补骨脂素的植物雌激素作用及其机制探讨

目的:利用雌激素受体(ER)α,β阳性T47D细胞和子宫内膜癌Ishikawa细胞观察补骨脂素的雌激素样作用,并探讨其可能的作用机制。方法:以1×10^-8mol.L^-1雌二醇(E₂)为阳性对照药,利用MTT细胞增殖试验观察1×10^-5~1×10^-9mol.L^-1补骨脂素对T47D增殖的影响,同时观察1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对Ishikawa细胞增殖的影响;以半定量RT-PCR法检测1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对T47D细胞雌激素效应基因PR mRNA表达情况的影响;并以雌激素受体拮抗剂ICI 182,780为工具药进行干预。同时,通过流式细胞术检测1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素引起T47D细胞ER-α,ER-β含量的变化。结果:1×10^-5~1×10^-7mol.L^-1补骨脂素能够显著促进T47D细胞增殖;1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对Ishikawa细胞增殖也有显著的促进作用;RT-PCR结果显示:1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素可使T47D细胞PR mRNA表达显著增加,表现出雌激素样作用,而且以上效应可被ICI 182,780拮抗。1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素还可诱导T47D细胞ER-α,ER-β表达明显增加。结论:补骨脂素具有植物雌激素作用,并且其作用是通过ER途径介导的。     

四物汤及其组方中药的药物血清对MCF-7细胞体外增殖和细胞周期的影响

目的:探讨四物汤及其组方的四味中药的药物血清对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞体外增殖、细胞周期和凋亡的影响,评价其植物雌激素活性.方法:正常性未成熟雌性SD大鼠,体重70±5g,按体重均衡和随机的原则分为7组(正常对照组、己烯雌酚组、四物汤组、熟地组、白芍组、当归组和川芎组),每天分别早、晚两次灌胃给药,给药均持续4d,第5d腹主动脉取血,分离血清,0.22p.m微孔滤膜过滤,-20℃贮存备用.应用MTT法检测药物血清对MCF-7细胞增值率、流式细胞技术检测细胞周期和凋亡率.结果:白芍、当归和川芎等中药的药物血清均可显著促进MCF-7细胞体外增殖(P＜0.01),熟地可促进MCF-7细胞体外增殖(P＜0.05),熟地、当归和川芎等中药的药物血清均可显著促使MCF-7细胞S期细胞数和细胞增殖指数PI增加(P＜0.01),白芍的药物血清均可促使MCF-7细胞增殖指数PI增加(P＜0.05),而在本实验条件下四物汤复方的舍药血清使MCF-7细胞数略有增加,但无统计学意义(P＞0.05);白芍、当归、川芎和四物汤的药物血清均可显著抑制MCF-7细胞的凋亡(P＜0.01);结论:熟地、白芍、当归和川芎等中药有植物雌激素活性,本实验配伍比例条件下,四物汤复方的植物雌激素活性弱于其组方的各味中药.     

四物合剂对顺铂肝毒性作用的实验研究

目的:观察四物合剂对化疗药物顺铂肝毒性的作用,并对其作用机制进行探讨。方法:小鼠腹腔注射顺铂,3·0mg/kg体重/日,连续7日,并灌饲四物合剂14日,观察血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性、肝脏系数、肝匀浆中SOD、GSH-PX、GSH和MDA含量变化及肝线粒体中NADH脱氢酶复合体(复合体Ⅰ)和琥珀酸脱氢酶复合体(复合体Ⅱ)活性变化。结果:注射顺铂7日后小鼠肝脏中SOD和GSH-PX活性及GSH含量下降,MDA含量升高,同时给予四物合剂小鼠肝脏中SOD含量上升,GSH-PX活性及GSH含量、MDA含量均下降;顺铂小鼠肝线粒体中NADH脱氢酶复合体(复合体Ⅰ)活性升高,琥珀酸脱氢酶复合体(复合体Ⅱ)活性下降,四物合剂可减弱该反应。结论:顺铂模型小鼠肝组织细胞潜在抗氧化能力明显下降,四物合剂可改善此现象,其作用机制可能与升高机体内抗氧化酶活性、减少自由基生成有关。     

红花等10种中药的植物雌激素活性研究

目的：评价红花、川牛膝、丹参、女贞子、枸杞、甘草、肉苁蓉、淫羊藿、补骨脂、菟丝子等10味中药的植物雌激素活性。方法：选用昆明种雌性乳鼠,随机分为A,B二组：A组又分为12组（溶剂对照组、己烯雌酚组和10个中药组）；B组也分为12组（溶剂对照组、己烯雌酚组和10个中药拮抗组）,其中中药拮抗组每天同时灌胃中药和己烯雌酚；各组给药4 d后分离血清。利用雌激素受体（ER）阳性MCF-7细胞,以MTT法检测中药含药血清对细胞增殖的影响。结果：A组中,红花、川牛膝、丹参、枸杞、肉苁蓉、淫羊藿、补骨脂和菟丝子等中药含药血清可显著促进MCF-7细胞增殖；而女贞子组可见细胞增殖受到明显抑制。B组中,红花、川牛膝、丹参、甘草、淫羊藿、补骨脂和菟丝子组可见己烯雌酚促细胞增殖的作用受到了显著抑制；而肉苁蓉可协同并显著增强己烯雌酚促细胞增殖的作用。结论：红花、川牛膝、丹参、淫羊藿、补骨脂、菟丝子等6种中药在单独用药时具有拟雌激素作用,在与雌激素同时用药时具有抗雌激素作用,其双向调节效应依赖于体内雌激素水平的高低。     

四物合剂对顺铂作用小鼠血细胞的影响

目的 观察四物合剂对化疗药物顺铂作用小鼠血液中几种血细胞的影响.方法 小鼠腹腔注射顺铂,3.0mg/kg体重/日,连续7天,并灌饲四物合剂14天,观察红细胞、红细胞压积、血红蛋白、白细胞、淋巴细胞、血小板和血小板体积等指标变化.结果 给顺铂模型小鼠灌饲四物合剂后,与模型组比较各指标均有变化:红细胞在第1天时虽有下降,但在第4天时显著升高,并高于生理盐水对照组,但于第7天时又显著降低;血红蛋白在第4天时升高,第7天降低;白细胞计数第1天最高,后回落与生理盐水组水平相近;血小板计数显示在第4天时显著下降,甚至低于顺铂模型组,第7天时又显著升高.结论 四物合剂对顺铂诱导的骨髓抑制有一定的对抗作用,这种作用主要体现在血小板指标.     

异补骨脂素的植物雌激素作用及其机制的探讨

目的利用雌激素受体(estrogenic receptor,ER)阳性乳腺癌T47D细胞和ER阴性乳腺癌MDA-MB231细胞观察异补骨脂素(isopsoralen)的雌激素样作用,并探讨其可能的作用靶点和机制。方法以ER拮抗剂ICI182,780为工具药,采用MTT细胞增殖实验观察异补骨脂素对T47D和MDA-MB231细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测细胞周期分布的变化。同时,利用实时荧光定量PCR法及流式细胞术检测异补骨脂素对T47D细胞pS2 mRNA及蛋白表达情况的影响。结果1×10-6mol·L-1和1×10-7mol·L-1异补骨脂素能够促进T47D细胞增殖,提高细胞分裂增殖指数,且该作用可被ICI182,780所拮抗;1×10-6mol·L-1和1×10-7mol·L-1异补骨脂素对MDA-MB231细胞增殖无影响。PCR及流式蛋白检测结果显示:1×10-6mol·L-1和1×10-7mol·L-1异补骨脂素可使pS2 mRNA和蛋白表达增加,同时加入ICI182,780可部分拮抗异补骨脂素对pS2表达的诱导和促进作用。结论异补骨脂素具有植物雌激素作用,该效应可通过作用于靶细胞雌激素受体途径实现。     

晨昏性动物血清LDH同工酶及血糖水平在十二时辰中的变化

在以前的工作中,我们曾发现:大鼠血清及组织乳酸脱氢酶(lactatedehy-drogenase,LDH)同工酶的变化与阴阳消长有着密切的关系;以此为基础,我们又选择小鼠作为实验材料,发现在一昼夜十二时辰的阴阳转化过程中,其血清LDH同工酶各组间的水平差异很大,而其血糖含量则相对比较稳定。那么在不同时辰,它们的水平究竟是高是低、遵循着怎样的变化规律,这些又与小鼠的生活习性、与昼夜     

四物汤治疗更年期综合征的作用机制研究

目的观察四物汤对更年期模型SD大鼠的作用并探讨发挥作用的可能靶点和机制。方法将正常SD雌性大鼠40只按体质量均衡和随机的原则分为正常组、模型组、四物汤低剂量组、四物汤中剂量组、四物汤高剂量组。除正常组外,其余组均切除两侧卵巢造模。手术2周后,正常组和模型组给予等量蒸馏水灌胃,四物汤低剂量组、四物汤中剂量组、四物汤高剂量组分别给予3,6,9 g/(kg·d)四物汤灌胃,均1次/d,持续6 d。第7天腹主动脉取血并分离血清,分离子宫并称质量,免疫组化法测定子宫组织雌激素受体ERα表达量;蛋白质免疫印记技术检测药物血清对T47D细胞雌激素受体ERα表达的影响。结果正常组大鼠的子宫系数与模型组比较差异有统计学意义(P0.01),四物汤低剂量组、四物汤中剂量组、四物汤高剂量组的子宫系数与模型组比较差异均有统计学意义,且随着四物汤方剂浓度的升高,子宫系数有增大的趋势;大鼠子宫组织ERα表达模型组与正常组比较差异有统计学意义(P0.01),四物汤中剂量组和高剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P0.01);四物汤低、中剂量组的含药血清能够明显提高T47D细胞ERα的表达水平(P均0.01)。结论四物汤对更年期综合征有很好的治疗作用,并可提高靶细胞ERα的表达水平。     

细胞凋亡途径探讨二仙汤治疗大鼠卵巢早衰实验研究

目的：通过卵泡颗粒细胞的凋亡途径探讨二仙汤对化疗性损伤卵巢早衰的影响。方法：将SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组和二仙汤组,腹腔注射顺铂建立化疗性损伤大鼠卵巢早衰动物模型。造模后连续4周各组灌胃给予相应药物治疗。观察大鼠一般情况;测定血清中E2、FSH、LH和Pro含量;观察卵巢组织形态;TUNEL法分析卵泡颗粒细胞的凋亡;免疫组化检测BAX、Bcl-2和VEGF蛋白的表达情况。结果：模型组体质量下降,动情周期紊乱,治疗后体质量增加,动情周期恢复。与正常组比较,模型组E2、LH下降,FSH水平升高,Pro含量各组比较无显著差异。TUNEL检测模型组较正常组阳性表达增多,二仙汤组较模型组阳性表达减少。模型组较正常组BAX表达明显升高,Bcl-2下降,二仙汤治疗后与模型组比较BAX表达量下降,Bcl-2表达升高;VEGF蛋白在模型组中表达明显低于正常组,二仙汤组较模型组表达增多,阳性组表达略有恢复。结论：顺铂可致卵泡颗粒细胞凋亡,造成卵巢功能过早衰退;二仙汤通过调节血清中各激素含量,改变凋亡细胞相关蛋白的表达量来降低顺铂对卵巢的损害,促进卵泡发育,改善并增强卵巢功能。     

顺铂建立大鼠卵巢早衰模型的实验研究

目的：探讨采用临床常用药物顺铂建立化疗性损伤卵巢早衰动物模型的方法。方法：通过观察阴道脱落细胞选取有正常动情周期的雌性SD大鼠60只随机分为正常组,低剂量组和高剂量组。按4 mg/kg和6 mg/kg分别给予低、高剂量组腹腔注射顺铂注射液,每周1次,连续2周。每天观察大鼠一般情况,体重,动情周期。取材后测定血清中E2、FSH、LH和Pro含量,光镜下观察卵巢病理组织形态变化。结果：体重下降,动情周期紊乱,动情间期延长。与正常比较,高、低剂量组E2水平不同程度降低,FSH、LH水平升高（P<0.05）。孕酮含量各组比较无统计学意义（P>0.05）。卵泡计数减少。结论：化疗药物顺铂可致大鼠卵巢功能明显衰退,卵泡发育障碍,生殖能力受损。为基础研究建立稳定的卵巢早衰动物模型提供一种操作简单,成功率高,结果可靠的实验方法。