Bax、Bcl-2及FHIT在胰腺癌中的表达及意义

目的研究胰腺癌组织及细胞中Bax/Bcl-2蛋白和FHIT mRNA的表达,探讨FHIT与凋亡相关因子在胰腺癌中的关系.方法应用ABC免疫组织化学方法检测胰腺癌细胞和组织标本中Bax与Bcl-2蛋白,RT-PCR检测其中FHIT mRNA的表达.结果 38例胰腺癌中Bax蛋白阳性17例(45%),Bcl-2蛋白阳性表达22例(58%),FHIT mRNA异常表达为21例(56%).转染有外源性FHIT的1990细胞(1990 pFHIT)Bax表达阳性率有升高,Bcl-2/Bax比值下降.结论 Bax、Bcl-2及FHIT都通过调控凋亡参与胰腺癌的病理过程.FHIT诱导凋亡可能与Bax上调表达有关.     

生物技术专业考核方式的改革初探

笔者所在学校作为国家生命科学与技术人才培养基地之一,如何对医学生物技术专业课程考核模式进行改革,对高素质生命科学与生物技术人才的培养十分重要。笔者在教学实践中,对本专业课程考核方式进行了改革,将传统的单一理论考试方式改革为含理论、实验技能和论文(综述)答辩等3部分内容组成的考核模式。     

scFv-sTRAIL融合蛋白靶向诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展

随着分子生物学技术的进步和在分子水平上对恶性肿瘤发病机制认识的不断加深,以细胞受体、表面抗原、关键基因和细胞内调控分子为靶点的分子靶向治疗已成为辅助传统治疗的合理选择。抗体导向治疗是一种新颖的分子靶向治疗手段。目前已研发多种抗体导向类抗癌药物,这类药物由特异性识别肿瘤细胞的靶向部分和杀伤肿瘤的效应部分组成,因而具有较强的靶向杀伤肿瘤细胞作用,同时可有效降低药物对局部正常组织和全身的系统性毒性作用。利用基因工程技术将人类血清可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(serum-soluble TNF-related apoptosis-inducing ligand,sTRAIL)与抗肿瘤单链抗体(single chain antibody fragment,scFv)融合,构建scFv-sTRAIL融合蛋白,是一种理想的抗体导向治疗策略。通过scFv与肿瘤细胞所特有的细胞表面抗原的特异结合,加强sTRAIL在肿瘤病灶的富集,靶向诱导肿瘤细胞凋亡,从而获得增强抗体的疗效和更高的药物安全性。     

TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡及其与FHIT基因突变关系的初步研究

目的:分析原核重组表达的人可溶性TRAIL分子诱导多种肿瘤细胞的凋亡,并观察凋亡作用与FHIT基因突变的关系.方法:观察人可溶性TRAIL对28株不同来源的肿瘤细胞和正常细胞的直接细胞毒作用,RT-PCR法分析部分细胞的FHIT基因缺失突变情况.结果:1～100 mg/L的重组人可溶性T RAIL蛋白即可诱导19株细胞(包括人肿瘤细胞株)如1990(胰腺导管癌)、MCF-7(乳腺癌)、A5 4 9(肺癌)、U251(星形胶质瘤)、HepG-2(肝细胞癌)、M85(胃癌)、CNE-2(鼻咽癌)、Hep-2( 喉癌)、AT-29(结肠癌)、3AO(卵巢癌)和B16-MB(黑色素瘤),髓性恶性细胞如Jurkat、K56 2、U937、6T-CEM,鼠源性S180(肉瘤)、Ehrlich(腹水瘤)和Lewis(肺癌),以及人内皮细胞株ECV304等发生凋亡;而其他9株细胞,如SK-N-SH(人神经母细胞瘤)、8898(人胰腺导管癌)、HeLa(人宫颈癌)、SMMU7721(人肝癌)、HL60(人白血病)、COS-7(猴肾)、人成纤维细胞、L929(鼠成纤维细胞)、Wish(人羊膜细胞)等需大于100 mg/L的TRAIL才能使其凋亡;观察到上述部分对TRAIL敏感的人源细胞的FHIT基因有缺失突变,而不敏感的人源细胞FHIT 基因完整.结论:原核表达的人可溶性TRAIL具有明显诱导多种肿瘤细胞凋亡的活性,其机制可能与FHIT基因的缺失有关.     

LPS、rh-TNFα刺激PBL诱导TRAIL表达的初步研究

选择人ＰＢＬ作为人ＴＲＡＩＬ基因的来源,抽提细胞在ＬＰＳ和ｒｈ－ＴＮＦα刺激２,１０,１８ｈ的总ＲＮＡ,通过ＲＴ６－ＰＣＲ观察ＴＲＡＩＬ基因转录ｍＲＮＡ的水平,然后用ＰＣＲ扩增ＴＲＡＩＬ基因,并用免疫印迹法分析ＴＲＡＩＬｍＲＮＡ翻译蛋白的水平。结果发现：在ＬＰＳ和ｒｈ－ＴＮＦα刺激细胞并进一步诱导细胞凋亡可能与诱导表达ＴＲＡＩＬ有关。     

人白介素-13对牛主动脉内皮细胞表达黏附分子的影响

目的研究人白介素-13（hIL-13）对牛主动脉内皮细胞（BAECs）表达细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和E-选择素的影响，为hIL-13应用于诱导异种移植免疫耐受、减轻异种移植排斥反应提供实验依据。方法用不同浓度的hIL-13（2、5、10、20及40ng／ml）孵育BAECs2h后，再与肿瘤坏死因子-α（TNF-α．4ng／ml）共孵育6h或18h；应用细胞-酶联免疫吸附分析方法（Cell—ELISA）检测BAECs表面的E-选择素和ICAM-1的表达；用MTT方法测定hIL-13对BAECs活性的影响。结果用hIL-13在5～20ng／ml浓度内预处理BAECs后，能明显抑制TNF-α诱导的E-选择素与ICAM-1的表达，并呈现一定的剂量依赖性（P〈0．01）。经不同浓度hIL-13处理的BAECs活性与未经hIL-13处理者相比差异无统计学意义。结论hIL-13能明显抑制BAECs表达E-选择素与ICAM-1，诱导异种移植的免疫耐受，且hIL-13对BAECs无损伤作用。     

Isolation and purification of CWF－Ⅰ derived from Serratia marcescens and its antitumor activities in vitro

ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＣＷＦ－ⅠｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍＳｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃｅｎｓａｎｄｉｔｓａｎｔｉｔｕｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎｖｉｔｒｏ￥ＪｉａｏＢｉｎｇｈｕａ（焦炳华）；ＺｈａｏＨｕ（赵虎）；ＹｕＷｅ...     

细菌双杂交系统在细胞外蛋白质相互作用中的应用

目的:探索应用细菌双杂交系统在细胞外蛋白质之间相互作用的可行性.方法:应用Stratagene BacterioMatch two hybrid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达质粒;以pBT构建编码DR4、DR5、OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒.重组质粒分别相应共转化报告菌株XL1-Blue MRF,报道基因产物以抗羧苄青霉素和β-半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标.结果:pTRG-TRAIL与pBT-DR4,pTRG-TRAIL与pBT-DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青霉素(500 μg/ml以上)筛选下宿主菌呈转录激活状态,pTRG-TRAIL与pBT-OPG 组共转化后在低浓度羧苄青霉素(250 μg/ml以下)筛选下宿主菌呈转录激活状态,用X-Gal-PETG平皿可以进一步验证阳性克隆.对照组pTRG-TRAIL与pBT-LGF2,pBT-DR4、pBT-DR5或pBT-OPG与pTRG-Gal11 4组共转化后呈阴性.结论:所用的双杂交序列皆为编码这些蛋白质的细胞外区域,而这些蛋白质本身的相互作用已有其他报道验证,所以细菌双杂交系统可以用于细胞外蛋白质的相互作用研究.     

天然内毒素制剂中S－和R－类脂A的理化特性

天然马流产杆菌内毒素（脂多糖）经有机溶剂萃取后分离为光滑型（Ｓ）－和粗糙型（Ｒ）－亚组分，并制备了相应的类脂Ａ。由Ｓ－亚组分衍生的类脂Ａ（Ｓ－ＬｉＰＡ）表现出极高的水溶性，而由Ｒ－亚组分衍生的类脂Ａ（Ｒ－ＬｉｐＡ）的溶解度较差。化学分析表明Ｒ－ＬｉｐＡ属于完全脂酰化的分子，其结构与天然Ｒ－突变株产生的类脂Ａ完全相同，而Ｓ－ＬｉｐＡ属低度脂酰化（６０％）的分子，并在其分子上发现有游离氨基存在。本研究对从分子水平上了解类脂Ａ结构与功能的关系具有重要的意义。     

人白介素- 4对牛血管内皮细胞保护作用的研究

目的:研究人白介素-4(hIL-4)对经TNF-α活化的牛主动脉内皮细胞(BAEC)的保护作用。方法:用不同浓度的hIL-4与BAEC共孵育2h后,再与4μg/L的TNF-α共孵育6h或18h。应用细胞ELISA方法,检测BAEC表面的E选择素和ICAM-1的表达;用MTT比色法测定hIL-4对BAEC活性的影响。结果:在一定浓度内用hIL-4预处理BAEC后,能明显抑制TNF-α诱导活化BAEC上的E选择素与ICAM-1的表达,并呈现一定的剂量依赖性。用MTT比色法测定BAEC活性的实验表明,各实验组BAEC的活性与对照组无明显差异性。结论:hIL-4能明显抑制TNF-α诱导活化的BAEC表达E选择素与ICAM-1;hIL-4对BAEC的正常功能具有一定的保护作用。