人内皮-单核活化多肽-2的重组表达及其活性鉴定

目的: 采用原核表达系统重组表达抗肿瘤细胞因子——人内皮单核活化多肽2（endothelail monocyteactivating polypeptide Ⅱ, EMAPⅡ）,并探讨重组EMAPⅡ的抗肿瘤生物学活性。方法: 采用pMAL p2x表达系统和BL21菌株克隆表达人EMAPⅡ147312, 对表达产物进行纯化。以发光底物法测定重组EMAPⅡ介导人脐静脉内皮细胞ECV304产生组织因子的活性；以流式细胞术测定其增强ECV304细胞对于TNFα致凋亡的敏感性；以MTT法检测定其对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制效果。结果:测序证实EMAPⅡ编码序列被正确克隆进表达载体，经诱导表达、纯化，获得重组EMAPⅡ产物，每克菌体（湿重）可获得约500 μg的重组蛋白，纯度为电泳纯。重组EMAPⅡ在体外培养条件下可使ECV304细胞产生TF因子；并可增强ECV304细胞对于TNFα介导凋亡的敏感性，使凋亡率明显增加\[(16.6±2.5)％vs（25.6±2.3）%,P<0.01\];在一定的质量浓度(1 μg/ml)下，EMAPⅡ对SW1990细胞的增殖有一定抑制作用(P<0.05)。结论:本研究采用原核表达系统pMAL-p2x可表达高纯度的重组EMAPⅡ，该因子具有良好的抗肿瘤生物学活性。     

肿瘤干细胞中异常miRNA的研究进展

微核糖核酸( microRNA,miRNA)是一类内源性非编码单链小RNA,可在转录后调节靶标mRNA的剪切或抑制mRNA翻译.研究发现,miRNA在多种病理生理过程中发挥重要作用,如细胞增殖、干细胞分化、肿瘤形成等.肿瘤干细胞常含有异常的miRNA,其中某些miRNA的异常结构或表达可影响肿瘤发展.根据miRNA表达异常对肿瘤发生、发展的不同影响,可把miRNA分为癌基因性miRNA与抑癌基因miRNA两类.随着对miRNA了解的深入,发现部分miRNA的表达还具有促进和抑制肿瘤的双向性作用.因此,通过区别miRNA对肿瘤干细胞的不同作用,可利用miRNA靶点治疗肿瘤,即利用抗miRNA疗法阻滞癌基因性miRNA;利用miRNA mimics或慢病毒恢复抑癌基因性miRNA的功能,从而抑制肿瘤发展.相信随着miRNA与肿瘤干细胞的特异性及其作用机制等方面研究的深入,miRNA将会作为一种新的肿瘤调控因子,加快肿瘤治疗的研究进展.     

Kininogen D5和TRAIL融合蛋白的克隆表达及生物学活性的研究

用重组PCR技术得到Kininogen D5和TRAIL的融合编码序列,将该DNA片段克隆到原核表达载体pMAL-c2,重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达,得到MBP-KT和MBP-TK,经AmyloseResin亲和层析柱层析,得到初步纯化的融合蛋白.结果表明MBP-KT对胰腺癌细胞1990有明显的杀伤作用其作用的ED5.为20 ng/ml,而MBP-TK对1990的抑制作用不明显;同时,MBP-KT和MBP-KD5对内皮细胞ECV304有明显的抑制作用,MBP/KT作用于ECV304的ED50为0.1μg/ml,MBP/KD5作用于ECV304的ED50为9.5μg/ml,但是MBP-TK和TRAIL几乎无作用,表明融合蛋白KT既具抗肿瘤作用又有抗新生血管的作用.本研究为进一步开发靶向性杀伤肿瘤药物奠定了基础.     

医学院校大学生创新课题的实践与效果评价

大学生创新能力培养计划是促进学生创新型思维,培养创新医学专业高等人才的重要举措。学校自2009年开始实施以来,取得了丰硕的科研成果,促进了学生理论与实践相结合的学习能力,同时也存在一些问题,在今后的实施过程中将进一步深入完善。     

Tumstatin183-230-TRAIL融合蛋白的克隆表达及其生物学双功能鉴定

目的:克隆表达融合蛋白Tumstatin 183-230-TRAIL,并观察其生物学功能.方法:利用重组PCR技术扩增Tumstatin 183-230-TRAIL(Tu-T)的融合编码序列,构建pMAL-Tu-T融合蛋白表达载体,将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,得到MBP-Tu-T融合蛋白,用SDS-PAGE鉴定纯化的表达产物.通过体外内皮细胞增殖抑制实验、肿瘤细胞杀伤实验、体外管腔形成抑制试验及电镜检测细胞凋亡情况对其生物学双功能进行鉴定.结果:融合蛋白MBP-Tu-T在BL21中表达率约20%,可明显抑制内皮细胞增殖(IC50 12.5 μg/ml),杀伤、诱导胰腺癌细胞凋亡并抑制体外管腔形成.结论:融合蛋白MBP-Tu-T具有双功能生物学活性,为进一步研究其靶向性杀伤肿瘤奠定了基础.     

人内皮-单核活化多肽-2的重组表达及其活性鉴定

目的：采用原核表达系统重组表达抗肿瘤细胞因子——人内皮．单核活化多肽2（endothelail monocyte—activating polypeptideⅡ，EMAP—Ⅱ），并探讨重组EMAP—Ⅱ的抗肿瘤生物学活性。方法：采用pMAL—p2x表达系统和BL-21菌株克隆表达人EMAP—II147_312，对表达产物进行纯化。以发光底物法测定重组EMAP—Ⅱ介导人脐静脉内皮细胞ECV-304产生组织因子的活性；以流式细胞术测定其增强ECV-304细胞对于TNFα致凋亡的敏感性；以MTF法检测定其对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制效果。结果：测序证实EMAP-Ⅱ编码序列被正确克隆进表达载体，经诱导表达、纯化，获得重组EMAP-Ⅱ产物，每克菌体（湿重）可获得约500斗g的重组蛋白，纯度为电泳纯。重组EMAP—Ⅱ在体外培养条件下可使ECV-304细胞产生TF因子；并可增强ECV．304细胞对于TNFoz介导凋亡的敏感性，使凋亡率明显增加[（16．6&#177;2．5）％135（25．6&#177;2．3）％，P〈0．01]；在一定的质量浓度（1μg／ml）下，EMAP—Ⅱ对SW1990细胞的增殖有一定抑制作用（P〈0．05）。结论：本研究采用原核表达系统pMAL—p2x可表达高纯度的重组EMAP-Ⅱ，该因子具有良好的抗肿瘤生物学活性。     

高校教学秘书角色探讨

教学工作是高校的核心工作,教学秘书作为教学工作的基层管理者,是学校教务处与各院、部(系)、教研室连接的桥梁和纽带。建立一支高素质、甘为人梯、爱岗敬业和勇于创新的教学秘书队伍,是提高教学质量的必要前提。本文从高校教学秘书的岗位职责出发,探讨对教学秘书的素质要求和岗位现状,并提出针对性的建议。     

在防原医学教学中开展选修课教学的实践与效果

防原医学是军事医学的重要组成部分,也是军事医学教学过程中一门重要课程。为提高防原医学教学效果激发学员学习兴趣,教研室精心设计教学内容,自2005年开始,面向全校学员开设了核武器及新概念武器选修课,收到了良好的效果。下面就在防原医学教学中开展选修课教学的实践与效果谈几点体会。     

信息化教学模式与自主性实验

信息化教学给高等教育带来了教学观念和教学模式的改革,在医学院校的实验教学中如何有机地整合信息化模式成为许多高校面临的问题之一.依据国家对于培养高素质新型军事医学人才的形势需求,此文对第二军医大学各学科自主性实验课程如何在教学实践中尝试信息化教学模式与自主性实验的有机结合进行了初步探索,以尝试解决传统实验教学中存在的诸多问题,从根本上提升实验教学质量和学员的综合素质.