受体型酪氨酸磷酸酶的抗体制备与细胞定位研究

PCP 2是王红阳教授等于 1996年在胰腺癌细胞株中克隆并鉴定的受体型蛋白酪氨酸磷酸酶 (R PTPs)家族的新成员[1] ,可通过近膜区与重要的肿瘤相关基因 β catenin相互作用。cadherins catenins复合物与肌动蛋白细胞骨架作用 ,参与对细胞粘附的调节 ,这些粘着结构的异常已被证明可导致胚胎发育畸形 ,并与肿瘤、心血管系统疾病等密切相关[2 ,3 ] 。我们对PCP 2近膜区进行原核系统的表达 ,制备抗PCP 2多克隆抗体 ,以研究PCP 2与cadherins catenins复合物的相互作用及其在细胞粘附信号转导中的作用机制。一、材料和方法1.材料 :载体pGEX 5…     

可溶性PCP-2EC/Fc蛋白在神经粘附和轴突生长中的促进作用

为了探讨酪氨酸磷酸酶PCP- 2在神经粘附和轴突生长中的作用,本实验构建了PCP- 2胞外区与人免疫球蛋白IgGFc融合蛋白表达载体,在哺乳动物细胞中表达并纯化PCP- 2EC/Fc蛋白,进行荧光球聚集实验,然后以PCP 2胞外区融合蛋白作为基质,观察其对原代培养神经元的粘附和轴突生长的影响。结果显示,PCP- 2胞外区可同源粘附,对原代培养神经元的粘附和轴突生长有促进作用,提示PCP -2作为同源介导的神经粘附分子,可能在维持正常神经的功能和促进损伤神经的修复中发挥重要作用。     

基于最大熵模型和地理信息系统的苍术生态适宜性及品质区划

目的：对全国范围内的野生苍术进行生态适宜性和品质区划,为苍术的栽培选址和优质生产提供科学指导。方法：采用文献搜集的方法收集近30年与苍术分布和挥发油含量相关的研究数据,用最大熵模型（MaxEnt）和地理信息系统（GIS）对野生苍术生态适宜性进行区划,并对苍术的适宜种植区和品质形成区进行预测。结果：1）野生苍术最适宜分布区主要集中在燕山山脉、太行山脉、陕北高原南部、秦岭山脉、伏牛山区、大巴山区、桐柏山区、大别山区、茅山周边及黄山周边地区;2）合格野生苍术（苍术素含量>0.30%）最适宜分布区集中在湖北省中部的大洪山、河南省与湖北省交界处的桐柏山和大别山区、安徽省中部的张八岭和江苏省南部的茅山山区至上海的大部分地区,其中大别山区的野生苍术品质差异较大。结论：MaxEnt和GIS对野生苍术生态适宜性分布区预测结果可靠有效。生态环境因子并不是影响苍术品质形成的唯一决定因素,生产合格苍术药材需要有优良的种质资源,以及合适的生态种植环境,如林下、林缘或田间作物套种等。     

HCCA1在原发性肝癌中的表达及其意义

目的 对近期克隆的新基因HCCA1与肝癌的相关性进行研究。方法 采用Northern杂交分析HCCA1 mRNA在肝癌中的表达,应用制备的特异性抗体检测其蛋白水平的表达,结合临床及病理学资料进行分析。结果 65例HCC患者在其癌组织中HCCA1 mRNA表达的检出率为90.8％（59／65）,其中91.5%(54/59)患者HCCA1 mRNA在肝癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织,有13.8%(9/65)患者在癌旁组织中检测到较弱的HCCA1 mRNA的表达,86.2％（56／65）患者在癌旁组织中未检测到HCCA1 mRNA的,与病理指标的相关性分析表明,HCCA1 mRNA在Ⅲ-Ⅳ级肝癌中的表达水平明显高于Ⅰ-Ⅱ级肝癌,有门脉癌栓形成者的表达水平明显高于无癌栓形成者。免疫组织化学在蛋白水平上证实HCCA1在肝癌中的高表达。结论 HCCA1是一个新的肝癌相关基因,可能在肝癌的浸润和转移中起重要作用。     

抑癌基因PTEN的表达对大肠癌细胞转移侵袭能力的影响

目的探讨抑癌基因PTEN的表达大肠癌细胞转移侵袭能力的影响.方法1.利用western blot法检测不同转移潜能的大肠癌细胞系内PTEN蛋白的表达水平,说明PTEN蛋白的表达对大肠癌细胞转移潜能的影响,2.用脂质体作载体,将PTEN基因转染大肠癌细胞株LOVO后,采用计数细胞悬液加到粘附底物后20 min和120 min的细胞贴壁数用以测定细胞粘附能力,采用Costar的浸润小室检测PTEN基因转染前后细胞的浸润能力.结果1.转移潜能高的LOVO细胞PTEN的表达量显著低于转移潜能较低的HT-29,LS-174T,2.未转染细胞(LOVO)、转染pcDNA3.0-PTEN的细胞(LOVO/pcD-NA3.0-PTEN)在特异性粘附底物(Laminin)上20 min时贴壁率分别为18.6%±1.4%和13.9%±0.48%(P＜0.05),120min时贴壁率分别为71.2%±2.5%和56.0%±1.6%(P＜0.05),3.采用Costar的浸润小室对LOVO、LOVO/pcDNA3.0-PTEN细胞的浸润能力分析结果显示细胞悬液静置培养6 h后,对照细胞LOVO浸润穿透多聚碳膜的细胞数为11.7±1.74个,LOVO/pcDNA3.0-PTEN细胞穿透多聚碳膜的细胞数为7.5±1.58个(P＜0.05).结论在肿瘤细胞内抑癌基因PTEN的表达与大肠癌的转移侵袭行为密切相关.     

老年阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者血清载脂蛋白及脂质过氧化分析

目的：检测睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）老年患者血清载脂蛋白及脂质过氧化指标,分析其与患者疾病严重程度的关系及临床意义。方法收集2010～2012年疑似 OSAHS 老年患者,经多导生理记录仪睡眠监测（PSG）确诊102例。分为轻、中度 OSAHS 组38例,重度 OSAHS 组64例,另选择健康体检者44例作为健康对照组。每例患者均进行 PSG 监测,并分别检测老年患者血清中载脂蛋白 A1、B 水平,载脂蛋白 B／载脂蛋白 A1比值,脂类过氧化物（LPO）、超氧化物歧化酶（SOD）水平,TXA2与 PGI2的水平。结果与健康对照组比较,OSAHS 组 apoB 、apoB／apoA1比值水平、LPO 、TXA2明显升高,而 apoA1水平、SOD 、PGI2降低（P＜0．05）;与轻、中度 OSAHS 组比较,重度 OSAHS 组 apoB 、apoB／apoA1比值水平明显升高（P ＜0．01）,而 apoA1水平、SOD 、PGI2降低（P＜0．05）。结论 OSAHS 患者血脂代谢异常的严重程度与其病情严重程度相关。     

细胞因子IL-12在哮喘小鼠发病机制中的作用

目的探讨白细胞介素-12(IL-12)在哮喘小鼠发病机制中的作用及对气道炎症的影响。方法 65只小鼠随机分为对照组(A组)、哮喘组(B组)、重组白细胞介素-12(rm IL-12)组(C组)和IL-12基因敲除组(D组),以卵白蛋白(OVA)致敏和激发制备哮喘模型。C组在每次激发前30 min给予rm IL-12腹腔注射,D组在激发前1 d给小鼠植入含有抗IL-12多克隆抗体的缓释泵,A组小鼠在末次激发后24 h处死,其余三组小鼠在末次激发后的1 d、2 d、4 d、7 d分别处死。摘眼球取血进行血浆一氧化氮(NO)和免疫球蛋白E(Ig E)的检测。收集各组小鼠的支气管肺泡灌洗液(BALF),ELISA法检测其上清中白细胞介素-10(IL-10)、IL-12、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。离心后的细胞沉淀行白细胞总数和嗜酸性粒细胞(EOS)分类计数;剪下结扎右肺下叶用于HE染色。结果(1)细胞计数:小鼠BALF中的细胞总数和EOS百分比,B组明显高于A组(P0.05),C组明显低于B组(P0.05),D组较B组明显升高(P0.05)。(2)ELISA检测:与A组相比,B组小鼠BALF中IL-10、IL-12水平明显降低(P0.05),TNF-α、NO、Ig E水平明显升高(P0.05)。与B组相比,C组小鼠BALF中IL-10、IL-12水平明显升高,TNF-α、NO、Ig E水平明显降低;D组小鼠TNF-α、NO、Ig E水平明显升高,IL-10、IL-12水平明显降低;于1 d、2 d、4 d、7 d差异均有统计学意义(P0.05)。(3)肺组织病理改变:A组小鼠HE染色未见异常;B组小鼠肺泡间隔及小血管周围可见大量炎性细胞浸润;C组小鼠的炎性细胞浸润较B组缓解;D组小鼠部分可见小气道管腔完全闭塞,炎性细胞浸润较B组明显加重。结论 rm IL-12能够明显抑制哮喘小鼠炎症细胞的浸润,同时降低炎症因子TNF-α、NO和Ig E的表达,促进抑炎因子IL-10的表达,从而在哮喘发病过程中起到保护作用。     

MiR-429调节肝细胞癌炎性微环境、分化及增殖

目的 观察miR-429对人肝细胞癌(HCC)炎性浸润、分化以及增殖的影响.方法 利用免疫磁珠法分选人肝癌细胞系HCCLM3细胞,得到EpCAM (CD326)阳性以及阴性的细胞.对两种细胞分别进行miR-429的干扰(AntagomiR-429)与过表达(miR-429mimic),通过流式细胞技术、real-time PCR法检测其干预效果.利用CCK-8法检测miR-429过表达及干扰肝癌细胞系的增殖活性并绘制生长曲线.分别利用干扰miR-429的EpCAM阳性HCCLM3细胞及其对照、过表达miR-429的EpCAM阴性HCCLM3细胞及其对照进行NOD-SCID小鼠皮下荷瘤实验,通过免疫组织化学法检测成瘤后癌组织内炎性细胞浸润情况及增殖分化相关蛋白的表达情况.结果 干扰miR-429的表达能降低EpCAM阳性肝癌细胞的比例,反之,过表达miR-429能促使EpCAM阴性肝癌细胞转化为EpCAM阳性细胞.过表达miR-429可增强EpCAM阴性肝癌细胞在小鼠体内的成瘤能力,而干扰miR-429表达可降低EpCAM阳性细胞成瘤率;与对照相比,过表达miR-429的瘤体组织中出现大量的巨噬细胞,提示miR-429可招募炎性细胞浸润从而促进肿瘤发展;AFP染色提示miR-429与肿瘤的低分化有关;Ki67染色结果证实miR-429在体内能够促进肿瘤组织生长.与对照相比,miR-429在体外也可以促进肝癌细胞的增殖,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-429能够在体外、体内水平影响EpCAM阳性细胞的比例,显著影响肝肿瘤微环境、促进肿瘤细胞的增殖活性并降低其分化潜能.     

慢性阻塞性肺疾病吸烟病人纤维蛋白原Bβ-249C/T基因多态性

目的探讨纤维蛋白原（Fg）Bβ-249C/T基因多态性与慢性阻塞性肺疾病及吸烟的相关性。方法慢性阻塞性肺疾病急性加重期住院病人80例作为病例组,同期健康体检者100名作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血浆Fg水平,采用放射免疫法测定IL-8、TNF-α水平;采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术分析FgBβ-249C/T位点基因多态性,统计基因突变率。结果FgBβ-249C/T位点存在基因多态性。2组中吸烟者Fg、IL-8、TNF-α水平和FgBβ-249C/T位点基因型突变比例及CT+TT型Fg水平均明显高于不吸烟者（P < 0.01）,且病例组吸烟者Fg、IL-8、TNF-α水平、FgBβ-249C/T位点基因型突变比例及CT+TT型Fg水平均明显高于对照组吸烟者（P < 0.01）。结论吸烟与FgBβ-249C/T基因多态性及慢性阻塞性肺疾病存在一定关联性,选择性Fg Bβ-249C/T基因多态性位点的检测有助于临床上对慢性阻塞性肺疾病易患人群的筛查。     

不同严重程度OSAHS伴慢阻肺对患者认知功能的影响

目的探讨不同严重程度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)伴慢阻肺对患者认知功能影响。方法入住的116例OSAHS伴慢阻肺患者,依据睡眠呼吸暂停低通气指数(AHI)分为轻、中、重3组。进行简易智能精神状态检查量表(MMSE)检测,分析各组患者认知障碍发生情况。结果重度OSAHS伴慢阻肺组MMSE总分明显低于轻、中度OSAHS伴慢阻肺组,在记忆力、注意力和计算力、回忆能力得分明显低于轻、中度OSAHS伴慢阻肺组,差异有显著性统计学意义(P0.05);轻、中度OSAHS组MMSE总分及在记忆力、注意力和计算力、回忆能力得分比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论重度OSAHS伴慢阻肺患者较轻、中度OSAHS患者认知功能明显下降,主要表现在记忆、计算、回忆方面的损害。