大肠癌组织中HLA-I类分子的表达及意义

目的探讨大肠癌组织中HLA-Ⅰ类分子表达及其在大肠癌转移中的意义。方法以化学发光法检测81例大肠癌患者术前血清癌胚抗原(CEA)含量;每例患者术中取癌组织及癌旁组织．采用免疫组化SP法检测HLA-Ⅰ类分子．结果大肠癌组织中HLA-Ⅰ阳性率为43．2%(35/81),其中A期73．3%、B期55．6%、C期25．9%,D期16．7%．各期间相比P均＜0．01。转移组大肠癌患者HLA-Ⅰ类分子阳性率为23．1%,未转移组为61．9%,二者比较,P均＜0．01．在转移组大肠癌患者中．癌组织HLA-Ⅰ类分子缺失率(76．9%)高于血清CEA阳性率(51．3%)．结论大肠癌组织中HLA-Ⅰ类分子的表达缺失是大肠癌发生及转移的重要因素．检测HLA-Ⅰ类分子表达还有助于大肠癌转移及预后判断。     

淋巴细胞HLA-A mRNA方法学建立及在乙型肝炎病毒感染患者中的应用

目的建立外周血淋巴细胞HLA-A mRNA的检测方法,探讨其在慢性乙型肝炎、肝炎后肝硬化、肝癌患者中的应用价值。方法改良法提取人外周血淋巴细胞RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)一步法扩增HLA-A mRNA,琼脂糖凝胶电泳结果采用Bandscan软件分析相对灰度值,半定量HLA-A的基因表达。结果半定量HLA-A所得平均相对灰度值在慢性乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组、正常对照组分别为0．54±0．21、0．34±0．27、0．22±0．16、0．95±0．19。慢性乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组均明显低于正常对照组(P<0．05),慢性乙型肝炎组与肝癌组,肝硬化组与肝癌组相比差异有统计学意义(P<0．05),慢性乙型肝炎组与肝硬化组有下降趋势。结论成功建立检测HLA-A基因的RT-PCR一步法,从基因转录水平上证实慢性乙型肝炎、肝炎后肝硬化、肝癌患者外周血淋巴细胞HLA-A下调,且与相应患者细胞免疫功能减弱密切相关。     

乙酸乙酯萃取尿游离皮质醇性能验证

目的:评价DXI800检测系统乙酸乙酯萃取法检测尿游离皮质醇的性能,探索建立乙酸乙酯萃取尿游离皮质醇的规范流程。方法:参考美国临床实验室标准化协会(NCCLS)文件,制定性能验证的方案。评价DXI800检测系统测定尿游离皮质醇的正确度、检测范围、批内精密度及批间精密度;并分析换溶复溶剂、震荡时间、离心速度、储存时间等因素对乙酸乙酯游离皮质醇萃取效率中的影响。结果:检测系统测量正确度,最大偏倚为3.11%;标准物质批间精密度为4.38%;乙酸乙酯萃取游离皮质醇最大效率为93.39%;低、高两水平尿液游离皮质醇萃取批内精密度分别为2.17%、1.92%;批间精密度分别为3.30%、2.61%;分析不同换溶复溶剂对萃取效率的影响,结果显示20%分析纯乙醇溶液复溶回收率最高(P<0.05),皮质醇零浓度定标液复溶回收率最低(P<0.05)。尿液萃取时震荡30s,4000r/min离心效果最好(P<0.05),尿液采集后48h内检测差异无统计学意义(P>0.05)。结论:DXI800检测系统测定尿游离皮质醇正确度高,精密度好,检测性能可满足临床需求。乙酸乙酯可有效萃取尿游离皮质醇,20%乙醇溶液是较好的游离皮质醇换溶复溶剂。     

山东地区宫颈癌危险因素病例对照研究

目的探讨山东地区宫颈癌发病危险因素。 方法采用以医院为基础的1:2病例对照研究,用统一的调查表对山东省三所省级医院893例宫颈癌患者及1?786例对照进行调查,应用条件Logistic回归分析筛选宫颈癌发病危险因素。结果在单因素Logistic回归分析的基础上,HPV16感染、HPV52感染、吸烟、首次性交年龄、性伴侣个数、人工流产次数、配偶有阴茎癌或前列腺癌、绝经和使用避孕套共9个因素被引入回归模型,其OR值依次为：28.256、10.164、2.946、4.529、4.012、4.211、1.312、0.507和0.612。结论HPV16、HPV52感染是山东地区宫颈癌发生的主要危险因素,首次性交年龄早、性伴侣个数多、人工流产次数多、吸烟以及配偶有阴茎癌或前列腺癌可增加宫颈癌发生的危险,而绝经和使用避孕套则降低宫颈癌的发生风险。     

外周血sHLA-G与PGR、GPR联合检测在胃癌诊断中的效能评估

目的 检测血浆可溶性HLA-G(sHLA-G)及胃蛋白酶原PGI、PGII胃泌素-17(G-17)在胃癌及相关胃病患者外周血中的表达水平,评估sHLA-G与PGR(PGI/PGII)、GPR(G-17/PGI)联合检测在胃癌诊断中的效能.方法 采用化学发光微粒子免疫分析技术检测50例健康对照组、46例萎缩性胃炎组、50例胃上皮内瘤变组、36例早期胃癌组及74例进展期胃癌组PGI、PGII的表达,同时采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测G-17、sHLA-G的表达水平,通过Logistic回归将各标志物引入方程,构建胃癌诊断模型,利用ROC曲线评估其在胃癌诊断中的效能.结果 与健康对照组、萎缩性胃炎组和胃上皮内瘤变组比较,早期胃癌和进展期胃癌组的PGR较低(P<0.05),而GPR与sHLA-G较高(P<0.05);sHLA-G与PGR诊断胃癌的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.846(95%CI,0.760~0.910)和0.835(95%CI,0.748~0.902),均高于GPR的AUC 0.716(95%CI,0.617~0.802, P<0.05);构建联合检测胃癌诊断模型的方程为logit(Y)=0.41+0.03×sHLA-G-5.90×PGR,得到新变量Y诊断胃癌的AUC为0.924(95%CI,0.873~0.967),高于sHLA-G和PGR(P<0.05).结论 sHLA-G和PGR联合检测对胃癌具有较高的诊断价值,可作为传统肿瘤标志物的有益补充.     

两种方法评估胃蛋白酶原在萎缩性胃炎和胃癌中的诊断价值

目的 评估以化学发光微粒子免疫分析法(CLIA)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测胃蛋白酶原用于萎缩性胃炎和胃癌辅助诊断的价值,并探讨两种方法检测的一致性。 方法 采用CLIA和ELISA分别检测胃蛋白酶原(PG)在健康对照组(95例)、非萎缩性胃炎组(173例)、萎缩性胃炎组(407例)和胃癌组(135例)患者的表达,检测PGⅠ、PGⅡ水平,计算PGⅠ/PGⅡ的比值(PGR),分别建立两种方法诊断的cut-off值,评估其诊断价值,并分析两种方法检测的一致性。 结果 胃癌组PGⅡ高于萎缩性胃炎组、非萎缩性胃炎组和健康对照组(CLIA: P=0.027, 0.002, <0.001; ELISA: P=0.008, <0.001, <0.001),PGR低于萎缩性胃炎组、非萎缩性胃炎组和健康对照组(CLIA: P<0.001, <0.001, <0.001; ELISA: P<0.001, <0.001, 0.001)。CLIA法以PGⅡ>13.20且PGR≤6.67作为诊断胃癌的cut-off值,其敏感性和特异性为80.88%、71.64%;ELISA法以PGⅡ>18.10且PGR≤6.18作为诊断胃癌的cut-off值,其敏感性和特异性为80.14%、62.72%。两种方法诊断胃癌和萎缩性胃炎的一致性Kappa指数分别为0.706、0.569。 结论 PGⅡ和PGR可以作为胃癌诊断标志物,PGⅡ+PGR联合诊断萎缩性胃炎和胃癌敏感性和特异性较高,且CLIA和ELISA两种方法检测结果一致性良好。     

稳定表达人乳头瘤病毒16型E7癌基因HaCaT细胞系的建立及其研究

官颈癌是世界第二大妇女常见肿瘤[1].大量流行病学和分子生物学研究证实高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV),尤其是HPV16型在宫颈癌发生、发展进程中起关键作用[2-3].HPV16型E7基因编码蛋白与细胞转化和病毒复制的调控有关,在维持转化组织恶性表型的过程中发挥重要作用.本研究选择与官颈卜皮细胞相似的非肿瘤性人永生化表皮细胞(HaCaT)作为研究对象,通过真核表达载体pCMV将HPVl6 E7基因导人HaCaT细胞,使HPV16 E7在HaCaT细胞中表达,探讨其对HaCaT细胞的增殖、周期及HLA-Ⅰ类分子表达的影响.     

新鲜全血在不同血细胞分析仪比对试验中的评价

目的验证不同血细胞分析仪检测结果之间的可靠性和可比性,规范操作血细胞分析仪的比对试验。方法参照国际血液学标准化委员会(ICSH)及美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)文件,在仪器正常运行的情况下,评价各比对仪器的携带污染率、精密度和总精密度、差异百分率;分析比较20份抗凝新鲜全血中各项指标在不同血细胞分析仪之间的差异;每日取高、中、低3份新鲜血,在各仪器上平行检测,连续比对7日,观察各项指标与参考样机之间的相关性;分析比较仪器分类与手工分类的相关性;通过直线回归方程计算相对偏差,估计每台仪器各检测指标的试验误差。结果除白细胞分类外,各比对仪器携带污染率正常;各检测指标的变异系数以及在不同血细胞分析仪上的总体变异系数均＜5%;各检测项目的差异百分率符合ICSH制定的标准;20份样品在不同血细胞分析仪上检测的各项指标经两两比较的q检验(Newman Keuls法),各配伍组总体均数无统计学差异（P＞0.05）;连续7日测得的各项指标与参考样机之间的相关系数均大于0.97,其相对偏差在实验允许误差范围内。白细胞分类中,中性粒细胞和淋巴细胞在各比对仪器之间以及仪器与手工分类之间的相关性较好,而嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞和单核细胞,不论在各仪器还是仪器与手工分类之间,都存在较大的试验误差（P＜0.05,P＜0.01）。结论不同血细胞分析仪检测结果之间的比对试验急需规范化,同一科室的多台血细胞分析仪应定期进行比对,以保证检验结果的准确性。     

乙型肝炎病毒感染与宿主淋巴细胞HLA-Ⅰ类分子关系的研究

目的：检测慢性乙型肝炎、肝硬化及肝癌患者外周血淋巴细胞HLA Ⅰ、HLA Ⅱ类分子表达,并探讨其在宿主细胞免疫状态中的作用。方法：采用流式细胞术(FCM)检测51例正常人、58例慢性乙型肝炎、31例肝硬化、13例肝癌患者外周血淋巴细胞表面HLA Ⅰ、HLA Ⅱ类抗原的表达。结果：慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者外周血淋巴细胞HLA Ⅰ类分子平均荧光强度分别为335.80、309.78、114.04,均较正常对照组 (565.08) 降低（P<0.01）,且随病情加重逐步降低。正常对照、慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者HLA Ⅱ类分子表达率分别为32.50%、38.28%、42.21%、52.75%,其中肝硬化组和肝癌组与正常对照组差异有统计学意义（P<0.01）,慢性乙型肝炎组和正常对照组差异无统计学意义（P>0.05）。结论：慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞HLA Ⅰ类分子表达降低,肝硬化和肝癌患者降低更为显著,这与患者细胞免疫功能紊乱密切相关。     

特异性siRNA抑制HPV16 E7基因表达的实验研究

目的筛选针对HPV16 E7基因有效的siRNA,探讨其对HaCaT E7 细胞中HPV16 E7 mRNA及细胞表面HLA Ⅰ类分子表达的影响。方法采用化学法合成3条HPV16 E7特异性siRNA,应用转染试剂Lipofectamine2000将其转染入HaCaT E7细胞,采用实时荧光定量PCR（RT PCR）检测HPV16 E7 mRNA的表达,采用流式细胞术（FCM）检测细胞表面HLA Ⅰ类分子的表达。结果3条siRNA均能有效抑制HaCaT E7细胞中HPV16 E7的转录表达,以siRNA2作用效果最明显,抑制率达75%,细胞膜表面HLA Ⅰ类分子的表达明显上调,平均荧光强度(MFI)为130.18±1.07,高于空转染对照组（100.32±3.01）和非特异性siRNA对照组（100.82±2.87）。 结论化学合成的HPV16 E7特异性siRNA能有效抑制HaCaT E7细胞中E7 mRNA的表达,同时使细胞表面HLA Ⅰ类分子表达上调。