运用蛋白质组学技术研究EB病毒诱导鼻咽癌细胞CNE2表达变化的蛋白质

【目的】寻找并鉴定CNE2细胞在EB病毒感染后表达发生变化的功能蛋白质，为阐明该病毒诱导鼻咽上皮细胞发生生物学变化的作用机制提供线索。【方法】分别从EB病毒感染后的CNE2细胞和未经感染的CNE2细胞中抽提总蛋白质，通过双向电泳分离。运用软件比较分析上述两组的蛋白质表达图谱，寻找表达有差异的蛋白质点。从凝胶上切下差异蛋白质点，通过基质辅助激光解吸，离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。【结果】图像分析显示，EB病毒感染后的CNE2细胞和未经感染的CNE2细胞之间存在一些明显差异的蛋白质点。通过MALDI-TOF-MS成功地鉴定了其中4个蛋白质点，EB病毒感染CNE2细胞后蛋白质GRP78和硫氧还蛋白过氧化物酶1表达上调，蛋白质肌动蛋白胞浆组分2和蛋白酶体。链表达下调。【结论】EB病毒感染鼻咽上皮细胞后引起生物学变化的分子机制可能包括：①诱导细胞大量合成蛋白质以促进增生．同时上调蛋白质GRP78的表达而抗凋亡；②提高细胞内氧化状态而诱导蛋白质硫氧还蛋白过氧化物酶1的表达，并可能通过该蛋白质调控NF-κB和AP-1来影响细胞生长。     

粉尘螨主要变应原Derf1基因的改造与可溶性表达

目的在大肠杆菌中提高粉尘螨1类变应原（Derf1）的可溶性表达。方法用RT-PCR方法扩增得到Derf1的全长序列与成熟肽序列（mDerf1）；以已知DerP5基因的前导序列替换Derf1前导序列和原酶序列，重新构建出rDerf1基因；将上述3个基因分别克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中表达，经Western-blot对三者的表达产物进行分析鉴定。结果Western-blot表明，pGEX-Derf1与pGEX-mDerf1的表达产物分别为分子量约63000与51000的重组蛋白质，重组蛋白质主要存在于细胞裂解液的沉淀中。pGEX-rDerf1大量表达了可溶性目的蛋白质，分子量约53000，并被成功地分离纯化。以上三种表达产物均可被鼠抗GST抗体与螨过敏患者血清特异地识别。结论表达了含Derf1，mDerf1与rDerf1的三种GST融合蛋白质，它们均具免疫反应性，纯化获得了GST-rDerf1融合蛋白质，为后期的诊断及治疗奠定了基础。     

乙型肝炎病毒核酸定量检测中不确定度的研究

目的研究应用实时荧光定量PCR（Fluorescence Quantitative PCR,FQ-PCR）开展乙型肝炎病毒（Hepatitis Bvirus,HBV）核酸定量检测中的测量不确定度。方法通过实时荧光定量PCR进行乙型肝炎病毒核酸定量检测的实验分组设计与数据处理分析,计算分析该检测方法不同来源的测量不确定度值。结果对3组不同水平浓度值样本来源的数据采用两种方法进行统计分析,QDNA的组标准差远远大于LGQDNA的标准差,初始浓度数值经过对数转化后离散程度降低,统计平均值也发生了偏离。LGQDNA为3.465、4.927和6.018的样本,其浓缩过程来源的相对不确定度分别为0.020、0.019和0.009;LGQ无偏估计在3.706、6.750的样本的核酸提取来源相对不确定度分别为0.016和0.009;数据分析来源的LGQ不确定度为0.000～0.008;热循环仪来源的LGQ不确定度为0.002～0.008。结论使用核酸浓度值QDNA与使用其对数值LGQDNA进行数据统计分析的结果存在差异;标本制备过程中的浓缩和DNA提取是实时荧光定量PCR进行HBV核酸定量检测时测量不确定度的重要来源,标本制备环节是影响该项检测的关键因素,包括试剂、方法和操作者的准确操作能力。     

脑宁治疗中风的作用机制实验研究

脑血肿模型比较接近临床脑出血的病理特征，以干湿重法检测脑组织水份，能直接反映脑水肿存在与否和程度，并可同时检测脑组织中Na 、K 、Ca 、Mg 含量。脑水肿时伴有电解质紊乱。脑血肿时，BBB通透性增高，有EB透过BBB入脑。脑宁的应用较好地促进了血肿的吸收，增强了胶质细胞的吞噬消化作用，降低脑水肿及BBB通透发性，对脑水肿有较好的防治作用。     

广西二孩父母对预防接种知识和服务需求的调查分析

目的了解广西二孩父母对预防接种认知、态度和行为,以及对预防接种的需求,为提高免疫规划工作质量提供依据。方法采用随机抽样方法,在广西壮族自治区115个县区抽取3891名二孩父母使用统一设计的问卷进行调查。结果二孩父母中98.46%知道小孩需要接种疫苗,98.74%知道国家免疫规划疫苗是免费接种,94.50%知道接种疫苗可以预防乙型病毒性肝炎,94.60%知道孩子上学时需要查验预防接种证,99.51%认为孩子接种疫苗是必要的,90.44%会主动了解孩子预防接种完成情况,78.46%会主动按照预防接种证预约日期带儿童进行接种,97.02%在参与预防接种过程中最关注的是疫苗安全,75.10%希望在预防接种过程中减少排队时间。结论广西二孩父母对预防接种认知、态度和行为有较好的水平,但仍应根据不同儿童父母对预防接种知识的知晓情况,开展有针对性的预防接种宣传教育,提高健康教育工作效果;各地要提高预防接种服务质量,为群众提供满意的预防接种服务。     

神农消颗粒对荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究

神农消颗粒由湖北省黄冈市安康医院研制(专利号:ZL200410013488.8),临床应用于肝癌、肺癌等恶性肿瘤的治疗,取得了较好的疗效.笔者应用S180实体瘤和H22腹水瘤小鼠模型,观察了神农消颗粒的抑瘤效果.现报道如下.     

脂血标本的核酸定量检测效果评价

目的评价脂血标本的核酸定量检测实时扩增曲线，以探讨此类标本进行HBVDNA定量检测的可接受性。方法建立扩增曲线观察法、扩增效率Grubbs离散值分析法及扩增效率置信区间估计法，评价接收脂血标本进行荧光定量PCR法HBVDNA定量检测的有效性。结果该2批次扩增的各样品扩增效率数值未发现离散值，3例脂血标本的扩增效率在同批样品扩增效率的90％置信区间内，与扩增曲线观察法结果一致。结论3种评价方法均对修正标准操作程序以接收该类标本提供了支持性的依据。     

粉尘螨主要变应原Derf1基因的改造与可溶性表达

目的 在大肠杆菌中提高粉尘螨1类变应原(Der f 1)的可溶性表达.方法 用RT-PCR方法扩增得到Der f 1的全长序列与成熟肽序列(mDer f 1);以已知Der P 5基因的前导序列替换Der f 1前导序列和原酶序列,重新构建出rDer f 1基因;将上述3个基因分别克隆人原核表达载体pGEX-4T-1中表达,经Western-blot对三者的表达产物进行分析鉴定.结果 Western-blot表明, pGEX-Der f 1与pGEX-mDer f 1的表达产物分别为分子量约63000与51000的重组蛋白质,重组蛋白质主要存在于细胞裂解液的沉淀中.pGEX-rDer f 1大量表达了可溶性目的 蛋白质,分子量约53000,并被成功地分离纯化.三种表达产物均可被鼠抗GST抗体与螨过敏患者血清特异地识别.结论 表达了含Der f 1, mDer f 1与rDer f 1的三种GST融合蛋白质,它们均具免疫反应性,纯化获得了CST-rDer f 1融合蛋白质,为后期的诊断及治疗奠定了基础.     

雷酚内酯的抗炎免疫药理作用

雷酚内酯（triptophenolideTN）是由雷公藤醋酸乙酯提取物中分离的一种白色片状结晶。口服TN能显著抑制二甲苯及巴豆油所致急性炎症；且可使小鼠肾上腺VitC含量明显降低。TN可明显抑制DNCB和BSA诱导的迟发超敏反应；并可使大、小鼠外周血ANAE＋淋巴细胞明显减少，显示TN对T淋巴细胞的免疫功能有抑制作用，TN还能显著提高大、小鼠血清总补体含量及抑制循环中1gG的形成量。其对小鼠腹腔Mφ吞噬功能呈现小剂量促进、大剂量抑制的双向作用。