探讨样本吸附反应杯对临床检验结果的影响及解决办法

目的研究磁微粒化学发光平台中,样本吸附反应杯造成检测结果的假阳性,为医学实验室提供一种研究样本吸附的方法,并提出相关解决办法。方法首先对磁微粒化学发光和酶联免疫吸附测定(ELISA)平台间测试结果进行比对,确认平台差异标本,然后通过替换磁微粒化学发光试剂盒中磁微粒组分,查找造成平台差异的主要原因,最后在样本稀释液中加入表面活性剂,试图通过表面活性剂的作用,使磁微粒化学发光平台与ELISA平台检测结果一致。结果 5例样本出现平台间差异,其在磁微粒平台全部为阳性,ELISA平台全部为阴性;将磁微粒试剂盒中磁微粒组分替换成缓冲液后,其检测结果仍为阳性,证实磁微粒平台样本与反应杯发生非特异性结合;通过在样本稀释液中添加0.5%Triton X-100后,5例样本在磁微粒化学发光平台的假阳性现象消失。结论磁微粒化学发光平台检测结果易受非特异性结合因素影响,特别是在间接法免疫分析中,人体内免疫球蛋白非特异性结合在反应杯上,导致检测结果偏高,在样本稀释过程中加入适当浓度的表面活性剂可以降低此现象的发生概率。     

妇科联检临床应用评价

目的评价妇科联检对阴道分泌物常规检测的临床应用价值。方法对804例门诊女性阴道分泌物样本用妇科联检试剂进行pH、过氧化氢、白细胞酯酶、唾液酸苷酶、脯氨酸氨基肽酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶5项指标联合检测,结合运用染色镜检进行比对判断乳酸杆菌、白细胞、细菌性阴道病（BV）、滴虫、念珠菌。结果乳酸杆菌、白细胞、BV、滴虫和念珠菌检验结果的符合率分别为99.8%、89.0%、99.6%、98.0%、89.5%。结论过氧化氢浓度可替代阴道乳酸杆菌镜检判断;白细胞酯酶可提示阴道炎;唾液酸苷酶及脯氨酸氨基肽酶可作为BV诊断的可行依据;乙酰氨基葡萄糖苷酶结合pH值提示可能滴虫性或念珠菌性阴道炎感染。     

后天感染河南樱桃谷鸭乙型肝炎病毒模型的建立

目的:建立并验证后天感染河南樱桃谷鸭乙型肝炎病毒(DHBV)模型。方法:筛选3日龄DHBV阴性河南樱桃谷鸭,经胫静脉注射DHBV阳性血清建立DHBV模型鸭,连续观察42 d,采用荧光定量PCR方法检测鸭血清和肝脏中DHBV DNA变化情况。DHBV阴性鸭48只,分为正常组、模型组和3TC组,每组16只。模型组和3TC组于鸭3日龄时建模,模型组给予生理盐水2 mL/(kg·d),3TC组给予3TC 20 mg/(kg·d),连续给药10 d。PCR检测给药5、10 d后及停药3 d后血清和肝脏中DHBV DNA含量,并进行肝脏病理学观察。结果:感染2 d后,鸭血清和肝脏中均可检测到DHBV DNA。血清DHBV DNA水平第14天达到高峰,拷贝数为7.7×109mL-1,肝脏DHBV DNA第21天达到高峰,拷贝数达2.1×109mL-1,42 d内均维持较高的DHBV DNA水平。与模型组比较,3TC组鸭血清和肝脏DHBV DNA拷贝数明显降低(血清:F组间=17.625,F时间=68.141,F交互=134.517,P<0.001;肝脏:F组间=69.430,F时间=35.330,F交互=75.770,P<0.001)。3TC组鸭用药10 d后,血清和肝脏HBV DNA抑制率分别为86.5%和84.9%,但停药3 d后有轻度"反弹"现象。3TC组肝组织病变较模型组有明显改善。结论:河南樱桃谷鸭后天感染DHBV较敏感,病毒在体内增殖稳定,是DHBV感染的理想动物模型。     

沙眼衣原体检测存在问题的再探讨

结合笔者经验,进一步探讨沙眼衣原体检测中存在的问题,包括检测抗体试剂可靠性、胶体金检测卡检测衣原体抗原灵敏度低、检测的金标准、医务人员的学术道德等。这些问题已经严重影响沙眼衣原体检测技术的临床推广,亟待相关部门做出定论。     

HBV cccDNA SYBR GreenⅠ荧光定量检测方法的建立及初步应用

目的 建立一种稳定、特异、敏感的乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA (cccDNA) SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法.方法 根据乙肝病毒松弛环状DNA (HBVrcDNA)与cccDNA的结构差异,设计跨越双缺口的特殊引物,并利用一种ATP依赖不降解质粒的DNA酶(Plasmid-SafeTMATP dependent DNase,PSAD)提高反应的特异性;建立荧光定量PCR标准曲线,并进行特异性、敏感性和重复性检验.应用所建立的方法评价拉米夫定和阿德福韦酯对HBVcccDNA的抑制效果.结果 该方法能特异性检测到HBV cccDNA,在2.68×1082.68×103 copies/μl检测范围之间有良好的线性关系,相关系数为-1.00,扩增效率为102％;最低检测限为2.68×101 copies/μl.拉米夫定和阿德福韦酯对HBVcccDNA均有很好的抑制效果.结论 该实验所建立的方法稳定性强、特异性好、灵敏度高,可快速定量检测HBVcccDNA,用于抗HBV药物的评价.     

156株肺炎支原体对14种抗生素的药敏分析

目的 了解肺炎支原体对临床常见14种抗生素的敏感情况及其特点,用于说明肺炎支原体药敏检测在临床的意义.方法 用商品化试剂盒考察临床收集并确认的156株肺炎支原体菌株对14种抗生素的药敏情况.结果 14种抗生素的敏感率分别是:依托红霉素(58.3%)、美满霉素(94.2%)、强力霉素(92.3%)、红霉素(54.5%)、阿奇霉素(71.2%)、交沙霉素(76 9%)、乙酰螺旋霉素(70.5%)、克林霉素(74.3%)、克拉霉素(68.6%)、罗红霉素(64.1%)、环丙沙星(60.9%)、莫西沙星(87.8%)、左氧氟沙星(82.7%)、加替沙星(86.5%).结论 肺炎支原体在临床耐药情况日趋严重,药敏检测对有效快速治疗意义重大.     

肝纤维化血清标志物的临床应用评价

目的评价肝纤维化血清标志物透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、层粘连蛋白(LN)对肝纤维化诊断的应用价值。方法以肝穿病理学组织检查为金标准,采用化学发光法肝纤维化血清标志物定量检测试剂检测70例患者样本,计算血清标志物的灵敏度、特异性和准确性。结果与金标准相比,HA、PⅢNP、CⅣ、LN的灵敏度分别为83.3%、58.3%、66.7%、50.0%,特异性分别为77.3%、81.8%、72.7%、81.8%,诊断肝纤维化的准确性分别为81.4%、65.7%、68.6%、60.0%。结论血清HA、LN、PⅢNP、CⅣ水平与肝组织纤维化有良好的相关性,能较好地反映肝病的慢性化程度和肝纤维化活动水平及程度,在肝纤维化诊断中具有重要的应用价值。     

比色法与原子吸收法检测尿锌尿钙对比研究

目的 评价比色法检测尿锌、尿钙的可靠性,建立一种方便、快捷的尿锌、尿钙含量检测方法.方法 用比色法尿锌半定量快速检测试剂盒及母乳钙/尿钙检测试剂盒和原子吸收法分别检测50份新鲜的尿液标本中锌和钙的含量.结果 以原子吸收法检测结果为标准,比色法尿锌测定的符合率为100%,比色法尿钙测定的符合率为98%.结论 用比色法试剂盒检测尿锌、尿钙,方法操作简单快速、结果准确可靠,适合临床推广应用.     

CA50靶向抗体文库的构建筛选及应用评价

目的 获得针对CA50靶点的高亲和力、高特异性抗体,建立体外诊断CA50检测试剂盒,提高肿瘤诊断的特异性和灵敏度。 方法 PCR 技术获得单链抗体( ScFv)基因并克隆入pcomb3XSS噬粒载体,通过电转化获得ScFv噬菌体抗体库。用CA50特性识别表位LST a(唾液酸化-乳糖-N-四糖a)的抗原淘洗筛选,获得针对CA50靶点的特异性抗体基因序列。随机挑选克隆测序,验证ScFv抗体库的多样性。利用重叠PCR技术获得人鼠嵌合抗体基因,经过抗体表达纯化及配对筛选建立双抗体夹心法CA50检测试剂盒。同时收集临床诊断阳性样本54例和临床阴性对照样本146例,利用该研究建立的CA50检测试剂盒与罗氏CA50试剂盒进行平行对照,评价其检测相关性。 结果 建立噬菌体抗体库的容量为2.5×10⁸,具有较好的多样性。24个PCR鉴定阳性克隆测序,结果为20个正确插入且插入序列均不相同。经过3轮淘洗筛选出5个阳性克隆,经过抗体配对筛选建立的CA50试剂盒临床样本检测结果与罗氏的临床相关性(r=0.98)。 结论 通过噬菌体展示抗体库技术成功筛选出了针对CA50的高特异性、高亲和力抗体,为CA50检测在相关肿瘤辅助诊断中的应用提供可能性。     

进一步探讨细菌性阴道病存在的几个问题

结合作者的经验,进一步探讨了细菌性阴道病存在的几个问题。