医学分子生物学实验教学改革探索

生物化学与分子生物学是医学院校的基础课程.实验课程的学习对于学生基本技能的训练和实践操作具有重要意义.随着基础医学和生命科学的迅猛发展,迫切需要改革传统的实验教学课程,主要体现在课程内容、教学模式、开放实验室、考核模式等方面.通过改革,实验课程在提高学生学习积极性、实践操作能力、解决实际问题的综合应用能力及创新能力等方...     

人内皮-单核活化多肽-2的重组表达及其活性鉴定

目的: 采用原核表达系统重组表达抗肿瘤细胞因子——人内皮单核活化多肽2（endothelail monocyteactivating polypeptide Ⅱ, EMAPⅡ）,并探讨重组EMAPⅡ的抗肿瘤生物学活性。方法: 采用pMAL p2x表达系统和BL21菌株克隆表达人EMAPⅡ147312, 对表达产物进行纯化。以发光底物法测定重组EMAPⅡ介导人脐静脉内皮细胞ECV304产生组织因子的活性；以流式细胞术测定其增强ECV304细胞对于TNFα致凋亡的敏感性；以MTT法检测定其对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制效果。结果:测序证实EMAPⅡ编码序列被正确克隆进表达载体，经诱导表达、纯化，获得重组EMAPⅡ产物，每克菌体（湿重）可获得约500 μg的重组蛋白，纯度为电泳纯。重组EMAPⅡ在体外培养条件下可使ECV304细胞产生TF因子；并可增强ECV304细胞对于TNFα介导凋亡的敏感性，使凋亡率明显增加\[(16.6±2.5)％vs（25.6±2.3）%,P<0.01\];在一定的质量浓度(1 μg/ml)下，EMAPⅡ对SW1990细胞的增殖有一定抑制作用(P<0.05)。结论:本研究采用原核表达系统pMAL-p2x可表达高纯度的重组EMAPⅡ，该因子具有良好的抗肿瘤生物学活性。     

肿瘤干细胞中异常miRNA的研究进展

微核糖核酸( microRNA,miRNA)是一类内源性非编码单链小RNA,可在转录后调节靶标mRNA的剪切或抑制mRNA翻译.研究发现,miRNA在多种病理生理过程中发挥重要作用,如细胞增殖、干细胞分化、肿瘤形成等.肿瘤干细胞常含有异常的miRNA,其中某些miRNA的异常结构或表达可影响肿瘤发展.根据miRNA表达异常对肿瘤发生、发展的不同影响,可把miRNA分为癌基因性miRNA与抑癌基因miRNA两类.随着对miRNA了解的深入,发现部分miRNA的表达还具有促进和抑制肿瘤的双向性作用.因此,通过区别miRNA对肿瘤干细胞的不同作用,可利用miRNA靶点治疗肿瘤,即利用抗miRNA疗法阻滞癌基因性miRNA;利用miRNA mimics或慢病毒恢复抑癌基因性miRNA的功能,从而抑制肿瘤发展.相信随着miRNA与肿瘤干细胞的特异性及其作用机制等方面研究的深入,miRNA将会作为一种新的肿瘤调控因子,加快肿瘤治疗的研究进展.     

Tumstatin183-230-TRAIL融合蛋白的克隆表达及其生物学双功能鉴定

目的:克隆表达融合蛋白Tumstatin 183-230-TRAIL,并观察其生物学功能.方法:利用重组PCR技术扩增Tumstatin 183-230-TRAIL(Tu-T)的融合编码序列,构建pMAL-Tu-T融合蛋白表达载体,将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,得到MBP-Tu-T融合蛋白,用SDS-PAGE鉴定纯化的表达产物.通过体外内皮细胞增殖抑制实验、肿瘤细胞杀伤实验、体外管腔形成抑制试验及电镜检测细胞凋亡情况对其生物学双功能进行鉴定.结果:融合蛋白MBP-Tu-T在BL21中表达率约20%,可明显抑制内皮细胞增殖(IC50 12.5 μg/ml),杀伤、诱导胰腺癌细胞凋亡并抑制体外管腔形成.结论:融合蛋白MBP-Tu-T具有双功能生物学活性,为进一步研究其靶向性杀伤肿瘤奠定了基础.     

Kininogen D5和TRAIL融合蛋白的克隆表达及生物学活性的研究

用重组PCR技术得到Kininogen D5和TRAIL的融合编码序列,将该DNA片段克隆到原核表达载体pMAL-c2,重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达,得到MBP-KT和MBP-TK,经AmyloseResin亲和层析柱层析,得到初步纯化的融合蛋白.结果表明MBP-KT对胰腺癌细胞1990有明显的杀伤作用其作用的ED5.为20 ng/ml,而MBP-TK对1990的抑制作用不明显;同时,MBP-KT和MBP-KD5对内皮细胞ECV304有明显的抑制作用,MBP/KT作用于ECV304的ED50为0.1μg/ml,MBP/KD5作用于ECV304的ED50为9.5μg/ml,但是MBP-TK和TRAIL几乎无作用,表明融合蛋白KT既具抗肿瘤作用又有抗新生血管的作用.本研究为进一步开发靶向性杀伤肿瘤药物奠定了基础.     

医学院校大学生创新课题的实践与效果评价

大学生创新能力培养计划是促进学生创新型思维,培养创新医学专业高等人才的重要举措。学校自2009年开始实施以来,取得了丰硕的科研成果,促进了学生理论与实践相结合的学习能力,同时也存在一些问题,在今后的实施过程中将进一步深入完善。     

“为战育人”导向下现代生物工程综合实验课程体系改革与设计

现代生物工程综合实验课程是以分子生物学技术为主要教学内容的综合性理论实践课程。当前,军队院校许多课程缺乏“为战育人”的导向性。文章首先从聚焦于战场、贴合海军岗位实际需求的基本要求出发,围绕现代生物工程综合实验课程的自身特点,阐述了新课程体系构建的基本构想;然后,从课程教学内容本身出发,阐述理论教学和实验教学内容的具体设计;最后,围绕“为战育人”的导向,从塑造浓厚的实战化教学氛围、注重知识元素和思政元素的有机统一以及注重多元化教学手段的充分运用这三个方面阐述新课程体系建设和实施的要点。     

人内皮-单核活化多肽-2的重组表达及其活性鉴定

目的：采用原核表达系统重组表达抗肿瘤细胞因子——人内皮．单核活化多肽2（endothelail monocyte—activating polypeptideⅡ，EMAP—Ⅱ），并探讨重组EMAP—Ⅱ的抗肿瘤生物学活性。方法：采用pMAL—p2x表达系统和BL-21菌株克隆表达人EMAP—II147_312，对表达产物进行纯化。以发光底物法测定重组EMAP—Ⅱ介导人脐静脉内皮细胞ECV-304产生组织因子的活性；以流式细胞术测定其增强ECV-304细胞对于TNFα致凋亡的敏感性；以MTF法检测定其对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制效果。结果：测序证实EMAP-Ⅱ编码序列被正确克隆进表达载体，经诱导表达、纯化，获得重组EMAP-Ⅱ产物，每克菌体（湿重）可获得约500斗g的重组蛋白，纯度为电泳纯。重组EMAP—Ⅱ在体外培养条件下可使ECV-304细胞产生TF因子；并可增强ECV．304细胞对于TNFoz介导凋亡的敏感性，使凋亡率明显增加[（16．6&#177;2．5）％135（25．6&#177;2．3）％，P〈0．01]；在一定的质量浓度（1μg／ml）下，EMAP—Ⅱ对SW1990细胞的增殖有一定抑制作用（P〈0．05）。结论：本研究采用原核表达系统pMAL—p2x可表达高纯度的重组EMAP-Ⅱ，该因子具有良好的抗肿瘤生物学活性。     

高校教学秘书角色探讨

教学工作是高校的核心工作,教学秘书作为教学工作的基层管理者,是学校教务处与各院、部(系)、教研室连接的桥梁和纽带。建立一支高素质、甘为人梯、爱岗敬业和勇于创新的教学秘书队伍,是提高教学质量的必要前提。本文从高校教学秘书的岗位职责出发,探讨对教学秘书的素质要求和岗位现状,并提出针对性的建议。