热休克预处理抗过氧化氢所致心肌细胞损伤保护作用的细胞分子…

体外培养的鸡胚心肌细胞分别置于３７℃，３９℃，４２℃下进行预处理，ＳＤＳ－ＰＡＧＥＮｏｒｔｈｅｒｍｂｌｏｔ及Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ显示４２℃预处理２ｈ导致心肌细胞中热休克蛋白（ＨＳＰｓ）特别是ＨＳＰ７０基因表达明显增加，并明显减轻了随后Ｈ２Ｏ所致的心肌细胞损伤，表现为较高的细胞存活率，较高的ＳＯＤ及过氧化氢活性及较低的ＴＢＡＲＳ水平，而３９℃２ｈ的热休克预处理未能获得上述结果，在转录抑制剂放经菌素Ｄ     

用cDNA微阵列研究内毒素休克小鼠基因表达谱的改变

感染性休克的发病机制十分复杂 ,涉及多种组织、细胞的激活及大量炎症介质的表达。以往的研究常限于测定单个炎症介质的表达或分析单一细胞内信号转导途径的作用 ,难以获得对感染性休克的全面而系统的认识。因此 ,其发病机制至今尚未完全阐明 ,死亡率仍高达 40 %～ 6 0 %。本研究采用Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司生产含 1176个基因的ｃＤＮＡ微阵列膜 (ＡｔｌａｓＴＭ Ｍｏｕｓｅ 1.2Ａｒｒａｙ)研究内毒素休克小鼠基因表达谱的改变。Ｂａｌｂ/ｃ小鼠经腹腔注射大肠杆菌内毒素 (15ｍｇ·ｋｇ-1) 2 0ｈ后 ,摘取心、肝、肺、肾、脑等组织 ,提取总ＲＮＡ ,经反转录及α 3 2 ｐ ｄＡＴＰ掺入合成ｃＤ     

αB-晶状体蛋白在保护过氧化氢所致心肌细胞损伤中的作用

采用热休克对新生大鼠心肌细胞进行预处理 ,以诱导αB 晶状体蛋白的表达 ,并观察其对 1mmol·L- 1 的过氧化氢 (H2 O2 )所致心肌细胞损伤的保护作用。发现 :热休克预处理组心肌细胞中αB 晶状体蛋白表达明显增加 ,H2 O2 所致的细胞死亡率及LDH释放率降低 ,总抗氧化能力增强 ;H2 O2 可引起αB 晶状体蛋白从胞浆向胞核及微丝移位。提示热休克预处理的心肌细胞保护作用与其诱导αB 晶状体蛋白的表达增加有关。αB 晶状体蛋白可能通过细胞内移位 ,保护某些核结构 ,稳定细胞骨架 ,并增强心肌细胞抗氧化能力 ,从而发挥其保护作用     

短暂缺血再灌注对大鼠心肌Krppel样因子4表达的影响

目的观察大鼠心肌短暂缺血再灌注及相应的细胞氧化应激反应对Krppel样因子4表达的影响。方法采用短时间结扎及松解左冠状动脉前降支法构建大鼠心肌短暂缺血再灌注动物模型;采用过氧化氢(1mmol/L)处理C2C12肌原细胞法复制相应的氧化应激细胞模型;采用逆转录聚合酶链反应检测Krppel样因子4mR-NA的表达;采用蛋白免疫印迹法检测Krppel样因子4蛋白的表达。结果短暂缺血再灌注后,大鼠心肌组织中Krppel样因子4mRNA的水平明显增加;过氧化氢处理C2C12肌原细胞后,Krppel样因子4mRNA和蛋白的水平均明显增加。结论大鼠心肌短暂缺血再灌注及相应的细胞氧化应激反应均能显著诱导Krppel样因子4的高表达。     

αB-晶状体蛋白与凋亡相关蛋白相互作用抑制C2C12细胞凋亡

目的 探讨aB-晶状体蛋白抗心肌细胞凋亡的分子机制。方法构建带6个串联组氨酸的aB-晶状体蛋白表达质粒(pcDNA3.1一aBC)，经测序证实后，转染C2C12肌原细胞株，筛选稳定高表达aB-晶状体蛋白的细胞株。采用H2O2(0.5mmol/L)诱导细胞凋亡，检测线粒体细胞色素C释放率和细胞膜磷脂酰丝氨酸细胞色素荧光     

大鼠心肌缺血预适应延迟相的差异蛋白质的分离及鉴定

目的采用蛋白质组学技术探讨缺血预适应心肌内源性保护的分子机制。方法应用双向凝胶电泳技术分离假手术组和心肌缺血预适应延迟相组大鼠的心肌总蛋白质。结果在假手术组的双向凝胶电泳图谱上展示704±27个蛋白质点,而在心肌缺血预适应延迟相组展示778±35个蛋白质点。经凝胶图像分析找到的差异蛋白质23个,基质辅助激光解析—电离飞行时间质谱对差异蛋白进行鉴定,共鉴定出12个蛋白质。这些蛋白质包括应激反应蛋白、代谢相关蛋白、信号调节蛋白、结构蛋白等。结论这些差异蛋白可能通过其分子伴侣功能、清除自由基、改善能量代谢等发挥心肌缺血预适应延迟相的心肌保护作用。     

HSF1基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞的永生化

目的：建立HSF1^-/-，HSF1^＋/＋两种基因型小鼠胚胎成纤维永生化细胞系，为HSF1的功能研究提供实验模型。方法：用脂质体介导的基因转染法将pSV3neo质粒导入HSF1^-/-，HSF1^＋/＋两种基因型小鼠胚胎成纤维细胞，经G418筛选，抗性克隆扩大培养，建立永生化细胞系；用PCR检测两种细胞株中目的基因的整合，用RT—PCR法鉴定SV40T基因在转染细胞中的表达；用Western blot检测所建细胞株的诱导型热休克蛋白70的表达情况。结果：有3个细胞克隆已扩大培养稳定传代达6个月，经鉴定SV40T抗原已整合到两种细胞中且稳定表达，HSF1^-/-胚胎成纤维细胞热休克蛋白70的诱导表达消失。结论：成功建立永生化HSF1^-/-，HSF1^＋/＋两种基因型小鼠胚胎成纤维细胞。     

新基因MIP2的克隆和特性分析

目的 克隆1个大鼠心肌缺血-再灌诱导表达上调的新基因MIP2,并分析其相关特性.方法 采用生物信息学方法.克隆了1个大鼠心肌缺血-再灌诱导表达上调的新基因MIP2,分析了新基因的若干特性:采用PCB从cDNA文库中克隆MIP2的开放阅读框.结果 MIP2定位于大鼠染色体1q42.12,含14个外显子和13个内含子,开放阅读框(ORF)为1 497 bp,编码498个氨基酸.在其编码蛋白的N-端含1个CTLH结构域.C-端有5个WD重复序列;MIP2的开放阅读框经测序证实与预测的完全一样;多组织膜RNA印迹证实了MIP2转录本的存在,且显示该基因在心与骨骼肌表达最高.其次是脾和睾丸,在其他组织表达较低或无表达.结论 成功克隆了1个大鼠心肌缺血一再灌诱导表迭上调的新基因MIP2.     

运用酵母双杂交系统筛选肌营养不良相关蛋白2(DRP2)相互作用蛋白

目的应用酵母双杂交系统筛选小鼠、大鼠、人类大脑文库中与DRP2相互作用的蛋白,分析中枢神经系统中DRP2分子复合体的组成成分。方法设计3个含有DRP2不同蛋白结构域的诱饵质粒,在完成诱饵质粒的自激活性的鉴定后,对小鼠、大鼠、人类脑MATCHMAKER cDNA文库进行筛选。结果运用DRP2蛋白N-Bait筛选大鼠脑MATCHMAKER cDNA文库,笔者获得了一个阳性文库质粒。该质粒的插入子编码一种SNAP25相互作用的蛋白质Scoilin。Scoilin又被命名为Zwint-1蛋白。同时笔者还确定了这两种相互作用蛋白质的精确结构域:DRP2蛋白以其含有两个Spectrin重复和一个WW蛋白结构域的氨基端与Scoilin(Zwint-1)全蛋白相互作用。结论应用酵母双杂交,笔者于大鼠大脑中找到了DRP2的相互作用的蛋白质Scoilin(Zwint-1),并且确定了这两种相互作用蛋白质的精确结构域。     

医学八年制学生科研创新能力的培养

科研创新能力的培养,对医学八年制学生来说是非常重要的,是其基本素质和发展潜力培养的一个关键环节,关系到他们能否适应21世纪国际医学的科技竞争。如何提高八年制医学生科研创新能力,是当前医学教育工作者共同关心与探讨的问题。中南大学湘雅医学院国家级重点学科、国家级精品课程病理生理学在这方面进行了长期有效的探索,提出了探索性实验教学模式。以一种＂短、平、快＂的培养模式,较好地弥补了八年制学生科研创新能力培养全面性和系统性的不足。