血管内皮细胞的滤膜培养方法

血管内皮细胞的滤膜培养方法第三军医大学病理生理学教研室高原医学研究室（重庆６３００３８）许蜀闽王培勇孙秉盾培养中常用的载体为玻璃、塑料制品。我们用滤膜为载体有其优越性，因为滤膜带有微孔，使培养出来的内皮单层更接近生理状态成为有用单层。因此，滤膜培养为...     

大鼠心肌细胞胞浆和核Ca2+震荡现象及其机制探讨

目的:在培养的新生大鼠心肌细胞上,观察多种刺激因素对细胞胞浆Ca²⁺([Ca²⁺]c)和核Ca²⁺([Ca²⁺]n)的影响,探讨其时间和空间关系及其机制。方法:以Fluo-4/AM荧光指示剂负载培养的心肌细胞,应用激光共聚焦扫描显微镜检测胞浆和核Ca²⁺震荡的变化。结果:正常心肌细胞内核Ca²⁺的荧光强度高于核周与细胞浆,三者均存在小幅度的钙震荡,分别加入去甲肾上腺素(10^-5mol/L)、异丙肾上腺素(10^-4mol/L)和三磷酸腺苷(ATP3×10^-3mol/L),均使心肌细胞钙震荡幅度明显升高(P＜0.01),L-型Ca²⁺通道阻滞剂维拉帕米(verapamil5×10^-4mol/L)、Ca²⁺-ATPase抑制剂thapsigargin(10^-6mol/L)和KCl(20mmol/L)使钙的周期性震荡消失。用thapsigargin10^-6mol/L预先阻断心肌细胞钙库的Ca²⁺摄取,去甲肾上腺素(10^-5mol/L)则不能引起钙震荡和荧光强度增加。结论:心肌细胞胞浆和核Ca²⁺均能产生钙震荡,而钙震荡的维持则依赖于细胞外Ca²⁺的内流、胞内钙库的Ca²⁺摄取和释放以及正常膜电位的维持。核与胞浆Ca²⁺变化不一致,提示细胞核上可能存在相对独立的Ca²⁺调节系统。     

缺氧时体外培养的肺动脉内皮细胞增殖和活力的改变

目的：探讨无氧和／或低氧对肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）活力和增殖的影响。方法：应用２形态学观察、细胞活力测定、流式细胞技术、＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入、免疫组化染色等方法，结果：缺氧使ＰＡＥＣ胞浆内的线粒体和粗面内质网增多，随缺氧时间的延长，线粒体肿胀，空泡化、内质网扩张。ＭＴＴ法细胞活力测定显示无氧６ｈ末ＰＡＥＣ的细胞活力无明显变化，无氧１２ｈ至２４ｈ末ＰＡＥＣ的细胞活力明显增加，在６ｈ、１２ｈ、１８ｈ、     

缺氧与复氧对培养的肺动脉内皮细胞功能的影响

缺氧与复氧均可引起肺血管收缩和损伤，本研究观察肺血管内皮细胞活力和血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）释放在其中的作用。培养的新生小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）在缺氧条件下（０％Ｏ２－９５％Ｎ２）培养６～２４ｈ，其上清液ＡＣＥ活性无显著变化，而细胞活力于缺氧１２～２４ｈ显著增加（与常氧组相比增加２０％～３３％，Ｐ＜０．０５）。ＰＡＥＣ在缺氧条件下培养２４ｈ，复氧培养３～６ｈ后其上清液ＡＣＥ活性显著增加（与常氧组和缺氧组相比Ｐ＜０．０１），于１２ｈ恢复至复氧前的水平。细胞活力的变化与ＡＣＥ的变化类似，复氧３～６ｈ显著高于常氧水平（Ｐ＜０．０１与常氧组相比），１２ｈ恢复至正常。上述结果表明ＰＡＥＣ的ＡＣＥ和细胞活力的变化可能对肺动脉壁本身ＲＡＳ功能的调节及缺氧性肺血管收缩的发生起一定作用。     

抗缺氧药物的实验研究—ⅠKY-Ⅱ号药提高小白鼠对缺氧耐受性的研究

为避免昼夜节律对实验结果的影响,观察了小白鼠对定量急性缺氧损伤的耐受性的昼夜节律。结果表明:在昼夜10个时点,小白鼠在模拟10000m高原停留60min的活存数,以5:30、7:00、9:30三个时点为最高,自12:00起动物活存数开始下降,自14:50～0:30五个时点活存数为0,经统计,二者相差显著(P<0.05)。分析同     

缺氧,缺血及再灌注山羊血浆对血管内皮细胞和中性粒细胞的影响

为了探讨缺氧，缺血及再灌注损伤的发生的机制，我们分别观察了缺氧（模拟海拔４０００ｍ高原）２４ｈ山羊血浆（ＨＰ），缺血１ｈ（在上述条件下于缺氧２４ｈ末放血使血压维持在６．０ｋＰａ１ｈ）山羊血浆（ＩＰ）和再灌注回输放出血液后２４ｈ）山羊血浆（ＲＰ）对中性粒细胞（ＰＭＮ）及培养的肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）的作用，ＰＭＮ在分别含ＨＰ、ＩＰ和ＲＰ的培养中温育１ｈ末，细胞活力明显升高（Ｐ〈０．００１），其升高     

内源性一氧化碳对大鼠主动脉球囊损伤后新生内膜形成及丝裂素活化蛋白激酶活性的影响

目的：探讨内源性血红素加氧酶（ｈｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅ,ＨＯ）／ 一氧化碳（ｃａｒｂｏｎ ｍｏｎｏｘｉｄｅ,ＣＯ） 系统对大鼠主动脉球囊损伤后新生内膜形成及丝裂素活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ, ＭＡＰＫ） 激活的调节作用。方法：采用大鼠主动脉内膜球囊拉伤模型,观察ＨＯ 抑制剂锌卟啉９（ｚｉｎｃ ｐｒｏｔｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎＩＸ,ＺｎＰＰ９）或其底物血红素左旋赖氨酸盐（ｈｅｍｅＬｌｙｓｉｎａｔｅ,ＨＬＬ）对血管壁细胞３ＨＴｄＲ掺入和ＭＡＰＫ 活性的影响,同时观察血管平滑肌ＨＯ活性和ＣＯ 生成的变化。结果：内膜拉伤后２ 周血管３ＨＴｄＲ 掺入和ＭＡＰＫ 活性明显增加,同时ＨＯ 活性和ＣＯ 的产生增加;ＺｎＰＰ９ 使血管的３ＨＴｄＲ掺入和ＭＡＰＫ 活性增加更为明显（ 分别比单独拉伤组增加３４ ．６％ 和３９．２％ ,均为Ｐ＜ ０．０１） ;而ＨＬＬ 使血管的３ＨＴｄＲ 掺入和ＭＡＰＫ 活性则明显降低（ 比单独拉伤组分别减少２９．４５ ％ 和３３．６ ％ ,均为Ｐ＜ ０．０１） 。结论：ＨＯ 活性上调或ＣＯ 产生增加是血管对机械拉伤的一种保护性应激反应;内源性ＨＯ／ＣＯ 系统直接     

缺氧对肺动脉平滑肌细胞的血小板源性生长因子-A链、-B链及其α、β亚基因表达的影响

缺氧对肺动脉平滑肌细胞的血小板源性生长因子－Ａ链、－Ｂ链及其α、β亚基因表达的影响刘健罗德成王培勇孙秉康采用核酸分子杂交技术观察缺氧对肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）的血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）－Ａ、Ｂ链及其α、β受体基因表达的影响。采用贴片法进行Ｐ...     

缺氧时肺动脉平滑肌细胞膜电位、细胞质及线粒体Ca2+的动态变化

目的 研究缺氧时肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)膜电位、细胞质游离Ca2 及线粒体游离Ca2 的动态变化,探讨缺氧性肺血管收缩 (hypoxic pulmonary vasocontriction,HPV)的可能机制.方法 分离成年Wistar大鼠PASMCs进行体外培养,将PASMCs分为3组:分别负载荧光指示剂Di-8-ANEPPS (2 μmol/L)、Fluo-4/AM (4 μmol/L)和Rhod-5F (5 μmol/L).利用Na2S2O4 (2 mmol/L)的强还原特性,对细胞进行化学缺氧干预,在共聚焦显微镜下观察缺氧环境下细胞膜电位、细胞质Ca2 和线粒体Ca2 的动态变化.结果 用Na2S2O4对PASMCs施加缺氧刺激后,PASMCs细胞膜电位荧光强度迅速大幅度降低,继而迅速回升,于100 s时升至峰值且高于初始水平,随后逐渐下降低于初始水平;缺氧刺激后PASMCs细胞质Ca2 荧光强度缓慢增高,并呈持续增高趋势;PASMCs线粒体Ca2 荧光强度在缺氧刺激后迅速增高,持续约30 s后回降至低于起始值,随后开始回升,达到并逐渐高于起始值.结论 缺氧刺激PASMCs,导致膜电位、细胞质Ca2 和线粒体Ca2 呈特定模式的升高和降低的动态变化,除了细胞质Ca2 稳态失衡之外,线粒体Ca2 变化可能在HPV发生中也起着重要的作用.     

肥胖女大学生综合减肥前后血压血糖血脂的变化

目的 研究单纯性肥胖女大学生减肥前后血压、血糖、血脂的变化，为制定女大学生肥胖防制措施提供理论依据。方法抽取单纯性肥胖女大学生60名，采用有氧运动、合理饮食、心理矫正等措施进行减肥，比较减肥前后血压、血糖、血脂的变化。结果减肥后女大学生血压、血糖、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇浓度明显降低，而高密度脂蛋白胆固醇浓度明显升高。结论综合减肥方法对女大学生减肥效果明显，能达到健康要求。