神经细胞黏附分子L1-Ig（1-4）的原核表达及其功能

目的：利用基因克隆、表达、纯化等分子生物学手段获取具有生物活性的神经细胞黏附分子L1（L1）的Ig（1-4）结构域融合蛋白。 方法：实验于2001-10／2004-12在解放军第二军医大学神经生物教研室完成。①从新生4d的SD大鼠的海马组织中提取总RNA，采用反转录-聚合酶链反应法获取L1-Ig（1-4）基因，进行序列分析后构建表达载体pET28a（＋）-LI-Ig（1-4）。②转染大肠杆菌BL21，用IPTG诱导L1-Ig（1-4）的表达。③利用Ni2＋-NTA柱纯化和复性。④用L1-Ig（1-4）融合蛋白观察培养脊髓原代神经元轴突生长情况及其活性，未加入融合蛋白的细胞做对照。 结果：①克隆出编码正确的大鼠L1-Ig（1-4）基因。②并在大肠杆菌中获得高效表达，表达产物占全菌总蛋白的28-3％。③Ni^2＋-NTA柱纯化后的纯度达90％以上。④加入融合蛋白后脊髓神经元突触的生长能力较未加入融合蛋白的细胞增强[（56&;#177;3．8），（43&;#177;2．7）μm，P〈0．01]。 结论：通过原核表达可大量获得L1-Ig（1-4）融合蛋白，该融合蛋白同样具有促神经生长的生物学活性。     

调控基因-Noggin的研究进展

Noggin基因最早是由California大学的Harland和William Simth于1992年从非洲爪蟾的胚胎中分离得到的,由于将其mRNA注射入爪蟾的胚胎可使头部明显增大而命名该基因为Noggin(美国俚语中为"头,脑袋"的意思)[1].现在已克隆出人的Noggin基因定位于染色体17q22,大鼠与小鼠的Noggin基因则定位于染色体11[2].Noggin基因在种属间高度保守,其编码产物为26kD蛋白,具有疏水性氨基酸末端,是一种分泌蛋白.Noggin基因在体内对多个系统的发育和/或重塑起重要的调控作用,现就其表达和功能作一简要综述.     

MRI测量颈胸角在选择颈胸段脊柱手术入路中的临床应用

目的 :探讨在颈胸段脊柱术前应结合患者的颈胸段MRI的个体特征和疾病情况 ,选择手术创伤最小的手术入路。方法 :共 76例患者 ,其中 2 6例为颈胸段脊柱损伤 ,35例为颈胸段脊柱肿瘤 ,脊髓型颈椎病 12例 ,以及 3例颈胸段椎板减压术后后凸畸形。男 4 7例 ,女 2 9例。平均年龄 4 5 5岁 ,年龄范围 19～ 6 5岁。同时抽取 95套颈胸段MRI片。作胸骨上切迹向后水平延长线和胸骨上切迹向后上方至C7T1椎间盘前缘中点的连线 ,测量两线之夹角 ,称为颈胸角 (cervicothoracicangle ,CTA)。结果 :CTA平均为 4 7 6 4°(范围 2 5°～ 73°)。大于此平均角度且病灶在胸骨切迹水平线以上时可考虑低位下颈椎入路 ,5 0例 ;CTA较小 ,且病灶范围广 ,或尚累及T3 、T4,可以考虑经胸骨柄入路 ,13例 ;病灶范围广泛 ,经全胸骨入路 3例 ;Ⅰ期或Ⅱ期前后联合入路 5例 ;经右侧肩胛下后外侧胸腔入路 5例。结论 :颈胸段脊柱手术应尽量选择低位下颈椎入路等创伤较小的入路 ,其次考虑经胸骨柄入路。长节段脊柱受累的患者才考虑经右侧肩胛下后外侧胸腔或经全胸骨等创伤较大的入路。术前可以结合患者的病灶累及范围和颈胸手术角等MRI影像学表现 ,从而利于选择最合适的手术入路 ,减少手术风险、手术创伤和并发症 ,利于患者早日康复     

两种水迷宫实验对拟痴呆模型动物学习记忆功能测试的比较

目的采用两种水迷宫实验对拟痴呆动物学习记忆功能进行比较.方法将小鼠、大鼠各分为:正常对照组、模型组及给药组.用通道式及Morris水迷宫对两种动物模型分别进行测试.结果两组动物模型与给药组比较,在通道式水迷宫中游出时间均无明显差异(P>0.05),在Morris水迷宫测试中,两种动物模型[小鼠(99.319±38.10)s;大鼠(74.34±41.64)s]与双方特定的给药组[匹拉西坦组(63.58±48.26)s;多奈哌齐组(36.85±36.59)s]比较均出现显著差异(P＜0.05). 结论通道式水迷宫和Morris水迷宫测试方法均能反映动物学习和记忆功能,而后者对于动物来讲学习过程较为简单,能够敏感地反映出动物的学习记忆功能.两种水迷宫最好结合使用,以得到客观的结果.     

小梁切除联合巩膜灼烙术治疗原发性青光眼临床研究

为探讨治疗原发性青光眼更有效的手术方式,作者1995年4月～1997年8月采用小梁切除联合巩膜灼烙术治疗原发性青光眼42例,取得满意效果,现报告如下。1　资料与方法1.1　临床资料原发性青光眼42例,男18例,女24例,左眼15只眼,右眼27只眼,年龄48～72岁,平均50.5岁,闭角性青光眼35例,     

二苯乙烯苷对D-半乳糖拟痴呆小鼠海马基因表达的影响

目的　应用cDNA芯片探索二苯乙烯苷(TSG)干预D 半乳糖皮下注射的拟痴呆 (AD)小鼠海马的靶基因。方法　D 半乳糖 (5 0mg·kg- 1·d- 1,6 0d)皮下注射为模型组 ,造模加TSG (0 .1g·kg- 1·d- 1)灌胃为TSG组 ,对照组只注射相同体积的生理盐水。每组 6只小鼠用Morris水迷宫测试学习记忆能力。取海马组织抽提RNA ,掺入荧光分子Cy3和Cy5逆转录合成cDNA探针。以模型比正常组和TSG比正常组为组合混合探针 ,与两张小鼠 4 0 0 0点cDNA芯片杂交 ,经荧光信号扫描及GenePixPro3.0分析TSG组AD疾病相关基因调控得到改善的基因。结果　TSG可缩短小鼠游至目标的距离和时间 ,说明改善了学习记忆能力。TSG组与模型组表达差异的基因有 2 9条上调 ,12条下调 ,其中与AD相关的有 11条。结论　基因表达结果说明 ,TSG可能使能量代谢与神经营养作用增强 ,炎性反应和转录整体水平下降。     

牛磺酸对脑挫伤大鼠氧应激与Ca~(2+)超载损伤的影响

目的 :探讨牛磺酸对大鼠脑挫伤导致的氧应激和细胞Ca2 + 超载损伤的影响。方法 :将SD大鼠随机分为正常对照组、脑挫伤模型组、牛磺酸 (高、中、低剂量 )治疗组与尼莫地平组。在给药7d后进行脑挫伤造模 ,造模后2h切取活体脑片以荧光标记法测定胞内Ca2 +水平 ;造模后24h分离大鼠患侧大脑皮层 ,以比色法测定脑匀浆中超氧化物歧化酶 (SOD )活性与丙二醛 (MDA )含量。结果 :与模型组比较 ,牛磺酸各剂量组皮层胞内Ca2 + 、MDA水平显著降低 ,高剂量牛磺酸组皮层SOD水平显著升高。结论 :牛磺酸对大鼠脑挫伤导致的氧应激和细胞Ca2 +超载损伤有较好的保护作用。     

基于颜色变化的麸炒山药质量标准及炮制工艺探究

目的基于颜色变化探究麸炒山药质量标准及炮制工艺。方法利用色差仪测定生山药及不同炮制程度的麸炒山药饮片外观色度值L^?、a^?、b^?值(L^?为亮度,a^?为红绿色度值,b^?为黄蓝色度值),求其色度值双侧90%参考范围,并采用主成分分析对色度值进行聚类分析,结合SPSS 21.0软件,建立L^?、a^?、b^?与T(炮制温度)、t(炮制时间)的非标准化典则判别函数式。利用红外光谱技术分析生山药、不同炮制程度麸炒山药中相关化学基团的变化。结果麸炒山药炮制适中品色度值范围是47.20≤E^?ab<48.71,基于色度值的炮制工艺参数非标准化典则判别函数式分别为L^?=-0.014T+0.57t+50.517、a^?=0.295t+0.025;b^?=0.023T+1.845。山药麸炒后,红外共轭效应增强。结论色差仪可以实现不同炮制程度麸炒山药饮片外观颜色的客观化评判,基于色度值建立的非标准化典则判别函数式可为中药炮制工艺的规范化提供科学依据。     

甲氨蝶呤与重组人肿瘤坏死因子对软骨肉瘤的作用机制

目的 探讨甲氨蝶呤(MTX)、重组人肿瘤坏死因子(rhTNF)对软骨肉瘤的抑制作用及机制.方法 采用裸鼠软骨肉瘤细胞株皮下接种模型,将实验动物随机分为四组:rhTNF组(n=8),rhTNF+MTX组(n=8),MTX组(n=8),空白对照组(n=6),分别注射rhTNF和(或)MTX.观察肿瘤的形成,记录肿瘤体积、瘤重,计算抑瘤率,通过HE染色观察肿瘤的组织学变化,应用免疫组织化学法检测瘤组织中bcl-2、bax、血管内皮生长因子(VEGF)等的表达及细胞凋亡情况.结果 rhTNF、rhTNF+MTX组肿瘤重量和体积小于MTX组、空白对照组(P＜0.05),MTX组肿瘤重量与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);rhTNF、rhTNF+MTX、MTX三组肿瘤中bcl-2表达低于空白对照组、bax表达高于空白对照组(P＜0.05);rhTNF、rhTNF+MTX组中VEGF的表达低于MTX、空白对照组(P＜0.05),上述指标在rhTNF、rhTNF+MTX组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 rhTNF能显著抑制荷瘤小鼠体内软骨肉瘤的生长,MTX对体内软骨肉瘤的抑制作用不明显,联合应用可增强rhTNF的抑瘤效应,其机制可能与下调bcl-2及VEGF、上调bax的表达水半有关.     

安神补脑液对睡眠剥夺大鼠脑内诱导型一氧化氮合酶及褪黑素的影响

目的研究安神补脑液对睡眠剥夺大鼠脑内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及褪黑素的影响。方法SD大鼠随机分成正常对照组,模型组,安神补脑液高、低剂量组。灌胃给予安神补脑液2周后,用多站台水环境法复制睡眠剥夺模型,取前脑组织测定iNOS的活性,并用高效液相色谱法测定脑内褪黑素的含量。结果与正常对照组比较,睡眠剥夺大鼠脑组织iNOS活力显著增高,褪黑素有减少的趋势。大剂量安神补脑液可使模型大鼠iNOS活力明显降低(P<0.05),褪黑素含量显著提高(P<0.05)。结论安神补脑液可拮抗睡眠剥夺大鼠脑内iNOS活力提高,并能增高松果体褪黑素的含量,提示安神补脑液可以改善睡眠障碍导致的脑功能改变。