢状位数字化火棉胶薄层断层数据集,CT片与HE染色照片进行对照观察,为临床影像学诊断及手术入路设计提供参考。方法用2例尸头标本进行螺旋CT扫描后制作侧颅底区标本,火棉胶包埋后,用大型轮式切片机沿矢状位切片,厚度100μm,每切一片均采用SonyF-717数码照相机(500万像素)摄影并保存在计算机。选取代表性层面的切片进行HE染色。将断层数码照片与HE染色照片和CT片进行对照观察,对代表性层面结构特点进行描述,包括鼓窦入口层面、面神经锥曲层面、前庭窗层面、蜗窗层面、内耳道底层面。结果获取颞骨完整矢状位数字化薄层断层数据集2套。火棉胶断层照片与CT图像有良好的对应关系,连续观察可以对结构毗邻关系深入理解。火棉胶组织学断层切片为影像学断层片结构的识别提供重要参考。矢状位可以较好显示面神经垂直段行程以及面神经锥曲段与水平半规管之间的关系,对锤砧关节、前庭导水管、颈静脉窝、颈内动脉、内耳道内神经等的显示有优势。结论矢状位组织切片与CT对照研究有助于颢骨三维立体结构和中耳乳突手术入路的理解,HE染色照片可以帮助火棉胶断层图像结构的准确识别,二者结合可以指导CT读片,为影像诊断和手术定位提供有价值的参考。     

呼吸道纤毛上皮细胞的组织块法培养

目的建立组织块法呼吸道纤毛上皮细胞原代培养模型,观察细胞生长分化情况,为深入研究黏液纤毛传输系统提供方法学基础。方法应用组织块法在鼠尾胶原上培养兔气管纤毛上皮细胞,对培养7天的标本行苏木素-伊红染色、黏蛋白5AC(mucin-5AC,MUC5AC)单克隆抗体免疫组织化学染色、扫描电镜及透射电镜观察、纤毛摆动频率测量。结果①细胞培养7天后可以见到大量的纤毛细胞和杯状细胞,纤毛形态正常,摆动活跃;②苏木素-伊红染色和黏蛋白MUC5AC单克隆抗体免疫组织化学染色可见分化良好的纤毛细胞和杯状细胞;③扫描电镜及透射电镜观察见纤毛细胞分化良好,纤毛形态正常;④(30±1)℃下测得纤毛摆动频率为(13.2±0.9)次/s。结论应用组织块法进行兔气管纤毛上皮细胞培养,可以得到分化良好的纤毛细胞和杯状细胞,纤毛摆动活跃,可应用此模型对黏液纤毛传输系统进行深入研究。     

免疫组化技术在实验动物组织中的应用体会

医学研究领域中常应用实验动物建立具有人类疾病模拟表现的疾病动物模型，这是人类认识自身疾病发生、发展规律和研究防治措施的重要途径。当科研人员利用实验动物完成疾病造模后，往往采用免疫组化技术对动物组织进行鉴定，以检测疾病造模效果，并从中总结出规律性的东西为人类健康服务。但是在以往实验动物组织的免疫组化实验中存在一些问题，下面就相关问题谈点我们的思考和体会。     

细胞连接在慢性鼻窦炎中的表达及意义

目的 探讨3种细胞连接蛋白在不同类型慢性鼻窦炎中的表达情况及其对上皮屏障功能改变的意义.方法 共66例患者,其中慢性鼻窦炎伴息肉者30例,分为嗜酸性粒细胞性鼻息肉组（15例）、非嗜酸性粒细胞性鼻息肉组（15例）,慢性鼻窦炎不伴息肉组15例,正常对照组为鼻中隔偏曲患者共15例.用免疫组织化学染色检测各组中紧密连接蛋白（zonular occludens-1,ZO-1）、黏附连接蛋白（E-cadherin）和桥粒连接蛋白（desmoglein-1,dsg-1）的表达情况.结果 ZO-1的表达中,嗜酸性粒细胞性鼻息肉组与正常对照组相比有明显下降（P〈0.05）.E-cadherin的表达中,鼻息肉组和慢性鼻窦炎不伴息肉组与对照组相比呈明显上调表达（P〈0.05）,而dsg-1呈明显下调表达（P〈0.05）,并且鼻息肉组dsg-1的表达与慢性鼻-鼻窦炎不伴息肉组相比也呈明显下调表达（P〈0.05）.结论 3种不同类型的细胞连接蛋白在慢性鼻-鼻窦炎中的表达均有不同程度的改变,说明连接蛋白表达的改变与上皮屏障功能的破坏可能在慢性鼻窦炎的发病机制中发挥重要的作用.     

水通道蛋白5在过敏性鼻炎黏膜过度表达及其对腺体分泌的影响

目的　探讨水通道蛋白1（aquaporins 1,AQP1）和水通道蛋白5（AQP5）在过敏性鼻炎鼻黏膜的表达。方法  采集15例鼻内镜手术患者的鼻黏膜组织,其中9例过敏性鼻炎和6例正常对照。小鼠的鼻黏膜组织来源于过敏性鼻炎模型小鼠（10例）和正常对照小鼠（10例）,所有鼻黏膜组织一部分经石蜡固定后用于HE、PAS染色及免疫组化分析,一部分患者鼻黏膜组织提取RNA后用于RT-PCR半定量分析。结果　免疫组化染色显示AQP1主要表达在鼻黏膜的血管内皮细胞和结缔组织;AQP5主要表达在鼻黏膜的上皮细胞、基底细胞和腺细胞;且AQP5在过敏性鼻炎（患者42.7±13.2,小鼠14.1±5.3）鼻黏膜的浆液腺表达显著高于对照组（9.3±3.6,3.6±2.5,P <0.01）。RT-PCR结果显示,与正常对照组（0.098±0.03）相比,AQP5的mRNA水平在过敏性鼻炎患者（0.236±0.08）的鼻黏膜表达增加,差异具有统计学意义（t =3.203,P <0.01）;而AQP1的mRNA水平在过敏性鼻炎组（0.048±0.032）和正常对照组（0.051±0.024）未见显著差异（t =1.584,P >0.05）。结论　AQP1和AQP 5表达在鼻黏膜不同位置;AQP5在过敏性鼻炎表达增加,与过敏性鼻炎鼻黏膜的浆液腺分泌密切相关。     

喉鳞癌瘤内微血管及微淋巴管形态计量研究及临床意义

目的:研究喉鳞癌瘤内微血管和微淋巴管形态、分布、密度,以及相关临床意义。方法:采用5’-Nase-AlPase双重酶组织化学法和HE染色对40侧喉鳞癌标本冰冻切片进行研究。结果:光镜下微血管呈蓝色,微淋巴管呈棕色。除转移组微血管密度显著高于未转移组外,与其余临床指标均未见相关性。结论:瘤内微血管密度与淋巴转移有明显相关,而微淋巴管密度未发现明显临床意义,其机制待深入研究。     

转化生长因子β1与其Ⅱ型受体在喉癌中的表达及生物学意义

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)及其Ⅱ型受体(TβRⅡ)在喉癌中的表达情况及其生物学意义.方法采用免疫组化SP法对53例喉癌和48例癌旁组织中TGF-β1、TβRⅡ的表达情况进行检测.结果喉癌TGF-β1的表达明显低于癌旁组织(P<0.05).TβRⅡ的表达与癌旁组织对照差异无显著性意义(P>0.05),但与肿瘤组织分化程度、临床分期和淋巴结转移密切相关.结论TGF-β1 和TβRⅡ参与调控喉癌的发生、发展和转移过程,TGF-β1和TβRⅡ是监测喉癌的有用指标.     

喉癌组织HSP70的检测

目的 检测HSP70在喉癌中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化SP法对53例喉癌(有癌旁组织对照48例)HSP70表达情况进行研究。结果 喉癌组织HSP70多为过度表达,其过度表达率为50.9％,癌旁组织为27.1％,两者差异有统计学意义(P<0.05);喉癌组织HSP70表达与组织分化有关(P<0.05),但与喉癌的临床分期、发生部位、有无淋巴结转移、病人年龄、性别均无关(P>0.05)。结论 HSP70与喉癌的恶性程度密切相关,可用于喉癌的预后评估。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂系统在喉癌中的表达及意义

目的　探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂及其抑制剂在喉癌中的表达及与临床病理各参数及预后的关系。方法　采取免疫组化链霉卵白素生物素过氧化酶法 (labeled streptoavidin biotin peroxidase,SAB)法 ,对 10 4例喉鳞状细胞癌标本中的尿激酶型纤溶酶原激活剂 (urokinase typeplasminogenactivator,uPA)、抑制剂 (plasminogenactivatorinhibitors ,PAI)PAI 1和PAI 2表达情况进行检测。结合临床随访 ,经Kaplan Meier生存曲线、log rank检验及Cox比例风险模型分析其与临床病理参数及患者生存预后的关系。结果　uPA、PAI 1、PAI 2在喉癌组织中的表达分别为 66 3 %、70 2 %、5 0 0 %。uPA、PAI 1、PAI 2的阳性表达在颈部淋巴结转移组与非转移组中差异有显著性 ,经半定量分析P值分别为 0 0 10、0 0 2 7、0 0 3 8。单因素分析显示 :淋巴结转移及复发、肿瘤细胞分化程度、uPA和PAI 2表达是影响患者预后的因素。多因素分析提示 :淋巴结转移及复发、临床分期、uPA和PAI 2是影响患者预后的独立因素。结论　uPA在喉癌转移中起着重要的作用 ;PAI 1的作用复杂 ,可能不单纯是uPA的抑制剂 ;PAI 2可能是uPA主要抑制剂 ,由于其表达不足尚不能抑制uPA的活性     

内耳转基因表达的实验研究

目的　了解内耳转基因表达的可行性。方法　将人复制缺陷重组腺病毒基因(Adenoviruses ,Ad ,含大肠杆菌 β 半乳糖苷酶基因LacZ基因 ,Ad5 LacZ)经豚鼠耳蜗蜗窗接种到鼓阶外淋巴后 ,观察在不同时间、不同内耳组织中LacZ基因的表达 (X Gal染色 )及Ad对豚鼠声反应 (听性脑干反应 )、听毛细胞 (扫描电镜 )的影响。结果　Ad介导的LacZ基因在内耳组织中的表达至少可持续 4周 ,其中在螺旋神经节细胞表达稳定 ,Corti器、前庭囊斑、壶腹嵴的毛细胞等也有较强的表达。Ad未对豚鼠声反应 (≤ 80 0 0Hz)造成明显的损伤 ,除耳蜗底回外 ,其余各回未见明显的毛细胞缺失。结论　腺病毒载体可成功地将LacZ基因转导致豚鼠内耳组织中 ,并且未对豚鼠声反应 (低、中频 )及听毛细胞造成明显损伤 ,这对未来的内耳基因治疗研究可能具有重要的参考价值。