血管内皮细胞的滤膜培养方法

血管内皮细胞的滤膜培养方法第三军医大学病理生理学教研室高原医学研究室（重庆６３００３８）许蜀闽王培勇孙秉盾培养中常用的载体为玻璃、塑料制品。我们用滤膜为载体有其优越性，因为滤膜带有微孔，使培养出来的内皮单层更接近生理状态成为有用单层。因此，滤膜培养为...     

缺氧时肺动脉平滑肌细胞膜电位、细胞质及线粒体Ca2+的动态变化

目的 研究缺氧时肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)膜电位、细胞质游离Ca2 及线粒体游离Ca2 的动态变化,探讨缺氧性肺血管收缩 (hypoxic pulmonary vasocontriction,HPV)的可能机制.方法 分离成年Wistar大鼠PASMCs进行体外培养,将PASMCs分为3组:分别负载荧光指示剂Di-8-ANEPPS (2 μmol/L)、Fluo-4/AM (4 μmol/L)和Rhod-5F (5 μmol/L).利用Na2S2O4 (2 mmol/L)的强还原特性,对细胞进行化学缺氧干预,在共聚焦显微镜下观察缺氧环境下细胞膜电位、细胞质Ca2 和线粒体Ca2 的动态变化.结果 用Na2S2O4对PASMCs施加缺氧刺激后,PASMCs细胞膜电位荧光强度迅速大幅度降低,继而迅速回升,于100 s时升至峰值且高于初始水平,随后逐渐下降低于初始水平;缺氧刺激后PASMCs细胞质Ca2 荧光强度缓慢增高,并呈持续增高趋势;PASMCs线粒体Ca2 荧光强度在缺氧刺激后迅速增高,持续约30 s后回降至低于起始值,随后开始回升,达到并逐渐高于起始值.结论 缺氧刺激PASMCs,导致膜电位、细胞质Ca2 和线粒体Ca2 呈特定模式的升高和降低的动态变化,除了细胞质Ca2 稳态失衡之外,线粒体Ca2 变化可能在HPV发生中也起着重要的作用.     

缺氧复合失血性休克动物血浆对血管内皮细胞形态及活力的…

为了探讨缺氧情况失血性休克的发生发展的机理，我们观察了在模拟海拔４０００ｍ高原失血性休克山羊的血浆（ＳＰ）对培养的肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）的作用。ＰＡＥＣ在含不同ＳＰ培养液中培养２４ｈ后进行观察，在高浓度ＳＰ条件下细胞收缩变圆、脱落，大部分细胞死亡，细胞活力明显降低，以上变化具有明显的浓度依赖关系（ｒ＝０．９８５，Ｐ〈０．００１）。加热灭活的ＳＰ或经鱼精蛋白沉淀的ＳＰ毒性作用明显减弱。ＰＡＥＣ在     

血管内皮细胞的滤膜培养方法

建立，稳定内皮细胞滤膜培养的模型。方法；分组比较不同明胶浓度处理滤膜，不同种植密度及孵育时间，不同孔径滤膜对内皮细胞生长的影响，从而确定滤膜培养的各实验条件。．结果：不同明胶浓度处理滤膜，不同种植密度不同育时间对内皮细胞生长的影响差异显著不同孔径滤膜对内皮细胞的影响差异不显著。结论：用１‰明胶处理滤膜，１０＾５／ｃｍ２的种植密度及孵育２ｄ即可获得较好结果。     

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互影响

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互影响第三军医大学新桥医院心内科（重庆６３００３７）刘健何作云王培勇于中和１许蜀闽２王俊元２孙秉庸２血管内皮细胞和血管平滑肌细胞在结构和功能上关系密切，二者的相互作用参与血管舒缩和血管壁结构的调节。本文...     

缺氧培养的肺动脉平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ自分泌的变化及其机制

缺氧培养的肺动脉平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ自分泌的变化及其机制第三军医大学新桥医院心内科（重庆６３００３７）刘健王培勇１廖卫公许蜀闽罗德成孙秉庸缺氧是否通过影响血管平滑肌细胞的自分泌功能而参与缺氧性肺动脉高压的发生尚不清楚。本实验动态观察了缺氧对培养的...     

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞相互作用对细胞内环核苷酸的影响

目的：观察了培养的小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）和肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）于缺氧时对细胞内环核苷酸的影响。结果：ＰＡＥＣ和ＰＡＳＭ共培养２４ｈ，ＰＡＥＣ细胞内ｃＡＭＰ含量显著降低（Ｐ＜００１），而ＰＡＳＭ细胞内ｃＡＭＰ含量显著增加（Ｐ＜００１），二种细胞内ｃＧＭＰ含量均显著降低（Ｐ＜００１）。缺氧对二种细胞内ｃＡＭＰ含量无显著影响，但能增加ＰＡＳＭ的ｃＧＭＰ含量（Ｐ＜００１），降低ＰＡＥＣ的ｃＧＭＰ含量（Ｐ＜００１）。ＮＯ合酶抑制剂硝基精氨酸对二种细胞的ｃＡＭＰ含量均无显著影响，但能使常氧培养的ＰＡＥＣ和缺氧培养的ＰＡＳＭ细胞内的ｃＧＭＰ含量显著降低（Ｐ＜００１）。结论：ＰＡＥＣ和ＰＡＳＭ的相互作用可引起第二信使系统传递的变化；缺氧可抑制ＰＡＥＣ的ＮＯ合酶活性而诱导ＰＡＳＭ的ＮＯ合酶活性     

异丙肾上腺素致大鼠心肌肥厚时心肌细胞核Ca2+转运

目的 观察异丙肾上腺素(Iso)致大鼠心肌肥厚模型心肌细胞核⁴⁵Ca²⁺摄取、钙释放通道肌醇1,4,5-三磷酸(IP₃)受体(IP₃R)和ryanodine受体(RyR)的动力学变化，以探讨细胞核Ca²⁺的转运是否参与心肌肥厚发生。方法 Iso(sc 20、10和5 mg·kg^-1剂量递减3 d，3 mg·kg^-1维持7 d)制备大鼠心肌肥厚模型，用差速离心和蔗糖密度梯度离心提纯心肌细胞核，用⁴⁵Ca²⁺同位素法测定细胞核钙摄取，用［³H］标记配体分析心肌细胞核IP₃R和RyR的动力学特点。结果 与对照组相比，Iso可导致大鼠心肌显著肥大，伴有显著心肌纤维化；心肌细胞核膜IP₃R与其配体的最大结合容量(B_max)减少23.4%(P<0.05)，解离常数(K_d)无明显变化(P>0.05)；细胞核RyR的B_max增加59.9%(P<0.01)，K_d无明显变化(P>0.05)；⁴⁵Ca²⁺摄取显著低于对照组(P<0.01)，最大摄取与对照组相比降低62%(P<0.01)，达半数最大摄取时［Ca²⁺］无显著变化。结论 Iso导致大鼠心肌肥厚纤维化发生过程中，心肌细胞核⁴⁵Ca²⁺摄取能力降低，核上RyR数目上调，而IP₃R数目下调，受体亲和力无变化，提示心肌细胞核钙调节系统参与心肌肥厚的发生过程。     

缺氧时培养的肺动脉平滑肌细胞的增殖与内皮素自分泌关系的探讨

目的：缺氧能否中通过影响血管平滑肌细胞血管活性肽的自分泌功能而参与缺氧性肺动脉高压的发生尚不明确,本实验在培养的新生小牛肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）上探讨内皮素－１（ＥＴ－１）自分泌在其中的作用。方法：采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入研究ＰＡＳＭ增殖,放免测定和斑点杂交技术研究ＥＴ－１分泌和表达。结果：无氧培养（０％Ｏ２）２４ｈ使新生小牛肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）的＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入与常氧组相比增加４２．     

连二亚硫酸钠在建立培养细胞的无氧环境中的应用

目的无氧环境是我们在用细胞进行研究的过程中经常会需要的。利用连二亚硫酸钠清除氧的能力，我们希望得到简便适用的方法制造培养细胞的无氧气、液相环境。方法2mmol的连二亚硫酸钠可完全清除溶液里的氧气，我们用血气分析的方法检测连二亚硫酸钠溶液的性质，以及装有连二亚硫酸钠溶液的密闭容器内的气体成分的变化。结果2mmol的连二亚硫酸钠溶液可保持无氧状态1h左右，溶液的pH值并无变化。含2mmol的连二亚硫酸钠的溶液可消耗密闭容器内的氧气，使容器内的氧含量接近与零。结论连二亚硫酸钠可帮助我们得到简便使用的方法制造培养细胞的无氧气、液相环境。