胃癌宿主脾脏免疫功能的实验与临床研究

本研究旨在通过一系列实验和临床研究,探讨脾切除对诱发胃癌过程的影响,重点分析了进展期胃癌宿主脾脏的免疫状态,并配对比较了联合切脾或非切脾胃癌根治术后,患者免疫功能的变化差异,为临床合理地开展胃癌扩大根治术提供了重要的免疫学依据。全文由四部分组成,主要研究内容及结果如下:一、大鼠胃癌模型的建立及脾切除对诱癌过程     

失血性大鼠休克后肠、肝、肺组织中细胞因子表达、释放时相及其伴随的病理变化

目的：探讨休克后促炎细胞因子的表达、释放时相及伴随的肠、肝、肺组织病理变化。方法：80只SD大鼠随机均分为失血性休克组和对照组。采用RT-PCR、ELISA方法检测失血性休克后30、60、90min及复苏后30、90min肠、肝、肺组织内TNF-α、IL-6 mRNA表达及血清中TNF-α、IL-6含量；HE和IHC染色检测伴随的组织病理变化。结果：①休克30min时，肠、肝、肺内的促炎细胞因子表达未见升高；60min时肠道先出现TNF-αmRNA表达升高（P〈0．05）：而肝脏在90min开始表达升高（P〈0．05），肺脏则在复苏后30min开始表达升高（P〈0．05）。复苏后90min肠、肝、肺的细胞因子表达都继续显著升高（P〈0．01）。②TNF-α 在肠、肝、肺的表达升高最早，其后为IL-6 mRNA。③30min时门静脉和外周血中TNF-α、IM的含量与对照组相比无显著差异，而60min时门静脉血中含量显著升高（P〈0．01）。④休克后肠黏膜坏死脱落；肝组织结构紊乱、肝窦增宽、肝细胞变性坏死；肺脏间质水肿、炎症细胞浸润。结论：失血性休克时细胞因子的释放顺序是肠道、肝脏和肺脏，推测存在“肠-肝-肺”细胞因子释放轴的可能，有待进一步确定。     

小鼠胃癌MAGE3抗原H-2K~k限制性抗原肽的筛选

本研究对小鼠胃癌MAGE3抗原H 2Kk 限制性的抗原肽进行了筛选。用CTL表位预测的基序法对易与H 2Kk 结合的多肽序列进行了预测并人工合成了 4个多肽。在体外检测了各多肽刺激H 2Kk 型小鼠T细胞增殖和分泌IFN γ的能力 ,同时测定了各多肽诱导出的CTL对小鼠前胃癌细胞株MFC细胞的杀伤活性。结果显示 ,抗原肽MAGE31 3 0 1 3 7可有效地刺激特异性T细胞的增殖和分泌细胞因子IFN γ ,其诱导出的CTL细胞对MFC细胞也有较高的杀伤活性。这些实验结果证实抗原肽MAGE31 3 0 1 3 7可以作为多肽疫苗来对表达MAGE3抗原的H 2Kk 型小鼠胃癌进行免疫治疗。     

艾灸对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的 :观察艾灸对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法 :将 40只荷瘤小鼠随机分为四组 ,对照组、艾灸组、5 氟脲嘧啶 ( 5FU)组、5FU +艾灸组。艾灸组、5FU +艾灸组分别在“中脘”、“神阙”、“关元”穴隔药饼灸 ,隔天 1次 ,治疗 8次。 5FU组、5FU +艾灸组在腹部注射 0 2 5mg/ 0 1mL5FU ,3天 1次 ,共治疗 4次。所有治疗完毕后 2 4hr处死动物。测定小鼠T淋巴细胞、自然杀伤细胞 (NK)及进行淋巴因子激活的杀伤细胞 (LAK)杀伤功能检测。结果 :艾灸组CD3、CD4、CD4/CD8比率、NK细胞、LAK杀伤活性比 5FU组显著提高 (P <0 0 5、P <0 0 0 5、P <0 1、P <0 1、P <0 0 1 ) ,差异明显 ,具有显著性意义。结论 :艾灸能提高小鼠的免疫力 ,而 5FU有抑制作用 ,使荷瘤小鼠免疫力降低     

自发及诱导性过氧化氢生成增强胃肠道肿瘤细胞与血管内皮粘附作用的研究

目的探讨胃肠道肿瘤细胞内活性氧生成在肿瘤进展中的作用.方法选择三种胃癌细胞系SGC-7901、MKN-45、MKN-28及三种结肠癌细胞系LS174T、LoVo、HCT-8,以过氧化物酶-荧光法检测癌细胞自发的过氧化氢生成量,以及癌细胞在佛波酯刺激后,诱导的过氧化氢生成,同时观察癌细胞与血管内皮粘附作用的变化特点.结果胃、结肠癌细胞不同程度地自发生成过氧化氢,平均浓度为0.9 nmol@L-1@10-6细胞,在佛波酯的作用下,这种生成被诱导性增加,平均浓度为2.1nmol@L-1@10-6细胞.常规培养的肿瘤细胞与内皮细胞均有粘附作用,当以过氧化氢酶作用后,SGC-7901、MKN-45的粘附力有明显的下降(P＜0.05);癌细胞在佛波酯作用后,SGC-7901、MKN-45、LS174T及LoVo在过氧化氢生成增加的同时,与内皮细胞的粘附力均比作用前为高,并可被过氧化氢酶所抑制.结论胃、结肠癌细胞组成性及诱导性过氧化氢生成可能有利于癌细胞转移的实现.     

胃癌细胞株核因子κB组成性激活对细胞增殖的影响

目的探讨胃癌细胞株是否存在核转录因子(NF)-κB组成性激活及对胃癌细胞增殖的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR法)和蛋白免疫印迹法(Westernblot法)检测4株不同分化程度的胃癌细胞株NF-κB的mRNA和蛋白表达,比较4株胃癌细胞株中NF-κB的转录和蛋白质表达水平的差异,并利用TransAMTMNF-κBP65试剂盒比较不同胃癌细胞株中P65亚基的蛋白活性差异。采用噻唑蓝(MTT)比色法观察NF-κB活性抑制剂PDTC(吡咯烷二硫代氨基甲酸盐)对胃癌细胞增殖的影响。结果4株胃癌细胞株中均存在NF-κB的组成性激活,且存在蛋白表达和活性差异。活化的P65亚基在MKN28、MKN45细胞株中表达较低,在AGS、SGC-7901细胞株中表达较高。经PDTC处理的实验组胃癌细胞的增殖明显受到抑制,对照组呈正常生长。结论胃癌细胞株中存在NF-κB组成性激活及P65蛋白表达差异。抑制NF-κB的活性可明显抑制胃癌细胞的增殖。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对NF-κB调控基因血管内皮生长因子转录和表达的影响

血管内皮生长因子（VEGF）是最重要、最特异的一种血管发生特异性生长因子，在肿瘤血管的形成中起关键作用。活化的核转录因子NF-κB（NF-κB）可调控VEGF等与血管形成相关的基因转录，参与肿瘤的生长调控。吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）是一种抗氧化剂，是目前公认的NF-κB活性特异性抑制剂。我们通过PDTC抑制胃癌SGC-7901细胞中NF-κB活性，探讨NF-κB对VEGF基因转录和表达的影响，阐明NF-κB在肿瘤血管形成中的作用。     

胃癌病人自身免疫机能的临床研究

本文报道我科近年来应用经典的NK 酶释放法和间接免疫荧光技术对30例进展期胃癌病人检测其自然杀伤细胞(NK)活性和T 细胞亚群,结果提示胃癌病人术前NK 活性明显低下,仅有1例近于正常值为35.7%,平均为16.70±1.40%,与正常值34.92±0.39%(n=50)比较有显著差异(P<0.     

雄激素和雄激素受体对肝癌细胞株PEG10表达的作用

目的 探讨雄激素和雄激素受体(AR)对肝癌细胞株PEG10表达的调控作用.方法 设计合成针对人ARsiRNA,并转染HepG2和7404肝癌细胞株.用双氢睾丸酮(DHT)干预HepG2细胞.Western Blot检测AR和PEG10表达水平.结果 从3对AR siRNA中筛选到1对siRNA(AR siRNA-3),它在2种肝癌细胞株中均可有效抑制AR的表达,其抑制作用呈剂量依赖关系.2种肝癌细胞株中,浓度为240 nmol/L的AR siRNA-3在转染后24 h,对AR抑制效率可达80%以上,且抑制效果可持续至72 h.AR siRNA-3转染24h后PEG10表达水平降低,转染48 h后,PEG10表达水平降低非常明显,72 h后PEG10表达有所上升.DHT可促进HepG2细胞PEG10的表达,呈剂量依赖关系.DHT对AR表达未见明显作用.结论 雄激素和AR参与了肝癌细胞株PEG10表达的调控.这可能是男性肝细胞癌发病率较高的原因之一.     

MTT比色法检测肝细胞再生刺激因子的生物活性

目的建立一种简便、快速安全可靠的肝细胞再生刺激因子生物活性的检测方法。方法参照Ｍｏｓｍａｎｎ的ＭＴＴ比色法，加以改进，用体外培养的肝癌细胞株作靶细胞，二甲亚砜为终止反应剂，用ＢＩＯ＿ＴＥＫＥＬ３１２酶标仪检测ＯＤ５７０＿６３０值，来测试肝细胞再生刺激因子（ＨＳＳ）的生物活性，并与〔３Ｈ〕ＴｄＲ掺入法作比较。结果ＭＴＴ比色法可灵敏地反映出细胞数量上的变化，在一定ＨＳＳ剂量范围内，细胞增殖与ＨＳＳ呈量效依赖关系。同传统的〔３Ｈ〕ＴｄＲ掺入法作比较，有良好的可比性。结论ＭＴＴ比色法鉴定细胞存活和细胞生长，可在一般无菌室内操作，具有特异性高、快速、灵敏、方便等特点。