慢性乙型病毒性肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群CD27和CD28的表达

目的分析慢性乙型病毒性肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群CD27和CD28的表达,初步探讨其分化表型。方法采集分离健康人和慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC),利用多种荧光标记抗体标记细胞表面分子,再用流式细胞仪检测CD8 和CD4 T淋巴细胞表面CD27和CD28分子的表达。结果31例慢性乙型病毒性肝炎患者CD8 CD27 CD28 T细胞占CD8 T细胞(41.13±24.89)%,低于28例健康对照组的(71.93±14.47)%(P<0.05)。而CD8 CD27-CD28-T细胞占CD8 T细胞(42.16±10.98)%,显著高于健康对照组的(9.16±5.24)%(P<0.01)。慢性乙型病毒性肝炎患者CD4 CD27 CD28 T细胞(80.89±7.93)%和健康对照组(83.17±8.31)%比较,差异无统计学意义。结论健康人外周血T淋巴细胞以CD27 CD28 早期分化表型为主。而慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中不同的亚群分化特征又有所不同,CD4 T淋巴细胞的分化表型仍然以CD27 CD28 早期分化表型为主,而CD8 T淋巴细胞中早期分化表型明显减少,晚期分化表型(CD27-CD28-)显著增加。     

重组MHCⅠ类分子K^b-EGFP分子的构建及表达

目的 构建绿色荧光蛋白标记的MHCⅠ类分子K^b(K^b-EGFP融合蛋白)，并在哺乳动物细胞中获得功能性表达。方法 RT-PCR的方法获得小鼠MHCⅠ类分子K^b cDNA，克隆入真核表达载体pEGFP-N1中EGFP分子的上游，脂质体转染COS-7细胞，G418加压筛选获得抗性重组细胞。荧光显微镜下观测重组分子的表达及胞内定位情况。结果 分子克隆的方法获得了预期的重组质粒，质粒经DNA序列测定证实阅读框无误，转染COS-7细胞后的抗性克隆胞浆内可以观察到明亮的绿色荧光，特征性地分布于细胞质膜，及核周、膜下的囊泡结构中。结论 所构建的K^b-EGFP融合蛋白在细胞内表达后具有MHCⅠ类分子的特征性分布，提示该重组分子具有野生型MHCⅠ类分子的生物学特性和胞内分布特征，为进一步深入研究MHCⅠ类分子胞内动态分布及分子功能提供了良好的细胞和分子模型。     

抗原NY-BR-1的HLA-A2限制性CTL表位的初步鉴定

目的：鉴定乳腺癌分化肿瘤抗原NY-BR-1的HLA-A2限制性CTL表位。方法：采用量化基序法初步预测NYBR-1的HLA-A2限制性CTL表位；分子动力学方法进一步筛选量化基序法中评分最高的3个表位肽；HLA-A2亲合力鉴定预测的结果。结果：分子动力学和HLA-A2亲合力实验均证明，在量化基序法预测的3个候选CTL表位中，NY-BR-11043-1051与HLA-A2亲合力最佳。结论：NY-BR-11043-1051可能为乳腺癌分化抗原NY-BR-1的HLA-A2限制性CTL表位。     

FLK1265-2493与C3d3融合基因真核表达质粒的构建及表达

目的 构建FLK1265-2493与C3d3融合基因真核表达质粒，并在体外进行表达和鉴定。方法采用PCR技术扩增FLK1265—2493片段，将该片段插入到pMDT-18载体中后，亚克隆至真核表达载体pSG．SS．C3d3．YL，构建FLD1265-2493与C3d3融合基因表达质粒。经限制性酶切鉴定和DNA序列测定结果证实后，将重组质粒pSG．SS．FLK1265—2493．C3d3．YL转染Hela细胞，检测其体外表达。结果免疫印迹和免疫细胞化学分析结果分别表明转染细胞上清液和胞浆内均有目的分子的存在。结论构建的DNA疫苗可在真核细胞内正确表达，这为进一步的动物实验打下了基础。     

一种新Pre-S(2)合成肽CTL表位糖基化方法

目的 为研究ＨＢＶ Ｐｒｅ－Ｓ（２）上糖基化（Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）结构差异（包括位置、种类、数量和糖链长度差异）与其生物学活性关系,建立一种Ｎ－或Ｏ－连接糖基化以外的合成肽α－和ε氨基糖基化方法。方法 用化学方法将单、双和聚糖共价连接在Ｐｒｅ－Ｓ（２）合成肽上的含α－和ε－氨基的氨基酸残基上,即具体连接在肽Ｎ端Ｍ１的α－氨基和Ｋ１６的ε－氨基上。此二氨基酸残基位于或接受Ｐｒｅ－Ｓ（２）上公     

含CpG寡聚脱氧核苷酸对肿瘤抗原肽P815AB的免疫佐剂效应研究

目的 以肿瘤抗原Ｐ８１５ＡＢ抗原肽为模式抗原,研究ＣｐＧ寡聚脱氧核苷酸（ＣｐＧ ＯＤＮ）对该肿瘤抗原表位肽的免疫佐剂效应。方法 用［＾３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法研究ＣｐＧ ＯＤＮ体外刺激小鼠脾细胞增殖效应,用ＥＬＩＳＰＯＴ和［＾３Ｈ］－ＴｄＲ释放法检测不同构成形式的疫苗在体诱发特异性ＣＴＬ应答的效应。结果 ＯＤＮ１８２６在体外可刺激小鼠脾细胞显著增殖,经４次免疫,在“肽＋ＯＤＮ１８２６＋ＩＦＡ”组中,４     

小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原P1A的克隆与表达

目的 克隆小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５细胞株的ＰＩＡ基因以制备肿瘤ＤＮＡ疫苗,方法 用ＲＴ－ＰＣＲ方法制备ＰＩＡ基因,以哺乳细胞高效表达质粒ｐＣＩ－ｎｅｏ为载体,构建重组ＤＮＡ疫苗。重组体用克隆位点上游和下游的Ｔ７和Ｔ１３启动了序列为测序引物,用自动测序仪测定鉴定克隆的正确性。再将鉴定过的重组质粒用磷酸钙法转化２９３细胞,用ＲＴ－ＰＣＲ法鉴定转化细胞中ＰＩＡ基因的表达。结果 正确构建了ＰＩＡ／ｐＣＩ－ｎ     

中西医结合加体外碎石治疗肾输尿管结石48例

20 0 2年 3月以来 ,我们对肾输尿管结石行体外冲击波碎石 (ESWL)的患者 ,在西医总攻疗法的基础上加用三金汤加减治疗 ,效果满意 ,现报道如下。1　临床资料治疗组 4 8例 ,男 30例 ,女 1 8例 ;年龄 1 8～ 6 2岁 ,平均年龄 34.2± 2 .5岁 ;病程 2～ 1 0 8d,平均 30 d;肾结石 6例 ,输尿管结石 1 2例 ,肾结石合并输尿管结石 30例 ,合并肾积水 4 5例 ;结石直径 0 .6± 2 .5 cm。对照组 32例 ,男 2 0例 ,女 1 2例 ;年龄 1 4～ 5 6岁 ,平均年龄 2 9.2± 2 .5岁 ;病程 4～ 96 d,平均2 7d;肾结石 9例 ,输尿管结石 1 0例 ,肾结石并输尿管结石 1 3例 ,…     

痰热清注射液治疗手足口病88例

手足口病（Hand—foot—mouth disease，HFMD）是儿科常见传染病。我院2009年3月-2010年7月应用痰热清注射液治疗手足口病88例．取得较好疗效，现报告如下。     

2D-QSAR和HQSAR研究6-O-芳基酮内酯衍生物的定量构效关系

酮内酯作为第3代大环内酯类抗生素,不仅对耐药菌有良好的活性,而且克服了诱导耐药性,成为了大环内酯类药物的研究热点。针对6-O-芳基酮内酯衍生物,本文运用二维定量构效关系(2D-QSAR)和分子全息定量构效关系(HQSAR)两种方法,以49个化合物作为训练集构建构效关系模型。所建2D-QSAR和HQSAR模型的相关系数r²分别为0.849和0.975,交叉验证系数q²分别为0.803和0.926。通过测试集验证表明所建模型均具有较好的预测能力(r²分别为0.782和0.878)。研究结果可为大环内酯类抗生素药物进一步的优化设计提供理论指导。