前列腺癌PC-3M细胞株膜结合型唾液酸酶的活性测定与基因表达

目的:研究前列腺癌PC-3M细胞株膜结合型唾液酸酶(hmSD)的活性和基因表达.方法:收集指数生长期的PC-3M细胞,匀浆后离心取上清,与底物共同孵育,以TBA显色反应检测所生成的唾液酸,计算唾液酸酶活性;应用RT-PCR方法检测hmSD的mRNA表达.结果:在PC-3M细胞株可检测到hmSD活性及其RNA的表达.结论:PC-3M细胞在基因和蛋白水平有hmSD的表达.     

重组分泌型人PSP94对前列腺癌细胞株PC-3抑制作用的研究

目的：探讨重组分泌型人PSP94（rsHPSP94）对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3生长的作用和作用机制。方法：采用噻唑蓝（MTT）法检测rsHPSP94对PC－3的抑制率。流式细胞仪检测细胞周期分布的变化。结果：rsHPSP94以剂量和时间依赖性抑制PC－3的增殖，流式细胞仪分析表明细胞增殖阻滞在G1期，并出现凋亡。结论：本实验结果表明rsHPSP94通过使细胞阻滞在G1期抑制PC－3细胞的增殖。     

HSD1与微管蛋白在生精细胞中的定位关系研究

目的 确定HSD1与微管蛋白在生精细胞中的定位关系,为进一步研究其在精子发生中的功能奠定基础.方法 通过分子克隆方法构建GFP-HSD1和FLAG-HSD1的真核表达质粒,转染精母细胞系GC-2spd (ts),同时筛选稳定表达FLAG-HSD1的细胞株.应用免疫荧光实验观察外源和内源表达的HSD1与微管蛋白α-tubulin在GC-2spd(ts)或小鼠原代生精细胞中的定位分布.结果 成功构建稳定表达FLAG-HSD1融合蛋白的GC-2spd(ts)细胞株.外源表达HSD1在GC-2 spd(ts)中与α-tubulin明显共定位;内源表达HSD1与α-tubulin在GC-2spd(is)和原代小鼠生精细胞中明显共定位.结论 HSD1与微管蛋白α-tubulin在生精细胞中存在明显的共定位关系.     

丁酸钠对前列腺癌PC-3M细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：研究丁酸钠对前列腺癌PC-3M细胞株的增殖抑制和诱导凋亡作用。 方法：前列腺癌PC-3M细胞经不同剂量丁酸钠作用后,相差显微镜观察细胞形态变化,MTT测定丁酸钠对PC-3M细胞的增殖抑制率,吖啶橙/溴化乙锭染色检测凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡峰。 结果：丁酸钠对PC-3M细胞有显著的增殖抑制作用,呈时间剂量依赖性;并使PC-3M细胞产生凋亡形态学变化;细胞周期被阻滞于G₁/G₀期和G₂/M 期,S期细胞减少,有亚G₁峰出现。结论：丁酸钠对PC-3M细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用。     

大鼠睾丸AQP7、AQP8表达随龄变化及人参二醇皂苷对其表达的影响

目的：探讨水通道蛋白7和8（aquaporin 7,AQP7;aquaporin 8, AQP8）的表达与睾丸生精功能的关系,以及人参二醇皂苷（PDS）对睾丸水通道蛋白表达的影响。 方法：4、12周龄Wistar大鼠分为盐水对照组(Con组)（n=6）和PDS腹腔注射组(PDS组)(n=6)。PDS组每日给予PDS腹腔注射（25 mg•kg^-1•d^-1,1　mL）,Con组注射等体积生理盐水,给药2周。采用半定量RT-PCR和Western blotting比较睾丸AQP7与AQP8的mRNA和蛋白质表达水平。 结果：随增龄睾丸AQP7和AQP8 mRNA和蛋白表达明显增高;4周龄大鼠PDS腹腔注射2周后睾丸AQP7和AQP8表达增强,PDS对4周龄大鼠睾丸AQP7蛋白质表达有明显的上调作用,12周龄大鼠接受14 d PDS腹腔注射后其AQP8蛋白质表达水平略有下降。 结论：睾丸AQP7和AQP8的表达随性成熟明显增高;PDS对睾丸水通道表达有明显的调节作用。     

小鼠体内生精系统重塑模型的建立

目的建立小鼠体内生精系统重塑模型,为在体研究生精相关基因的功能提供技术方法。方法以白消安(busulfan)40mg/kg腹腔注射后3～5周雄性小鼠为受体小鼠,以稳定表达GFP的精原细胞系GC-1spg为供体细胞,移植入受体小鼠睾丸曲细精管中,观察供体细胞移植后在受体小鼠曲细精管中的定位、增殖和分化情况。结果成功建立小鼠睾丸曲细精管显微注射技术平台,并发现精原细胞系GC-1spg移植回体内环境后,不但能够在受体小鼠曲细精管生存,而且能够定位于相当于精原干细胞所处的niche中增殖、分化,并产生成熟精子。结论我们应用精原细胞系GC-1spg成功地建立了小鼠体内生精系统重塑模型。     

前列腺癌PC-3M细胞hmSD活性与细胞凋亡相关性的实验研究

目的：研究前列腺癌PC-3M细胞株hmSD的活性与细胞凋亡的相关性。方法： 应用丁酸钠诱导前列腺癌PC-3M细胞发生凋亡，吖啶橙/溴化乙锭染色检测细胞凋亡率；收集丁酸钠作用后的PC-3M细胞，匀浆后离心取上清，与底物共同孵育，以硫代巴比妥酸（TBA）显色反应检测所生成的唾液酸，计算唾液酸酶活性；将细胞凋亡率与hmSD活性进行相关性分析。结果：丁酸钠诱导PC-3M细胞凋亡的同时显著下调hmSD的活性，凋亡率与hmSD活性呈负相关。结论：hmSD活性变化与前列腺癌细胞凋亡呈相关性。