膀胱癌中Ha－ras癌基因点突变和ras P21表达的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术和寡聚核甘酸探针杂交法检测膀胱癌中Ｈａ－ｒａｓ癌基因第１２位密码子Ｇ→Ｔ突变，同时应用免疫组织化学方法检测了ｒａｓＰＺＩ在膀胱癌中的表达。在２９例膀胱癌中有１０例存在Ｈａ－ｒａｓ癌基因第１２位密码子点突变，突变率为３４．５％，有１８例ｒａｓＰ２１表达为阳性，阳性率为６２．１％。结果提示Ｈａ－ｒａｓ癌基因第１２位密码子点突变和ｒａｓＰ２１的表达与膀胱癌病理分级、临床分期和膀胱癌的复发密切相关。Ｈａ－ｒａｓ癌基因第１２位密码子点突变与ｒａｓＰ２１的表达是一致的。     

CO2激光联合5-Fu局部用药治疗男性尿道口尖锐湿疣临床研究

我科1994年8月～2002年12月采用CO2激光联合2．5％5-Fu液局部用药治疗男性单纯尿道口CA，取得较好效果。     

腹膜后纤维化的临床诊治分析

目的　为了提高对腹膜后纤维化的诊断和治疗水平。方法　总结我院1975年2月至2001年12月收治的腹 膜后纤维化患者36例,男20例,女16例。原发者12例,继发恶性肿瘤者10例,继发于肿瘤放疗后14例。手术治疗28 例,术前术后均加用激素。结果　随访6～42个月,术后肾功能均有改善或恢复正常,预后良好,仅4例继发于恶性肿瘤患 者死亡。结论　对于腹膜后纤维化引起的肾积水,尽早手术解除梗阻,引流尿液是有效的治疗方法。     

MUC1抗原的表位预测及模拟位的筛选

目的预测MUC1抗原的B细胞表位,从噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟位.方法联合运用多种方法对MUC1的二级结构和表面特性,如理化性质、亲水性、可塑性、溶剂可及性及免疫原性等方面进行分析,预测MUC1的抗原表位.利用纯化获得的BC2抗体筛选噬菌体随机7肽库,夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列,竞争性抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆.结果MUC1存在有多个潜在的抗原表位位点,可能的蛋白质抗原表位区域:1-10,24-54,65-77,84-91,108-134,140-156,159-174,179-196,199-210,220-233,237-265,270-299,316-337,351-362,369-396,411-420,445-502.经3轮筛选,获得了30个阳性克隆,DNA序列分析并推导出氨基酸序列:TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP 4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上.结论应用多参数预测MUC1抗原的B细胞表位,为进一步研究MUC1结构和功能、选择表达新型MUC1分子奠定了基础.所得序列TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP模拟MUC1抗原表位.     

胰肾一期联合移植手术方法探讨

目的：探讨胰肾一期联合移植手术方法中有关问题。方法：采用原位低温灌注,整块切除的方法切取供胰。将供胰移植于病人的右侧髂窝,供肾移植于左侧髂窝,供体十二指肠与受者的膀胱侧侧吻合。结果：5例病人中,3例术后胰腺及肾脏功能满意,未使用胰岛素,进正常饮食, 血糖一直在正常范围,肾功能良好,至今已分别生存20月、14月、11月。其中2例中,1例因排排斥反应,于术后第47天死于急性心功能衰竭。另1例因栓形成,于术后第33天切除移植胰腺,但肾功能良好。结论：胰肾联合移植是治疗I型糖尿病伴肾功能衰竭的有效方法之一。     

P-糖蛋白胞外段的高效表达

目的　研究P 糖蛋白胞外段基因表达。　方法　运用化学法和酶法相结合的技术合成P 糖蛋白基因 ,并克隆到融合型表达载体pGEX 2T进行表达。　结果　SDS PAGE分析可见相对分子质量约 2 90 0 0的融合蛋白带 ,融合蛋白占细胞内总蛋白的 38%。　结论　此基因片段高效表达 ,为进一步制备其抗体或筛选其特异性结合肽 ,进行多药耐药靶向治疗等工作提供了试验依据。     

肾血管平滑肌脂肪瘤25例临床分析

肾血管平滑肌脂肪瘤(renal angiomyolipoma,AML)又名肾错构瘤,是较少见的肾良性肿瘤.近年随着B超、CT的广泛应用,早期发现和确诊此症已不困难,手术治疗是主要的治疗手段.作者收集了1987年1月至2001年6月25例AML病案,现回顾性分析报告如下.     

HSP27基因的克隆与表达

目的构建热休克蛋白27(Heat shock protein 27,HSP27)真核表达质粒以用于肾脏缺血预适应(ischemia Preconditioning,IP)的作用及机制研究.方法利用乳腺癌细胞系MCS-7,用RT-PCR方法扩增HSP27全长基因,将HSP27基因克隆到真核表达载体pAAV-MCS中.重组质粒转染NIH3T3细胞,Western blot法鉴定重组质粒HSP27/pAAV-MCS能在哺乳动物细胞中正确表达.结果RT-PCR方法正确地扩增出全长HSP27基因.限制性内切酶酶切和测序结果证实HSP27基因克隆完全正确.重组质粒转染哺乳动物细胞系NIH3T3后,ECLWestern blot法证实了目的基因能在其中正确表达.结论成功地克隆真核表达重组质粒HSP27/pAAV-MCS,为下一步研究HSP27对肾脏缺血预适应的作用及其机制打下了基础.     

人膀胱癌多重抗药性逆转的实验研究

为探讨膀胱癌多重抗药性逆转机理，应用阿霉素（ＡＤＭ）大剂量短暂冲击结合低浓度持续递增法，获得了具有多重抗药性的ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞。通过测定细胞内ＡＤＭ聚积量和钙离子浓度，发现ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞内ＡＤＭ聚积量显著低于ＢＩＵ８７细胞（Ｐ＜００５）；维拉帕米（ＶＰＬ）、奎宁能使ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞内ＡＤＭ聚积量增加（Ｐ＜００５），两者协同应用基本上可逆转ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞的抗药性。结果表明：（１）细胞内ＡＤＭ聚积量减少是抗药细胞的重要变化，在细胞抗药性发生机理中可能起主导作用，（２）ＶＰＬ、奎宁能逆转ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞的抗药性，可能与增加细胞内ＡＤＭ聚积量有关，与钙通道无关。     

人膀胱癌P-糖蛋白结合肽的筛选

目的：寻找人膀胱癌P-糖蛋白特异性结合肽。方法：利用表达获得的P-糖蛋白胞外段融合蛋白为靶蛋白，采用酶联板法筛选噬菌体随机12肽库，免疫细胞化学方法进行鉴定。结果：从噬菌体随机肽库中筛选获得与P-糖蛋白特异性结合的噬菌体阳性克隆，测序获得特异性结合肽序列。免疫细胞化学结果显示：筛选得到的噬菌体阳性克隆可与耐药细胞BIU-87／ADM结合，而与敏感细胞BIU-87不结合。筛选获得的结合肽具有亲和力，表现出一定的肿瘤特异性。结论：P-糖蛋白结合肽的筛选，为人膀胱癌多药耐药的靶向治疗提供了实验依据。