非小细胞肺癌组织中高表达的miR-1269 对肺癌细胞A549 生物学行为的影响

目的:探讨miR-1269 在非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer, NSCLC）组织中的表达和对人NSCLC A549 细胞生物学特性的影响及其作用机制。方法：选取2017 年1 月至2018 年1 月在河北医科大学第四医院胸外科进行首次手术切除的34例新鲜NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织,应用qRT-PCR 检测NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织中miR-1269 的表达水平。将miR-1269 mimics 和mimics NC转染至A549 细胞后,应用MTS实验、细胞划痕实验和Transwell 实验检测A549 细胞增殖、迁移和侵袭能力,流式细胞术检测其细胞周期的变化。生物信息学软件预测miR-1269 的靶基因,并通过Western blotting 和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269 对靶基因的调控作用。采用Western blotting 检测已转染的A549 细胞的细胞周期依赖性激酶抑制剂p21、细胞周期蛋白D2 以及上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白ZEB2 和E-cadherin 的表达情况。结果：NSCLC癌组织中miR-1269 的表达水平显著高于对应的癌旁组织（2.81±2.27 vs 1.61±1.36,P<0.05）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著高于空白对照组和mimics NC转染组（均P<0.01）。转染miR-1269-mimics 的A549 细胞S期细胞比例明显高于mimics NC转染组[ （46.54±1.57）% vs（23.32±3.15）%,P<0.01]。miR-1269 可与FOXO1 基因3’端非翻译区的结合位点相结合,且过表达miR-1269 后,A549 细胞中FOXO1 的表达水平及荧光素酶报告基因的活性均明显降低（均P<0.01）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞中p21、E-cadherin 蛋白表达水平降低（均P<0.05）,而CyclinD2、ZEB2 蛋白表达水平升高（均P<0.05）。结论：miR-1269 在NSCLC组织中表达上调,并且能够促进A549 细胞的增殖、迁移、侵袭能力和影响细胞周期进程;其作用机制可能与靶向调控抑癌基因FOXO1 的表达有关。     

术前及术后贫血对肺大细胞神经内分泌癌患者预后的影响

目的 探讨术前及术后贫血对肺大细胞神经内分泌癌（LCNEC）患者预后的影响。方法 选取2007年7月-2013年7月于河北医科大学第四医院胸外科治疗的LCNEC患者44例为研究对象,收集患者临床特征资料。以手术日期为观察起点,死亡为临床终点事件计算生存期,随访至2014年8月。结果 不同性别、年龄、吸烟史、肿瘤直径、病理类型、TNM分期、手术方式以及是否发生术前及术后贫血、淋巴结转移患者生存时间比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Cox比例风险回归模型分析结果显示,年龄〔HR=6.751,95%CI（3.576,15.438）〕、吸烟史〔HR=3.438,95%CI（1.053,6.538）〕、病理类型〔HR=10.643,95%CI（6.634,21.982）〕、术前贫血〔HR=0.043,95%CI（0.027,0.051）〕、术后贫血〔HR=8.451,95%CI（4.885,9.372）〕、手术方式〔HR=2.334,95%CI（1.658,21.575）〕是LCNEC患者预后的影响因素（P＜0.05）。结论 术前及术后贫血与LCNEC患者预后有关。     

香加皮杠柳苷联用TRAIL对胃癌SGC-7901和MGC-803细胞的作用及其机制

目的:探讨香加皮杠柳苷(cortex periplocae,CPP)联用肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对胃癌细胞的作用及其机制.方法:人胃癌细胞系SGC-7901、MGC-803培养完成后,采用50、100、200 ng/ml的CPP和1μg/ml的TRAIL单用或联合处理.MTS法检测SGC-7901和MGC-803细胞的增殖情况,流式细胞术检测其凋亡率,Westcm boltting检测pro-BID、Mcl-l、cleaved caspase-3、DR4、DR5的表达水平.结果:SGC-7901和MGC-803细胞经CPP (50、100、200 ng/ml)和TRAIL(1 μg/ml)联合处理24 h后,细胞增殖率明显低于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(/＜0.05或P＜0.01).SGC-7901和MGC-803细胞凋亡率均明显高于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(P＜0.05或P＜0.01).SGC-7901和MGC-803细胞中pro-BID、Mcl-1表达水平明显降低(均P＜0.05),cleaved caspase-3表达水平明显升高(P＜0.05),DR4和DR5受体的表达水平升高(均P＜0.05).结论:CPP协同TRAIL可明显诱导人胃癌SGC-7901和MGC-803细胞凋亡,增强人胃癌细胞对TRAIL的敏感性.     

肉桂醛诱导食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞凋亡作用及机制研究

目的探究肉桂醛对食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞增殖活性及凋亡的作用,并探讨其机制。方法 MTS实验检测不同质量浓度(1.88、3.75、7.50、15.00、30.00μg/m L)肉桂醛对Eca109细胞增殖活性的影响;倒置相差显微镜观察Eca109细胞形态学变化;流式细胞术检测不同质量浓度肉桂醛对Eca109细胞周期分布和凋亡的影响;Westernblotting检测不同质量浓度肉桂醛作用24h对Eca109细胞凋亡相关蛋白Caspase-3/Caspase-9、促凋亡蛋白Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达水平的影响。结果质量浓度为15.00、30.00μg/m L的肉桂醛作用Eca109细胞24 h后,与对照组相比,肉桂醛组细胞增殖活性显著降低(P0.05);经肉桂醛作用后,Eca109细胞呈现明显的凋亡形态学变化;经不同质量浓度肉桂醛处理Eca109细胞24 h后,G0/G1期细胞比例明显下降(P0.05),而G2/M期细胞比例明显增加(P0.05);肉桂醛处理Eca109细胞24h后,细胞凋亡率明显上升(P0.05);与对照组相比,经不同质量浓度肉桂醛处理24 h后,Eca109细胞中凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9出现明显的裂解片段(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达水平显著降低(P0.05),而促凋亡蛋白Bax表达明显上调(P0.05)。结论肉桂醛可抑制食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与上调凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9、促凋亡蛋白Bax表达,以及下调抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1表达有关。     

中药木鳖子乙醇提取物对羟基桂皮醛对小鼠的毒性

目的：检测中药木鳖子乙醇提取物对羟基桂皮醛（CMSP）的毒性,为其应用于临床肿瘤治疗提供毒理学依据。方法：60只昆明小鼠（4~6周龄,雌雄各半）分为空白对照组,CMSP 200 mg/kg和400 mg/kg染毒组,每组20只,采用腹腔注射的方式染毒,每周3次,每次100 μL,连续28 d。观察各组小鼠一般状态,28 d后,处死小鼠,摘眼球取血,采用全自动血细胞分析仪及全自动生化分析仪检测小鼠血常规、肝肾功能和心肌酶谱等生化指标,并计数雄性小鼠精子畸形率,同时采用HE染色观察各组小鼠重要脏器组织的病理改变。观察骨髓细胞微核形成率。结果：观察期内无小鼠死亡,各组小鼠血常规指标、雄性小鼠精子畸形率与对照组相比,差异均无统计学意义（P > 0.05）,高剂量CMSP组小鼠外周血ALT和AST较对照组高（P < 0.05）,肾功能及心肌酶谱无明显差异（P > 0.05）。HE染色结果显示各组小鼠内脏组织均未观察到肉眼可见的病理改变。小鼠骨髓细胞微核形成率亦无明显变化（P > 0.05）。结论：在本研究中,我们发现CMSP具有相对较小的毒性作用,因此可考虑应用于肿瘤临床治疗中,但在后续研究中需充分关注其可能具有的肝功能损伤作用。     

miR-1269a 在食管癌组织中的表达及其对KYSE30 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨miR-1269a 在食管癌组织中的表达及其对KYSE30 细胞恶性生物学行为的影响,并研究其可能的作用机制。方法：选取90 例在河北医科大学第四医院通过手术切除的食管癌组织标本,并收集正常食管永生化上皮细胞和食管癌细胞系,应用qPCR 实验检测癌组织和细胞系miR-1269a 的表达水平。将miR-1269a 的mimics 和inhibitor 分别转染食管癌细胞KYSE30 后,用MTS、Transwell 和克隆形成实验分别检测miR-1269a 对KYSE30 细胞增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力的影响。通过生物信息学软件预测miR-1269a 的靶基因,并通过WB实验和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269a 对靶基因的调控作用。转染SOX6 质粒后,采用MTS、Transwell 和克隆形成实验分别检测SOX6 对KYSE30 细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力的影响,并利用回复实验进一步验证结果。结果：食管癌组织中miR-1269a 的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）;与正常食管上皮细胞相比,食管癌细胞系中miR-1269a 的表达水平显著升高（P<0.05 或P<0.01）。miR-1269a mimics 转染组KYSE30 细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力显著高于mimics NC组（P<0.05 或P<0.01）;inhibitor 转染组KYSE30 细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力显著低于inhibitor NC组（P<0.05 或P<0.01）。miR-1269a 可与SOX6 的3’UTR区相结合,且过表达miR-1269a 后,KYSE30细胞的SOX6 表达水平和荧光素酶报告基因的活性均显著降低（P<0.05）。回复实验表明,高表达miR-1269a 可以促进食管癌细胞增殖、侵袭和迁移（P<0.05 或P<0.01）,同时高表达SOX6 后,miR-1269a 的促进作用出现部分逆转。结论：miR-1269a 在食管癌组织和细胞系中表达上调,能够促进KYSE30 细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成等恶性生物学行为,其机制可能是通过抑制靶基因SOX6 实现的。     

膀胱癌组织中高表达的MTA2 促进膀胱癌细胞T24 的恶性生物学行为

［摘要］ 目的：分析肿瘤转移相关蛋白（MTA2）在人膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞系T24 恶性生物学行为的影响,探讨MTA2 对膀胱癌进展中的作用。方法：收集河北省人民医院2012 年12 月至2014 年12 月收治的62 例膀胱癌患者癌组织和28 例正常膀胱组织（取自膀胱炎患者,病理学诊断为正常组织）标本,通过免疫组织化学染色检测膀胱癌和正常膀胱组织中MTA2 的表达水平;分析MTA2 表达水平与患者临床病理特征的相关性。构建稳定高表达MTA2 的膀胱癌T24 细胞系,通过MTS、克隆形成、划痕愈合和Transwell 实验检测MTA2 对膀胱癌T24 细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的影响。结果：与正常膀胱组织相比,膀胱癌组织中MTA2 呈明显高表达（P<0.01）;MTA2 的高表达状态与膀胱癌患者的性别、年龄、肿瘤体积无关（P>0.05）,而与患者更高的TNM分期、肿瘤的组织学分级、淋巴浸润和转移有关（均P<0.05）。在膀胱癌T24 细胞系中过表达MTA2 后,细胞的增殖活性明显升高（P<0.05）,克隆形成、划痕愈合、迁移和侵袭能力均明显增强（均P<0.01）。结论：MTA2 在人膀胱癌组织中表达上调,能够促进T24 细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭等恶性生物学行为。     

香加皮杠柳苷通过溶酶体途径诱导胃癌MGC-803细胞凋亡

目的 探讨香加皮杠柳苷（periplocin extracted from cortex periplocae, CPP）是否通过溶酶体途径诱导胃癌细胞凋亡。方法 200、100、50 ng/ml香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24和48 h后,MTS 法检测细胞的增殖情况,用TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测不同浓度香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24 h后Caspase-3和Caspase-9的表达情况,吖啶橙染色检测溶酶体释放情况,免疫荧光法检测组织蛋白酶B（Cathepsin B）的表达变化情况。结果 与空白对照组相比,50、100、200 ng/ml香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24、48 h后,均具有增殖抑制作用,24 h增殖率分别为 [(66.43±1.67)%、(55.39±3.63)%、(37.06±0.57)% vs. (100.14±8.49)%,P均<0.05],48 h增殖率分别为[(38.16±3.26)%、(32.00±1.83)%、(24.75±1.57)% vs. (100.33±8.98)%,P均<0.05]。与空白对照组相比,50、100、200 ng/ml香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24 h后,细胞凋亡率显著增加,凋亡率为[(28.56±6.96)%、(33.70±4.60)%、(60.42±4.48)% vs. (2.23±1.03)%,P均<0.05],Caspase-3的活性裂解片段和Caspase-9表达量升高,溶酶体膜的完整性被破坏,Cathepsin B由溶酶体释放到细胞质中。结论 香加皮杠柳苷可通过溶酶体途径诱导胃癌细胞凋亡。     

卡铂联合TRAIL对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察卡铂联合TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。方法:经20、40、80 μg/mL卡铂和100 ng/μL TRAIL单用或联用处理后,用MTS法检测A549细胞的增殖能力,在光镜下观察细胞形态学变化;并采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;RT-PCR和Western blot法检测死亡受体4(DR4)、死亡受体5(DR5)、Survivin和X连锁凋亡抑制蛋白基因(XIAP)mRNA与蛋白表达的变化。结果:卡铂和TRAIL单用或联用均可浓度依赖性抑制A549细胞的增殖,诱导其凋亡,两药联用比单用卡铂时抑制率和凋亡率更高(P<0.05)。单用卡铂或TRAIL可使A549细胞数减少,漂浮细胞增多,出现明显的凋亡形态变化,且明显降低Survivin和XIAP的mRNA和蛋白表达水平(P均<0.05);但对A549细胞DR4和DR5 mRNA表达均无明显影响,而单用卡铂或TRAIL却能升高A549细胞DR5蛋白的表达(P<0.05)。与单用组相比,TRAIL与卡铂联用A549细胞凋亡形态变化更明显,可明显降低A549细胞Survivin和XIAP mRNA和蛋白的表达水平及升高DR5蛋白表达水平(P<0.05)。结论:卡铂与TRAIL联用可协同抑制肺癌细胞A549细胞增殖,促进其凋亡,且与卡铂能够增加A549细胞DR5蛋白的表达和降低Survivin及XIAP的表达相关。