钩端螺旋体染色新方法及其临床应用

钩端螺旋体具有十分典型的形态结构,其轴丝的化学成份和功能均与细菌鞭毛相似,利用这些特点筛选出了改进的Blenden法及复红美兰鞭毛染色法进行染色,结果表明改进的 Blenden法,增加了热染处理,对钩体的染色较Blenden原法为佳,其阳性率可达92.0％,其形态具有典型的L.S,C形钩体,而复红美兰染色法,方法简便,试剂配制后可以长期保存,     

应用人—鼠杂交瘤技术制备抗绿脓杆菌人单克隆抗体的初步研究

The fusion of peripheral B lymphocytes from human immunized with P. aeruginosa polyvalent vaccine and mouse myeloma cell line SP2/0 was successfully performed. The rate of fusion was 74%(71/96) and the positive rate of antibody was 19.7%. Two hybridoma cell lines (A3 and F8) secreting McAb against P. aeruginosa were obtained after three times cloning by limiting dilution. The human chromosomes together with mouse chromosomes were discovered in karyotype assay of the hybrids. A3 and F8McAbs were human IgG by class determination. These MrcAbs could recognize 43 kd and 36 kd MW specific components of P. aeruginosa antigen by enzyme linked immuno-transfer blot technique.     

抗绿脓杆菌Ⅰ群10115株单克隆抗体的调理吞噬活性的检测

作者用人体单层中性粒细胞技术,体外检测了抗绿脓杆菌Ⅰ群10115株单克隆抗体(A_4和D_4)的调理吞噬活性,证明BALB/c小鼠 B细胞杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体可显著增强人体中性粒细胞对同型绿脓杆菌的吞噬。     

赖型钩体重组质粒pDJH_2亚克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

为了探讨ｐＤＪＨ２的１．９ｋｂ０１７株钩体ＤＮＡ片段可否作为钩体重组疫苗广谱保护性抗原的候选，采用重组ＤＮＡ技术，将ｐＤＪＨ２的１．９ｋｂＤＮＡ片段分别与ｐＴ７－７，ｐＲＳＥＴ系列重组，转化入大肠杆菌进行亚克隆，ＩＰＴＧ诱导表达。结果显示：阳性亚克隆ｐＤＪｔ．ｐＤＪｒＢ１能在大肠杆菌中高效表达；对其进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，可见６８ｋｄ和２３ｋｄ处出现新带，与钩体０１７株外膜同分子量蛋白带位置一致，免疫印迹（特异性抗０１７株外膜抗血清）在６８ｋｄ和２３ｋｄ处分别有印迹；用ｐＤＪｔ亚克隆重组质粒主动免疫豚鼠，可抵抗强毒力株攻击，表现出免疫保护作用。本实验结果提示：（１）ｐＤＪＨ２１．９ｋｂ重组ＤＮＡ片段能以不同质粒为载体，在不同大肠杆菌株中高效表达；（２）该重组ＤＮＡ片段表达产物——６８ｋｄ和２３ｋｄ蛋白，可能是赖型钩体０１７株外膜的保护性抗原。     

问号赖型钩体重组质粒rpDJt表达蛋白P68免疫原性的研究

为构建一种新型钩体重组亚单位疫苗，采用问号钩体ｒｐＤＪｔ基因的蛋白表达物Ｐ６８免疫动物，对其免疫原性进行研究。结果显示：在体外，Ｐ６８能与其特异性抗血清及赖型钩体死菌苗抗血清呈明显高效价Ａｇ－Ａｂ反应；在体内，Ｐ６８能激起明显的Ｔ淋巴细胞转化，ＴＨ细胞活化，ＩＬ－２，ＩＬ－６活性增加。提示：ｒｐＤＪｔ表达蛋白Ｐ６８能激起机体强有力的Ｔ－Ｂ细胞协同性特异性体液免疫反应，是致病性强毒力钩体重组亚单位疫苗好的候选抗原之一。     

~(125)碘标记单克隆抗体检测钩端螺旋体抗原在豚鼠体内的分布

作者用~(125)碘标记抗黄疸出血群赖型017株钩体的McAb(LB_1株IgG_2b)静脉注入钩体病肺弥漫性出血型豚鼠,证实钩体抗原主要分布在肝、肾、肺及脾器官内。以往抗血清抗体放射自显影实验在肺内钩体抗原很少,本结果表明肺内有不少钩体抗原(平均为82.2 16×10~3cpm/200mg),揭示了用单克隆抗体结合~(125)碘探讨钩体特异性抗原在肺组织分布,具有高特异性和敏感性。     

抗绿脓杆菌Ⅰ群10115株单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选和检定

作者用SP2/0骨髓瘤细胞与绿脓杆菌Ⅰ群10115株免疫的BALB/c鼠脾细胞融合获得三株连续分泌抗绿脓杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株C_3、D_1和D_3,对其中C_3杂交瘤株作了PHA、ELISA、IFA检定分析,证明能分泌高效价特异的单克隆抗体。PAGE结果出现一特殊区带。单克隆抗体亚类检定结果为IgM及IgG_1。     

致病性与非致病性钩端螺旋体蛋白电泳及单克隆抗体识别抗原的比较

作者用SDS—PAGE和Western blot分析了三株钩端螺旋体的全细胞蛋白电泳图谱及McAb识别的抗原分子。三株钩体在10％SDS—PAGE中均被分出40多条清晰的区带,其中致病性的问号钩端螺旋体赖型017株,秋季型606株蛋白电泳图谱的平均相似性为90％,与非     

应用单克隆抗体对小鼠绿脓杆菌感染保护作用的研究

本文报道用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗绿脓杆菌单克隆抗体(McAb)保护小鼠抗绿脓杆菌感染,获得满意的效果。用约3个LD_(50)菌量攻击,实验组存活率为80％,而对照组全部死亡,两者有显著性差异。实验揭示抗绿脓杆菌Ⅰ群10115株杂交瘤单克隆抗体(A_4和D_4混合剂)具有明显抗小鼠该型绿脓杆菌感染的保护作用。     

抗绿脓杆菌Ⅱ群10117株及Ⅳ群10119株McAb杂交瘤细胞株的筛选和鉴定

用SP2/0骨髓瘤细胞分别与绿脓杆菌Ⅱ群10117株和Ⅳ群10119株免疫BALB/c小鼠脾细胞融合,各获得三株连续分泌抗绿脓杆菌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株10117A_1、B_3、D_5及10119A_6、B_4、C_3。经染色体、IFA、ELISA 鉴定分析,证明是能分泌高效价McAb的杂交瘤细胞株。McAb类和亚类鉴定分别为IgG_? IgG_2b和IgM。交叉反应初步表明上述McAb具有较高的型特异性。